一种特异性亲和白介素-10的亲和多肽及其用途制造技术

本发明专利技术公开了一种特异性亲和白介素

【技术实现步骤摘要】
一种特异性亲和白介素
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10的亲和多肽及其用途


[0001]本专利技术属于生物医学领域的一种炎症制药的亲和多肽及其用途，具体是涉及了一种能够特异性亲和白介素
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10(IL
‑
10)的新型亲和多肽及其用途。

技术介绍

[0002]噬菌体展示技术是一种分子生物学技术，通过基因工程将外源肽或蛋白质基因插入到噬菌体外壳蛋白基因中，由外源基因编码的肽或蛋白质以融合蛋白的形式存在于噬菌体表面。展示的肽或蛋白质可以保持相对的空间结构和生物学活性，能够结合并识别靶分子。
[0003]白介素
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10(IL
‑
10)是一种抗炎细胞因子，在炎症的抑制和消退中发挥至关重要的作用。它能够抑制炎症因子的合成与释放，如：IL
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1、IL
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6、IL
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8、TNF
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α，并增强抗炎性因子释放，如IL
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1受体拮抗剂和溶解性TNF
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α受体。此外，它还可以起到抑制单核巨噬细胞的抗原递呈作用。
[0004]针对炎症性肠病(IBD)，现有治疗方法可以分为两大类：一类是非手术性的IBD治疗，主要是一些传统药物和新兴生物制剂，另一类是手术治疗。传统的药物治疗手段效果有限、副作用高且剂量依赖性明显，而生物制剂价格昂贵、不良反应多。这些药物存在着对部分患者无效，还有部分患者治疗中途失效的问题。可能产生的免疫抑制反应会导致感染、神经系统疾病、恶性肿瘤等不良事件的发生，进一步增加了疾病的复杂性。此外，停药之后患者的疾病复发率比较高。而手术治疗一方面易于复发，另一方面存在严重术后并发症。因此，寻找新的治疗途径已成为当务之急。

技术实现思路

[0005]为了解决
技术介绍
中存在的问题，本专利技术提供了一种对IL
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10具有高度亲和性的新型多肽序列，能够特异性募集IL
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10，该多肽可用于炎症性疾病的抑制与消退以及IL
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10缺乏相关疾病的治疗。
[0006]本专利技术采用以下技术方案。
[0007]一、一种亲和多肽，所述多肽的氨基酸序列选自SEQ ID No.1～SEQ ID No.5之一。
[0008]所述的氨基酸序列分别为：HSGSSVFAQPVM；FPWPTPHWWHRS；HPSRRRDGNLPL；GHWKHHFRPPAP；EMFRELKNWTAA。如下表：
[0009][0010]二、一种生物活性物质，包含多肽，包括但不限于化学偶联的化合物，改性的药物等。
[0011]该生物活性物质能够发挥所述亲和多肽相同的功能，即募集IL
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10蛋白。
[0012]三、一种多聚核苷酸序列，能够编码所述的多肽，或者能够编码所述的生物活性物质。
[0013]四、一种复合材料，包含多肽，也为但不限于纳米颗粒、工程化的噬菌体、高分子材料等接枝多肽的载体材料。
[0014]该复合材料能够发挥所述亲和多肽相同的功能，即募集IL
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10蛋白。
[0015]所述亲和多肽、所述生物活性片段、所述多聚核苷酸序列或者所述复合材料在制备用于炎症的生物医学材料和药物中的应用。具体是在制备用于特异性释放抗炎细胞因子IL
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10的生物医学材料和药物中的应用。
[0016]所述的炎症为炎症性肠病、银屑病、关节炎等炎症性疾病中的炎症。
[0017]本专利技术得到的IL
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10亲和肽对IL
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10具有很高的亲和性，能够特异性募集IL
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10，抑制促炎细胞因子的释放，提高抗炎细胞因子的水平，进而对炎症起到抑制和消退作用，进而在炎症组织中抑制过度激活的免疫反应。在多种炎症性疾病，例如：炎症性肠病、银屑病、关节炎等的治疗方面具有广泛的应用前景。
[0018]本专利技术以IL
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10蛋白为靶标得到了特异性亲和IL
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10的多肽序列。针对目前已有生物制剂存在疗效有限和副作用明显等缺点，所述多肽在生物医学领域上，本专利技术所涉及的多肽具有特异性亲和IL
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10蛋白的能力，为抑制炎症反应及治疗IL
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10缺乏相关的疾病提供了新的选择。
[0019]本专利技术采用以下技术方案：
[0020]1)利用Ph.D.
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12
TM
噬菌体多肽文库对IL
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10进行筛选，获得能够与IL
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10特异性亲和的噬菌体；
[0021]2)将步骤(1)中的IL
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10亲和噬菌体进行DNA测序，根据相应的DNA序列推导出亲和多肽的氨基酸序列；
[0022]3)验证步骤(2)中得到的多肽对IL
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10的亲和能力。
附图说明
[0023]图1为实施例1中利用Ph.D.
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12
TM
噬菌体多肽文库对IL
‑
10蛋白进行4轮筛选的过程
中，每一轮筛选的输出与投入比的对数值。
[0024]图2为实施例2中对DNA测序结果进行分析和翻译后，得到的一系列频次较高的序列。
[0025]图3为实施例3中通过酶联免疫吸附实验检验展示有5种不同多肽序列的噬菌体对IL
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10蛋白的亲和能力。
具体实施方式
[0026]下面结合实施例和附图对本专利技术作进一步的详细说明，以下实施例是本专利技术的优选实施例而本专利技术并不局限于以下实施例。凡在本专利技术的精神和原则之内，所作的的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本专利技术的保护范围之内。
[0027]本专利技术的实施例如下：
[0028]实施例1：利用Ph.D.
‑
12
TM
噬菌体多肽文库，针对IL
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10蛋白进行四轮筛选。
[0029]1)包被IL
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10蛋白：将150μL IL
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10蛋白溶液加入24孔板中，将孔板放入湿盒，在4℃的摇床上孵育过夜；
[0030]2)封闭：将板子中的液体吸掉，将板倒置在无菌纸巾上用力甩拍取出残余溶液。再在孔板中加满5％BSA封闭液，室温轻摇2小时；
[0031]3)去背景：取一个新的24孔板，加入Ph.D.
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12
TM
噬菌体多肽文库，室温下在摇床中孵育1小时；
[0032]4)洗涤：吸除封闭液，将板倒置在无菌纸巾上用力甩拍取出残余溶液，再用PBST缓冲液快速洗板6次，每次均旋转以使孔板底部和边缘均被洗到。倾倒去除缓冲液，将板倒置在无菌纸巾上用力甩拍取出残余溶液；
[0033]5)结合：将步骤3)中的噬菌体溶液加入到步骤4)中处理后的孔板里，在摇床上孵育1小时；
[0034本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种亲和多肽，其特征在于：所述多肽的氨基酸序列选自SEQ ID No.1～SEQ ID No.5之一。2.一种生物活性物质，其特征在于，包含权利要求1中的多肽，包括但不限于化学偶联的化合物，改性的药物等。3.一种多聚核苷酸序列，其特征在于，能够编码权利要求1所述的多肽，或者能够编码权利要求2所述的生物活性物质。4.一种复合材料，其特征在于，包含权利要求1中的多肽，也为但不限于纳...

【专利技术属性】
技术研发人员：毛传斌，蒋洪琳，杨明英，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：