一种干腌火腿来源抗氧化肽复合物及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种干腌火腿来源抗氧化肽复合物，其特征在于：包含42个分子量＜3.0kDa的肽段，其中占比最高的三个肽段分别为占比23.56％的生物活性肽1，占比13.64％的生物活性肽2，占比12.98％的生物活性肽3，所述的生物活性肽1的氨基酸序列为：LGEHNIDVLEGNEQFINAAK，所述的生物活性肽2的氨基酸序列为：GHYTEGAELVDSVLDVVR，所述的生物活性肽3的氨基酸序列为：DLVILLYETALLSSGFSLEDPQTHANR。该抗氧化肽复合物能够耐受胃肠道消化酶的消化，可有效清除ABTS

【技术实现步骤摘要】
一种干腌火腿来源抗氧化肽复合物及应用


[0001]本专利技术涉及功能性食品领域，具体涉及一种干腌火腿来源具有抗氧化功能的生物活性肽复合物及应用。

技术介绍

[0002]生物活性肽具有来源广泛，易消化吸收和生物安全性高的特点，是近些年功能性食品研发的热点领域，目前的研究主要集中在抗高血压肽、抗氧化肽、抗菌肽、抗炎肽、降血糖肽等。很多疾病如糖尿病、帕金森、阿尔兹海默症、肝病以及癌症等与人体中活性氧(ROS)诱发的氧化应激相关。能够被机体消化吸收的抗氧化物质可以延迟或抑制体内氧化作用的进程。而化学合成的抗氧化组分对人体健康存在潜在的危害，可能会导致肝损伤和癌症等相关疾病的发生，因此，天然食物来源的抗氧化肽的研究具有重要意义。
[0003]目前，关于抗氧化肽的研究大部分集中在采用单一肽段或者类似于肽的药物进行的实验，然而，从肽组学角度来看，混合肽的吸收及生物利用度更符合机体作用方式。因此，深入研究多种生物活性肽组成的复合物的生物活性具有重要意义。
[0004]宣威火腿经长时间的腌制加工和发酵成熟过程使肌肉蛋白质和脂肪发生了复杂的生物化学变化，生成了各种不同的代谢产物，这些产物不仅对风味有所贡献，同时也产生了大量的肽类物质，主要是一些小肽类物质。目前宣威火腿抗氧化肽的相关研究主要集中在直接从宣威火腿中分离提取抗氧化肽。抗氧化肽经口服在机体发挥抗氧化功能之前，要克服胃酸、小肠碱性环境及胃蛋白酶、胰酶、肽酶等一系列酶的作用，是发挥其生理功能的重要前提条件。但是关于肉制品来源的天然的、耐消化的抗氧化肽国内外还鲜有报道。

技术实现思路

[0005]本专利技术提供一种传统干腌火腿来源，天然的、耐消化、具有良好抗氧化性能的生物活性肽复合物。
[0006]本专利技术所采用的技术方案是一种干腌火腿来源抗氧化肽复合物，包含42个分子量＜3.0kDa的肽段，其中占比最高的三个肽段分别为占比23.56％的生物活性肽1，占比13.64％的生物活性肽2，占比12.98％的生物活性肽3，所述的生物活性肽1的氨基酸序列为：LGEHNIDVLEGNEQFINAAK，所述的生物活性肽2的氨基酸序列为：GHYTEGAELVDSVLDVVR，所述的生物活性肽3的氨基酸序列为：DLVILLYETALLSSGFSLEDPQTHANR。
[0007]一种干腌火腿来源抗氧化肽复合物在制备抗氧化食品或抗氧化保健品或抗氧化药物的用途。
[0008]进一步的，所述的干腌火腿来源抗氧化肽复合物清除ABTS
·
+
自由基和氧自由基(ORAC)中的任一种或更多种。
[0009]进一步的，所述的干腌火腿来源抗氧化肽复合物具有Fe
2+
螯合能力。
[0010]进一步的，所述的干腌火腿来源抗氧化肽复合物修复过氧化氢诱导的细胞氧化损伤。
[0011]本专利技术的有益效果是：(1)以宣威火腿为原料，经过模拟体外消化获得天然的、耐消化的由42个肽段组成生物活性肽复合物。(2)该生物活性肽复合物可有效清除ABTS
·
+
和氧自由基(ORAC)，并具有良好的Fe
2+
螯合能力。(3)该生物活性肽复合物可有效修复过氧化氢诱导的细胞氧化损伤。
附图说明
[0012]图1为宣威火腿消化产物经Smartdex G
‑
15层析柱分离图谱。
[0013]图2为活性肽复合物F3对H2O2诱导氧化损伤Caco
‑
2细胞内CAT水平影响。
[0014]图3为活性肽复合物F3对H2O2诱导氧化损伤Caco
‑
2细胞内SOD水平影响。
[0015]图4为活性肽复合物F3的RP
‑
HPLC
‑
MS/MS总离子流图。
具体实施方式
[0016]为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。通常在此处附图中描述和示出的本专利技术实施例的组件能够以各种不同的配置来布置和设计。
[0017]实施示例1：活性肽的制备、分离纯化及鉴定。
[0018](1)样品的选择与制备
[0019]选取五个来自不同火腿的肱二头肌部分的肉块作为全部实验的五个平行样品。宣威火腿需剔除瘦肉中的大块脂肪和骨骼等，仅选用肌肉部分。用刀具切成小块，然后将分装好的宣威火腿置于4℃冰箱中。
[0020](2)模拟口腔咀嚼
[0021]分别取5g宣威火腿肱二头肌部分于100mL离心管中，分别加入15mL模拟唾液电解质(配方见附表1)与75μL二水氯化钙溶液，将离心管置于烧杯中冰浴，使用匀浆机均质以模拟人体口腔咀嚼。(3)模拟胃部消化
[0022]分别在匀质好的肉糜样品中加入10mL模拟胃液电解质(SGF，配方见表1)，将样品的pH值调节至2.5，按照酶：样品＝1：20(w/w)加入0.24g胃蛋白酶粉末，将恒温摇床培养箱设置参数为温度37℃，转速为100rpm，反应时间为2h，匀速振荡以模拟人体胃部消化。
[0023](4)模拟小肠消化
[0024]取上述胃食糜样品，加入24mL模拟肠液电解质(SIF，配方见附表1)，将样品的pH值调节至7.0，加入0.25g牛胆盐及按照酶：样品＝1：50(w/w)加入0.1g胰蛋白酶粉末，置于37℃恒温摇床中以100rpm转速匀速振荡反应2h，得到模拟消化液。
[0025](5)收集粗肽粉
[0026]将体外模拟消化的消化液样品于95℃水浴锅中水浴加热10min。当温度冷却至室温后，使用冷冻离心机，于4℃、12000
×
g条件下离心20min。离心结束后，收集离心管中的上层清液，使用0.45μm醋酸纤维膜滤纸抽滤。抽滤完成后，再使用真空冷冻干燥机对滤液进行真空冷冻干燥，即得到体外模拟消化液粗肽粉。
[0027](6)凝胶过滤层析
[0028]用4mL超滤离心管(超滤膜孔径为3kDa)对粗肽粉进行超滤，取冻干后小于3kDa的
肽粉复溶，用层析柱(固定相：葡聚糖凝胶G
‑
15，流动相：去离子水，流速：1mL/min)对肽粉进行分离纯化；检测器的检测波长为280nm。待样品峰出现后，选用蛋白收集器每管收集5mL洗脱液，将属于同一峰段的洗脱液混合成同一样品，将属于同一峰段的洗脱液混合成同一样品，再用冷冻干燥法将洗脱样品冻干得到多肽粉末。
[0029](7)结果分析
[0030]宣威火腿体外模拟消化产物经3kDa超滤膜超滤后，通过Smartdex G
‑
15层析柱进行凝胶过滤层析，得到4个组分：F1(36
‑
73min)、F2(73
‑
130min)、F3(130
‑
195min)和F4(220
‑
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种干腌火腿来源抗氧化肽复合物，其特征在于：包含42个分子量＜3.0kDa的肽段，其中占比最高的三个肽段分别为占比23.56％的生物活性肽1，占比13.64％的生物活性肽2，占比12.98％的生物活性肽3，所述的生物活性肽1的氨基酸序列为：LGEHNIDVLEGNEQFINAAK，所述的生物活性肽2的氨基酸序列为：GHYTEGAELVDSVLDVVR，所述的生物活性肽3的氨基酸序列为：DLVILLYETALLSSGFSLEDPQTHANR。2.权利要求1所述的一种干腌火腿来源抗...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖珊，王际辉，胡峣峣，王波，蔡燕雪，
申请(专利权)人：东莞理工学院，
类型：发明
国别省市：