特异性靶向人肝癌细胞的多肽及其用途制造技术

本发明专利技术属于生物制药领域，具体涉及一种特异性靶向人肝癌细胞的多肽及其用途。针对现有靶向肝癌的多肽在体内肿瘤细胞的靶向性不足，需要开发体内靶向性更好的多肽的问题，本发明专利技术提供了一种肝癌靶向肽F11，通过噬菌体展示技术筛选得到，氨基酸序列如SEQ IDNO:1所示。本发明专利技术多肽可以实现对HepG2人肝癌细胞的靶向亲和作用，在HepG2人肝癌荷瘤小鼠体内，本发明专利技术多肽能够实现对肝癌肿瘤组织的特异性亲和，达到靶向递送的作用。本发明专利技术的靶向多肽特异性强，靶向性高，在肿瘤早期诊疗和靶向治疗领域具有很好的应用潜力。很好的应用潜力。很好的应用潜力。

【技术实现步骤摘要】
特异性靶向人肝癌细胞的多肽及其用途


[0001]本专利技术属于生物制药领域，具体涉及一种特异性靶向人肝癌细胞的多肽及其用途。

技术介绍

[0002]肿瘤治疗技术一直是医学研究的热点与难点。归功于化疗药物的开发和免疫治疗的开展，癌症的治疗成功率持续增高。但是，一些癌症的致死率仍然处于较高水平。其中，肝癌作为我国常见的恶性肿瘤之一，因其早期无明显症状，中晚期恶性度高等原因，在我国恶性肿瘤的致死率中高居第二位。为此，我们需要寻找新的肝癌靶向治疗策略，用于提高肝癌治疗效率和降低药物副作用。同时，针对肝癌病人早期难以诊断的特征，荧光染料标记的靶向肝癌多肽显影技术的专利技术也是一种发现更微小的病灶，达到早发现早治疗的目的的新途径。综上所述，探寻并筛选针对肝癌细胞的高亲和力多肽，是解决肝癌治疗难题的有效途径。
[0003]目前，筛选靶向肝癌细胞的多肽的方法主要是利用噬菌体展示技术进行筛选。噬菌体展示技术是一种能够将外源肽或蛋白与噬菌体表面蛋白融合表达的新技术。通过将各种各样的外源基因导入噬菌体，能够构成一个在表面表达各种不同蛋白的噬菌体展示库。针对肿瘤靶向抗原的筛选，通过将噬菌体展示肽库与肿瘤细胞特异性结合淘选，能够筛选出特异性强亲和力高的肿瘤靶向多肽。目前，现有技术中已筛选到有针对肝癌细胞具有一定亲和力的靶向多肽。如专利CN101918433A公开了一种特异性结合HCC细胞的肽，其能特异性结合HCC细胞。专利CN201110451767.2公开的是特异性结合肝癌HepG2细胞系的多肽，其虽然能靶向肝癌HepG2细胞系，请并没有公开该靶向多肽在体内的靶向性能。
[0004]在实际的靶向肽筛选过程中，有的是体外合成受体细胞或者利用模型鼠体内肿瘤进行肝癌靶向肽的筛选，并不能有效模拟肝癌患者体内的肿瘤生长环境，与临床应用的差别会比较大。因此还需要开发一些在人体内对肝癌细胞靶向性更好的肝癌细胞靶向多肽。

技术实现思路

[0005]本专利技术要解决的技术问题为：现有靶向肝癌的多肽在体内肿瘤细胞的靶向性不足，需要开发体内靶向性更好的多肽的问题。
[0006]本专利技术解决上述技术问题的技术方案为：提供一种特异性靶向人肝癌细胞的多肽。本专利技术所述的特异性靶向人肝癌细胞的多肽，氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
[0007]SEQ ID NO:1特异性靶向人肝癌细胞的多肽的氨基酸序列
[0008]FYLEHPSGGLAV。
[0009]其中，上述特异性靶向人肝癌细胞的多肽靶向的肝癌细胞为HepG2细胞系。
[0010]本专利技术还提供了一种编码核苷酸。
[0011]其中，所述的编码核苷酸能编码得到上述特异性靶向人肝癌细胞的多肽。
[0012]进一步的，所述的编码核苷酸的序列如SEQ ID NO:2所示。
[0013]SEQ ID NO:2特异性靶向人肝癌细胞的多肽的编码核苷酸序列
[0014]TTTTATCTGGAACATCCGAGCGGCGGCCTGGCGGTG。
[0015]本专利技术还提供了一种表达载体。
[0016]进一步的，所述的表达载体含有如SEQ ID NO:2所示的核苷酸。
[0017]其中，所述的表达载体为原核载体或真核载体。
[0018]本专利技术还提供了一种宿主细胞。
[0019]进一步的，所述的宿主细胞含有上述特异性靶向人肝癌细胞的多肽、编码核苷酸或表达载体。
[0020]本专利技术还提供了一种上述特异性靶向人肝癌细胞的多肽在靶向肝癌细胞中的用途。
[0021]进一步的，所述的肝癌细胞为HepG2细胞系。
[0022]本专利技术还提供了一种上述特异性靶向人肝癌细胞的多肽在制备抗肝癌的药物或制备诊断肝癌的显像剂中的用途。
[0023]进一步的，上述用途中，所述的多肽配制成溶液使用，浓度为1mg/mL。
[0024]进一步的，上述用途中，所述多肽溶液中还加入了缓冲液。
[0025]进一步的，所述的缓冲液为二甲基亚砜缓冲液与HEPES缓冲液的混合物。
[0026]进一步的，所述的二甲基亚砜缓冲液与HEPES缓冲液的体积比为1：19。
[0027]本专利技术的有益效果为：
[0028]本专利技术提供了一种能够特异性靶向人肝癌细胞HepG2细胞系的多肽，命名为F11多肽，并在体内证实了上述多肽对HepG2肝癌细胞具有较强的亲和力。本专利技术的靶向多肽特异性高，能特异性靶向人肝癌细胞HepG2，而对人LO2细胞和人外周血细胞没有靶向能力。本专利技术的靶向多肽特异性强，靶向性高，在肿瘤早期诊疗和靶向治疗领域具有很好的应用潜力。
附图说明
[0029]图1所示为本专利技术F11多肽的化学结构式。
[0030]图2所示为试验1中F11多肽对不同细胞亲和力验证结果；a表示荧光拍照结果；b表示流式结果。
[0031]图3所示为F11多肽在小鼠体内靶向肝癌细胞的分布情况图。
[0032]图4所示为F11多肽对肝癌病人的癌和癌旁组织中的免疫组化染色效果图。
具体实施方式
[0033]本专利技术通过噬菌体展示技术，针对肝癌细胞HepG2，筛选得到一种特异性强的靶向多肽，命名为F11多肽。所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
[0034]本专利技术筛选的噬菌体肽库是随机生成的容量大于109的十二肽库，经过三轮筛选，最终才得到F11多肽。本专利技术在筛选过程在利用HepG2进行筛选时，也选择了吸附细胞用于去除与其他细胞具有亲和力的多肽。这使得最终我们筛选得到的多肽F11在能与HepG2细胞结合的同时，不能识别LO2和人外周血细胞。
[0035]进一步的，本专利技术还提供了上述特异性靶向人肝癌细胞的多肽的编码核苷酸、载体和宿主细胞。
[0036]进一步的，本专利技术还提供了上述特异性靶向人肝癌细胞的多肽在靶向肝癌细胞中的用途。
[0037]本专利技术还提供了一种上述特异性靶向人肝癌细胞的多肽在制备预防或治疗肝癌药物中的用途。
[0038]本专利技术还提供了一种上述特异性靶向人肝癌细胞的多肽在制备诊断肝癌的检测试剂中的用途。
[0039]本专利技术的特异性靶向人肝癌细胞的多肽，由下述方法筛选得到：
[0040]将生长状态良好的人肝癌细胞HepG2和LO2细胞接种于24孔板。加入封闭液(4％milk+PBS)，37℃封闭1h。吸去封闭液，用PBS洗涤3次。将10μl噬菌体库与1ml PBS混合，与LO2细胞于37℃，孵育1h。再将上清与已封闭的肝癌HepG2细胞孵育，37℃，孵育2h。将结合在细胞上的噬菌体收集起来，用ER2738宿主菌进行扩增，将扩增后的噬菌体用于下一次对HepG2的筛选。
[0041]再重复上述操作两次，第三轮筛选得到的噬菌体用LB/IPTG/X
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.特异性靶向人肝癌细胞的多肽，其特征在于：氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。2.根据权利要求1所述的特异性靶向人肝癌细胞的多肽，其特征在于：所述的肝癌细胞为HepG2细胞系。3.权利要求1所述的特异性靶向人肝癌细胞的多肽的编码核苷酸。4.根据权利要求3所述的编码核苷酸，其特征在于：述的编码核苷酸的序列如SEQ ID NO:2所示。5.含有权利要求1所述的多肽、权利要求3或4所述的编码核苷酸的表达载体。6.根据权利要求5所述的表达载体，其特征在于：所述表达载体为原核载体或真核载体。7.含有权...

【专利技术属性】
技术研发人员：门可，段醒妹，魏于全，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，
类型：发明
国别省市：