白葡萄球菌粉及其应用制造技术

技术编号:22655489 阅读:22 留言:0更新日期:2019-11-28 01:44
本发明专利技术公开白葡萄球菌粉及其应用,其包括如下步骤:步骤1)菌种的制备;步骤2)菌种的保存;步骤3)培养基的配制;步骤4)灭菌;步骤5)培养;步骤6)灭活;步骤7)絮凝剂的配置;步骤8)沉淀干燥;步骤9)粉碎;步骤10)混合;步骤11)包装。本发明专利技术培养效果优于常规的培养基,并且成本低廉,给制药企业节省了原料成本,提高了工业附加值。不会破坏维生素以及其他活性物质,营养成分均衡合理,成本低廉,可完全取代市场常用培养基,发酵效率也相应提高。

Staphylococcus albus powder and its application

The invention discloses Staphylococcus aureus powder and its application, which comprises the following steps: Step 1) preparation of bacteria; step 2) preservation of bacteria; step 3) preparation of culture medium; step 4) sterilization; step 5) culture; step 6) inactivation; step 7) configuration of flocculant; step 8) precipitation and drying; step 9) crushing; step 10) mixing; step 11) packaging. The culture effect of the invention is superior to the conventional culture medium, and the cost is low, which saves the raw material cost for the pharmaceutical enterprise and improves the industrial added value. It will not destroy vitamins and other active substances. The nutrition is balanced and reasonable, and the cost is low. It can completely replace the commonly used medium in the market, and the fermentation efficiency is also improved accordingly.

【技术实现步骤摘要】
白葡萄球菌粉及其应用
本专利技术属于微生物
,具体涉及白葡萄球菌粉及其应用。
技术介绍
白葡萄球菌粉为一种非致病性的口服细菌制剂,系由非致病性白葡萄球菌液体培养而得的灭活干燥菌体制成。实验表明,其具有近似可待因的镇咳强度,直接作用于延脑咳嗽中枢,对急性咳嗽镇咳作用明显,剂量越大,镇咳作用越强,并有调节自主神经系统功能,能使痰量明显减少。发酵法制备获得白葡萄球菌粉是制药企业生产白葡萄球菌粉的唯一途径,但是培养基的成本制约着企业的发展,目前较多企业采用葡萄糖蛋白胨培养基,原料成本高,菌体密度地,企业的利润大大降低。“用液体发酵法生产气管炎菌苗片的最佳工艺条件研究,山东医药工业1999年”,公开了一种白葡萄球菌培养基,包括蛋白胨0.5%,尿素2%,玉米浆1%,葡萄糖1%,柠檬酸钠0.3%,硫酸镁0.05%以及氯化钠0.5%,该培养基成本较高,并且获得的菌体浓度仅达到109CFU/mL级别。开发一种低成本的白葡萄球菌粉制备工艺是我们需要解决的技术问题。小麦麸皮(麦麸)是面粉加工的主要副产品,过去,麸皮主要是用作动物饲料,经济价值不高,也有很多厂家将小麦麦麸随意丢弃。小麦麸皮含有丰富的碳水化合物、蛋白质、维生素E、酚类化合物以及无机矿物质等(麦麸的功能成分及其应用研究进展,贾天广,食品研究与开发2014年),已经逐渐应用到其他领域,包括保健品、食品添加剂、提取膳食纤维和膳食蛋白等,具备广泛的应用前景和开发价值。但由于小麦麸皮成分复杂,其处理工艺难以掌握。在细菌培养领域,现有研究大多采用小麦麸皮进行简单处理,作为细菌培养基的碳源的部分补充物,用于降低培养基的成本;迄今还没有出现以小麦麸皮为主要原料的白葡萄球菌培养基。
技术实现思路
本专利技术的目的是解决现有技术存在发酵成本高的技术问题,提供白葡萄球菌粉及其应用,以克服现有技术的不足。本专利技术是通过以下技术方案实现的:本专利技术白葡萄球菌粉,其包括如下步骤:步骤1)菌种的制备:(1)菌种:白色葡萄球菌,菌种为上白71-1,长白75-1或湘白72-1,任选1-2株,由武汉生物制品研究所提供;菌落:在营养琼脂培养基上呈乳白色集落,边缘整齐,不透明,不产生色素;菌型:应系革兰氏阳性,呈葡萄状不规则排列的球菌;(2)菌种保存:保存方法保存温度保存时间冷冻真空干燥保存法0-4℃3-5年液体石蜡保存法0-4℃6个月定期移植保存法0-4℃1个月(3)菌种的选育:菌种在使用过程中,出现衰老、退化和变异现象时,采用纯种分离法及时对菌种进行选育、复壮,挑选比较理想的菌种供生产使用;(4)培养基的制备:营养琼脂培养基的制备:胨10g,氯化钠5g,葡萄糖1g,肉浸液1000ml,琼脂15-20g;取胨和氯化钠加入肉浸液内,微温溶解后,加入15-20g琼脂煮沸,加入葡萄糖溶解,调节PH值使灭菌后为7.2±0.2,分装,121℃灭菌20分钟,冷后制成斜面;营养肉汤培养基的制备:胨10g,氯化钠5g,葡萄糖1g,肉浸液1000ml;取胨、氯化钠和葡萄糖加入肉浸液内,微温溶解,调节PH值使灭菌后为7.2±0.2,分装,121℃灭菌20分钟,冷后备用;(5)菌种的制备:按无菌要求,把冻干管内的菌种传至若干试管斜面,在37±1℃培养18-24小时,冷藏保存,把试管斜面的菌种传若干扁瓶斜面,在37±1℃培养8-10小时,用营养肉汤培养基或生理盐水制成均匀的菌悬液供生产使用,在传扁瓶斜面的同时可传若干试管斜面,培养后保存,并填好菌种传代记录;步骤2)基础液消化:(1)基础液的用量:玉米浆450kg和水900kg(或玉米水1600kg);(2)基础液消化:将玉米浆和水(或玉米水)用打料泵打入消化罐内,夹层升温至50-60℃时,用NaOH调PH值至8.0-8.5,罐内通汽继续升温至100℃,保温1小时,至少放置10小时,冷水降温至50℃以下,过滤前用盐酸调PH值至6.0-6.5,用压滤机过滤备用;步骤3)培养基配制:(1)补料瓶内补料液各成份的配比、用量及配制:以上各成份准确称量后,充分溶解,分别倒入补料瓶内,用水补加至全量,包扎后灭菌;(2)补料罐内补料液各成份的配比、用量及配制以上各成份准确称量后,分别在化糖罐、化碱罐和配料桶内充分溶解后,用水补至所需体积,用真空泵分别抽入各补料罐内,进行实罐灭菌,也可根据实际用量,按照配比进行配制;(3)培养基配制:(3.1)种子罐培养基的配比、用量及配制:名称玉米浆(玉米水)消化液蛋白胨氯化钠口服葡萄糖有机硅消泡剂总量配比15%(或50%)1%0.2%0.3%————用量90kg(或300kg)6.0kg1.2kg1.8kg200ml60万ml将玉米浆(或玉米水)消化液打入种子罐内,加入各物料,用水补至全量,搅拌充分溶解后,用氢氧化钠调PH值至7.4-7.6后,灭菌;(3.2)发酵罐培养基的配比、用量及配制:名称玉米浆(玉米水)消化液蛋白胨氯化钠口服葡萄糖有机硅消泡剂总量配比≥15%(或31.4%)1%0.2%0.3%————用量≥525kg(或1100kg)35.0kg7.0kg10.5kg1000ml350万ml将玉米浆(或玉米水)消化液打入配料罐内,加入各物料,用水补至规定体积,搅拌充分溶解后,用氢氧化钠调PH值至7.4-7.6后,用打料泵将配制后的培养基打入发酵罐内,灭菌;步骤4)灭菌:(1)补料瓶内补料液及所需物品的灭菌:把补料瓶与外界连接口用纱布、防潮纸包扎以后,放入小型手控灭菌器内,把备用的种子瓶,多枝管道用同法包扎后,同时进行灭菌;灭菌压力为0.11-0.12MPa,温度为121-125℃,保温45分钟40%葡萄糖液要单独灭菌,灭菌压力为0.09-0.11MPa,温度为110-121℃,保温30分钟;(2)空罐灭菌:初用罐、间断使用罐或出现染菌需进行空罐灭菌处理;首先预温罐体,夹层升温至90℃,开启罐内和罐底进汽阀,让蒸汽在罐内流通20分钟后,关小排汽阀,待压力升至0.11-0.12MPa,温度为本文档来自技高网
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【技术保护点】
1.一种白葡萄球菌粉,其特征是包括如下步骤:/n步骤1)菌种的制备:/n(1)菌种:白色葡萄球菌,菌种为上白71-1,长白75-1或湘白72-1,任选1-2株,由武汉生物制品研究所提供;/n菌落:在营养琼脂培养基上呈乳白色集落,边缘整齐,不透明,不产生色素;/n菌型:应系革兰氏阳性,呈葡萄状不规则排列的球菌;/n(2)菌种保存:/n冷冻真空干燥保存法,保存温度0-4℃,保存时间3-5年;液体石蜡保存法,保存温度0-4℃,保存时间6个月;定期移植保存法,保存温度0-4℃,保存时间1个月;/n(3)菌种的选育:/n菌种在使用过程中,出现衰老、退化和变异现象时,采用纯种分离法及时对菌种进行选育、复壮,挑选比较理想的菌种供生产使用;/n(4)培养基的制备:/n营养琼脂培养基的制备:/n胨10g,氯化钠5g,葡萄糖1g,肉浸液1000ml,琼脂15-20g;/n取胨和氯化钠加入肉浸液内,微温溶解后,加入15-20g琼脂煮沸,加入葡萄糖溶解,调节PH值使灭菌后为7.2±0.2,分装,121℃灭菌20分钟,冷后制成斜面;/n营养肉汤培养基的制备:/n胨10g,氯化钠5g,葡萄糖1g,肉浸液1000ml;/n取胨、氯化钠和葡萄糖加入肉浸液内,微温溶解,调节PH值使灭菌后为7.2±0.2,分装,121℃灭菌20分钟,冷后备用;/n(5)菌种的制备:/n按无菌要求,把冻干管内的菌种传至若干试管斜面,在37±1℃培养18-24小时,冷藏保存,把试管斜面的菌种传若干扁瓶斜面,在37±1℃培养8-10小时,用营养肉汤培养基或生理盐水制成均匀的菌悬液供生产使用,在传扁瓶斜面的同时可传若干试管斜面,培养后保存,并填好菌种传代记录;/n步骤2)基础液消化:/n(1)基础液的用量:玉米浆450kg和水900kg(或玉米水1600kg);/n(2)基础液消化:将玉米浆和水(或玉米水)用打料泵打入消化罐内,夹层升温至50-60℃时,用NaOH调PH值至8.0-8.5,罐内通汽继续升温至100℃,保温1小时,至少放置10小时,冷水降温至50℃以下,过滤前用盐酸调PH值至6.0-6.5,用压滤机过滤备用;/n步骤3)培养基配制:/n(1)补料瓶内补料液各成份的配比、用量及配制:/n40%葡萄糖、20%氢氧化钠和10%有机硅消泡剂准确称量后,充分溶解,分别倒入补料瓶内,用水补加至全量,包扎后灭菌;/n(2)补料罐内补料液各成份的配比、用量及配制:/n40%葡萄糖、20%氢氧化钠和10%有机硅消泡剂准确称量后,分别在化糖罐、化碱罐和配料桶内充分溶解后,用水补至所需体积,用真空泵分别抽入各补料罐内,进行实罐灭菌,也可根据实际用量,按照配比进行配制;/n(3)培养基配制:/n(3.1)种子罐培养基的配比、用量及配制:/n将玉米浆(或玉米水)消化液打入种子罐内,加入各物料,用水补至全量,搅拌充分溶解后,用氢氧化钠调PH值至7.4-7.6后,灭菌;/n(3.2)发酵罐培养基的配比、用量及配制:/n将玉米浆(或玉米水)消化液打入配料罐内,加入各物料,用水补至规定体积,搅拌充分溶解后,用氢氧化钠调PH值至7.4-7.6后,用打料泵将配制后的培养基打入发酵罐内,灭菌;/n步骤4)灭菌:/n(1)补料瓶内补料液及所需物品的灭菌:/n把补料瓶与外界连接口用纱布、防潮纸包扎以后,放入小型手控灭菌器内,把备用的种子瓶,多枝管道用同法包扎后,同时进行灭菌;灭菌压力为0.11-0.12MPa,温度为121-125℃,保温45分钟40%葡萄糖液要单独灭菌,灭菌压力为0.09-0.11MPa,温度为110-121℃,保温30分钟;/n(2)空罐灭菌:/n初用罐、间断使用罐或出现染菌需进行空罐灭菌处理;首先预温罐体,夹层升温至90℃,开启罐内和罐底进汽阀,让蒸汽在罐内流通20分钟后,关小排汽阀,待压力升至0.11-0.12MPa,温度为121-125℃,保温45分钟,灭菌结束后,开启排汽阀,待罐内压力降至为零时,方可打开罐盖;/n(3)实罐灭菌:/n(3.1)培养基灭菌:/n关紧罐盖,夹层升温预热到90℃,开启罐内进汽阀,待罐内压力升到0.05MPa时,关小排汽阀,压力升至0.11-0.12MPa,温度为121-125℃,保温30分钟;培养基灭菌后,关闭各进汽阀(种子罐在火焰保护下接已灭菌的多枝管道);然后开启排汽阀,待罐内压力降至0.02-0.03MPa时,开启压缩空气阀门,同时降温冷却到37±1℃备用;/n(3.2)补料液灭菌:/n开启补料罐蒸汽阀门,夹层升温,压力升至0.05MPa时,关小排汽阀,使罐内压力升至0.11-0.12MPa,温度121-125℃,保温45分钟;40%的葡萄糖补料液的灭菌压力为0.09-0.11MPa,温度为110-121℃,保温30分钟;灭菌完毕后,关闭各进汽阀,开启排...

【技术特征摘要】
1.一种白葡萄球菌粉,其特征是包括如下步骤:
步骤1)菌种的制备:
(1)菌种:白色葡萄球菌,菌种为上白71-1,长白75-1或湘白72-1,任选1-2株,由武汉生物制品研究所提供;
菌落:在营养琼脂培养基上呈乳白色集落,边缘整齐,不透明,不产生色素;
菌型:应系革兰氏阳性,呈葡萄状不规则排列的球菌;
(2)菌种保存:
冷冻真空干燥保存法,保存温度0-4℃,保存时间3-5年;液体石蜡保存法,保存温度0-4℃,保存时间6个月;定期移植保存法,保存温度0-4℃,保存时间1个月;
(3)菌种的选育:
菌种在使用过程中,出现衰老、退化和变异现象时,采用纯种分离法及时对菌种进行选育、复壮,挑选比较理想的菌种供生产使用;
(4)培养基的制备:
营养琼脂培养基的制备:
胨10g,氯化钠5g,葡萄糖1g,肉浸液1000ml,琼脂15-20g;
取胨和氯化钠加入肉浸液内,微温溶解后,加入15-20g琼脂煮沸,加入葡萄糖溶解,调节PH值使灭菌后为7.2±0.2,分装,121℃灭菌20分钟,冷后制成斜面;
营养肉汤培养基的制备:
胨10g,氯化钠5g,葡萄糖1g,肉浸液1000ml;
取胨、氯化钠和葡萄糖加入肉浸液内,微温溶解,调节PH值使灭菌后为7.2±0.2,分装,121℃灭菌20分钟,冷后备用;
(5)菌种的制备:
按无菌要求,把冻干管内的菌种传至若干试管斜面,在37±1℃培养18-24小时,冷藏保存,把试管斜面的菌种传若干扁瓶斜面,在37±1℃培养8-10小时,用营养肉汤培养基或生理盐水制成均匀的菌悬液供生产使用,在传扁瓶斜面的同时可传若干试管斜面,培养后保存,并填好菌种传代记录;
步骤2)基础液消化:
(1)基础液的用量:玉米浆450kg和水900kg(或玉米水1600kg);
(2)基础液消化:将玉米浆和水(或玉米水)用打料泵打入消化罐内,夹层升温至50-60℃时,用NaOH调PH值至8.0-8.5,罐内通汽继续升温至100℃,保温1小时,至少放置10小时,冷水降温至50℃以下,过滤前用盐酸调PH值至6.0-6.5,用压滤机过滤备用;
步骤3)培养基配制:
(1)补料瓶内补料液各成份的配比、用量及配制:
40%葡萄糖、20%氢氧化钠和10%有机硅消泡剂准确称量后,充分溶解,分别倒入补料瓶内,用水补加至全量,包扎后灭菌;
(2)补料罐内补料液各成份的配比、用量及配制:
40%葡萄糖、20%氢氧化钠和10%有机硅消泡剂准确称量后,分别在化糖罐、化碱罐和配料桶内充分溶解后,用水补至所需体积,用真空泵分别抽入各补料罐内,进行实罐灭菌,也可根据实际用量,按照配比进行配制;
(3)培养基配制:
(3.1)种子罐培养基的配比、用量及配制:
将玉米浆(或玉米水)消化液打入种子罐内,加入各物料,用水补至全量,搅拌充分溶解后,用氢氧化钠调PH值至7.4-7.6后,灭菌;
(3.2)发酵罐培养基的配比、用量及配制:
将玉米浆(或玉米水)消化液打入配料罐内,加入各物料,用水补至规定体积,搅拌充分溶解后,用氢氧化钠调PH值至7.4-7.6后,用打料泵将配制后的培养基打入发酵罐内,灭菌;
步骤4)灭菌:
(1)补料瓶内补料液及所需物品的灭菌:
把补料瓶与外界连接口用纱布、防潮纸包扎以后,放入小型手控灭菌器内,把备用的种子瓶,多枝管道用同法包扎后,同时进行灭菌;灭菌压力为0.11-0.12MPa,温度为121-125℃,保温45分钟40%葡萄糖液要单独灭菌,灭菌压力为0.09-0.11MPa,温度为110-121℃,保温30分钟;
(2)空罐灭菌:
初用罐、间断使用罐或出现染菌需进行空罐灭菌处理;首先预温罐体,夹层升温至90℃,开启罐内和罐底进汽阀,让蒸汽在罐内流通20分钟后,关小排汽阀,待压力升至0.11-0.12MPa,温度为121-125℃,保温45分钟,灭菌结束后,开启排汽阀,待罐内压力降...

【专利技术属性】
技术研发人员:林凡友聂昌盛郭增光胡百忠杜玲杰秦承盟
申请(专利权)人:仁和堂药业有限公司
类型:发明
国别省市:山东;37

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