采用荧光技术检测多种待检测物质的方法及荧光检测产品技术

本发明专利技术公开了一种采用荧光技术检测多种待检测物质的方法及荧光检测产品。其中，待检测物质包括第一待检测物质和第二待检测物质，该方法包括以下步骤：S1，获取可与第一待检测物质发生配对反应的第一配体和第二配体，获取可与第二待检测物质发生配对反应的第三配体和第四配体；S2，将量子点或量子点微球标记的第一配体和时间分辨微球标记的第三配体与检测样本接触后再与第二配体和第四配体进行接触并分别进行反应；S3，单激发光源同时照射激发第二配体和第四配体所在的位置，量子点或量子点微球在有激发光下进行第一次荧光数据读取，时间分辨微球在无激发光下进行第二次荧光数据读取，实现了同时检测多种蛋白的可能，可操作性强，稳定性好。

Methods and products for fluorescent detection of a variety of substances to be detected

The invention discloses a method for detecting a variety of substances to be detected by adopting fluorescence technology and a fluorescent detection product. Among them, the substance to be detected includes the first substance to be detected and the second substance to be detected. The method comprises the following steps: S1, obtaining the first ligand and the second ligand that can pair react with the first substance to be detected, obtaining the third and the fourth ligands that can pair react with the second substance to be detected; S2, marking the first ligand and time fraction of the quantum dot or quantum dot microsphere After the third ligand labeled by the microsphere contacts with the detection sample, it contacts with the second ligand and the fourth ligand and reacts respectively; S3, the single excitation light source irradiates the position where the second ligand and the fourth ligand are excited at the same time, the quantum dot or the quantum dot microsphere performs the first fluorescence data reading under the excitation of light, and the time-resolved microsphere performs the second fluorescence number under the non excitation of light According to reading, it is possible to detect multiple proteins at the same time, with strong operability and good stability.

【技术实现步骤摘要】
采用荧光技术检测多种待检测物质的方法及荧光检测产品
本专利技术涉及生物应用
，具体而言，涉及一种采用荧光技术检测多种待检测物质的方法及荧光检测产品。
技术介绍
荧光免疫层析技术是新型的诊断技术，在蛋白检测方面已得到较为广泛运用，基本原理如下：利用荧光探针标记一种抗原或抗体，在试纸的硝酸纤维素(NC)膜上包被相应的配对抗原或抗体，检测时当样品中含相应的特异性抗体或抗原时，荧光探针标记颗粒和样品中配体相结合形成复合物，然后在NC膜上层析，再被包被抗原或抗体捕获，形成具有一定荧光信号的T线，通过荧光检测仪对检测线荧光强度的扫描来实现对结果的判定。
技术实现思路
本专利技术旨在提供一种采用荧光技术检测多种待检测物质的方法及荧光检测产品，以实现不同检测项目反应同一时间完成，且具有较高的检测准确度和灵敏度。为了实现上述目的，根据本专利技术的一个方面，提供了一种采用荧光检测待检测物质的方法，待检测物质包括第一待检测物质和第二待检测物质，该方法包括以下步骤：S1，获取可与第一待检测物质发生配对反应的第一配体和第二配体，且第一配体和第二配体与第一待检测物质的配对位点不同；获取可与第二待检测物质发生配对反应的第三配体和第四配体，且第三配体和第四配体与第二待检测物质的配对位点不同，对第一配体进行量子点或量子点微球标记得到量子点或量子点微球标记的第一配体，对第三配体进行时间分辨微球标记得到时间分辨微球标记的第三配体，且量子点或量子点微球和时间分辨微球的荧光发射波长有重合；将第二配体和第四配体固定在载体上；S2，将量子点或量子点微球标记的第一配体和时间分辨微球标记的第三配体与检测样本接触后再与第二配体和第四配体进行接触并分别进行反应；S3，单激发光源同时照射激发第二配体和第四配体所在的位置，量子点或量子点微球在有激发光下进行第一次荧光数据读取，时间分辨微球在无激发光下进行第二次荧光数据读取，第一次荧光数据读取和第二次荧光数据读取的时间间隔为小于10秒。进一步地，S1中，获取能够与第一配体和第三配体结合的第五配体，将第五配体固定在载体上；S2中，将量子点或量子点微球标记的第一配体和时间分辨微球标记的第三配体与检测样本接触后再与第五配体进行接触，在S3中同时对第五配体所在的位置进行检测并进行荧光数据读取。进一步地，量子点或量子点微球的激发光波长在300～480nm，荧光发射波长在590～630nm；时间分辨微球的激发光波长在300～480nm，荧光发射波长在590～630nm；第一次荧光数据读取和第二次荧光数据读取的时间间隔为100～500μs；优选的，在同一激发波长下，量子点或量子点微球和时间分辨微球的荧光发射波长差值为0～30nm，更优选差值为0～20nm。进一步地，量子点或量子点微球的激发光波长为365nm，荧光发射波长为610nm；时间分辨微球的激发光波长为365nm，荧光发射波长为610nm；优选时间分辨微球的荧光物质为铕离子。进一步地，S3中，量子点或量子点微球标记的第一配体和时间分辨微球标记的第三配体混合使用，S1中，第二配体和第四配体混合后固定在载体上。进一步地，载体选自硝酸纤维素膜、聚酯膜、聚偏二氟乙烯膜、经壳聚糖进行表面处理的玻璃基片或高聚物基片；优选的，高聚物基片的材质选自由纸纤维、玻璃纤维或聚苯乙烯组成的组中的一种或多种。进一步地，步骤S1包括，提供微孔板，将量子点或量子点微球标记的第一配体和时间分辨微球标记的第三配体混合后固化在微孔板的每一微孔内；步骤S2包括，将检测样本加入到微孔内溶解固化的量子点或量子点微球标记的第一配体和时间分辨微球标记的第三配体，然后再与第二配体和第四配体进行接触。进一步地，步骤S1包括，提供具有吸取液体功能的管状物，管状物具有储存固体或液体的储存件，将量子点或量子点微球标记的第一配体和时间分辨微球标记的第三配体混合后置于储存件内；步骤S2包括，使用管状物吸取检测样本，使检测样本与量子点或量子点微球标记的第一配体和时间分辨微球标记的第三配体接触以形成混合溶液，然后将混合溶液与第二配体和第四配体进行接触。进一步地，管状物为移液器或塑料吸管；优选地，管状物为移液器，储存件为移液器的枪头，将量子点或量子点微球标记的第一配体和时间分辨微球标记的第三配体混合后固化于枪头内部；优选地，管状物为塑料吸管，储存件为塑料吸管的管腔，将量子点或量子点微球标记的第一配体和时间分辨微球标记的第三配体混合后制作成固体荧光球置于管腔内，或将量子点或量子点微球标记的第一配体和时间分辨微球标记的第三配体混合后以液态储存于管腔内。根据本专利技术的另一个方面，提供一种荧光检测产品。该荧光检测产品包括：量子点或量子点微球标记的第一配体；时间分辨微球标记的第三配体；第一载体，用于固定量子点或量子点微球标记的第一配体和时间分辨微球标记的第三配体，第一配体可与第一待检测物质发生配对反应，第三配体可与第二待检测物质发生配对反应；第二配体，可与第一待检测物质发生配对反应；第四配体，可与第二待检测物质发生配对反应；以及第二载体，用于固定可与第一待检测物质发生配对反应的第二配体和可与第二待检测物质发生配对反应的第四配体，其中，第一配体和第二配体与第一待检测物质的配对位点不同，第三配体和第四配体与第二待检测物质的配对位点不同，量子点和时间分辨微球的荧光发射波长有重合。进一步地，第一载体和第二载体为一体设置的荧光检测试纸，荧光检测试纸包括支撑板和设置在支撑板上依次连接排布的上样垫、荧光释放垫、反应膜和吸样垫；其中，荧光释放垫含有量子点或量子点微球标记的第一配体和时间分辨微球标记的第三配体；反应膜上设置有检测线，检测线为包被在反应膜上的第二配体和第四配体形成的线状印迹；荧光检测试纸还包括与检测线平行设置的质控线，质控线为包被在反应膜上的能够与第一配体和第三配体结合的第五配体形成的线状印迹；优选的，荧光检测试纸包括采用相同方法设置的针对多种待检测物质的多条检测线。进一步地，第一载体为微孔板，量子点或量子点微球标记的第一配体和时间分辨微球标记的第三配体混合后固化在微孔板的每一微孔内，优选微孔板包括采用相同方法设置的针对多种待检测物质的多个微孔；或第一载体为具有吸取液体功能的管状物，管状物具有储存固体或液体的储存件，储存件内储存有量子点或量子点微球标记的第一配体和时间分辨微球标记的第三配体的混合物；优选的，管状物为移液器，储存件为移液器的枪头，枪头的内部固化有量子点或量子点微球标记的第一配体和时间分辨微球标记的第三配体的混合物；优选的，管状物为塑料吸管，储存件为塑料吸管的管腔，管腔内含有量子点或量子点微球标记的第一配体和时间分辨微球标记的第三配体混合制作成的固体荧光球，或者量子点或量子点微球标记的第一配体和时间分辨微球标记的第三配体混合液体。进一步地，第二载体上还固定有能够与第一配体和第三配体结合的第五配体；优选的，第二配体和第四配体形成检测线，第五配体形成与检测线平行设置的质控线。进一步地，量子点或量子点微球的激发光波长在300～480nm，荧光发射波长在590～630本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种采用荧光技术检测多种待检测物质的方法，其特征在于，所述待检测物质包括第一待检测物质和第二待检测物质，所述方法包括以下步骤：/nS1，获取可与所述第一待检测物质发生配对反应的第一配体和第二配体，且所述第一配体和所述第二配体与所述第一待检测物质的配对位点不同；获取可与所述第二待检测物质发生配对反应的第三配体和第四配体，且所述第三配体和所述第四配体与所述第二待检测物质的配对位点不同，对所述第一配体进行量子点或量子点微球标记得到量子点或量子点微球标记的第一配体，对所述第三配体进行时间分辨微球标记得到时间分辨微球标记的第三配体，且所述量子点或量子点微球和所述时间分辨微球的荧光发射波长有重合；将所述第二配体和所述第四配体固定在载体上；/nS2，将所述量子点或量子点微球标记的第一配体和所述时间分辨微球标记的第三配体与检测样本接触后再与所述第二配体和所述第四配体进行接触并分别进行反应；/nS3，单激发光源同时照射激发所述第二配体和所述第四配体所在的位置，所述量子点或量子点微球在有激发光下进行第一次荧光数据读取，所述时间分辨微球在无激发光下进行第二次荧光数据读取，所述第一次荧光数据读取和所述第二次荧光数据读取的时间间隔为小于10秒。/n...

【技术特征摘要】
1.一种采用荧光技术检测多种待检测物质的方法，其特征在于，所述待检测物质包括第一待检测物质和第二待检测物质，所述方法包括以下步骤：
S1，获取可与所述第一待检测物质发生配对反应的第一配体和第二配体，且所述第一配体和所述第二配体与所述第一待检测物质的配对位点不同；获取可与所述第二待检测物质发生配对反应的第三配体和第四配体，且所述第三配体和所述第四配体与所述第二待检测物质的配对位点不同，对所述第一配体进行量子点或量子点微球标记得到量子点或量子点微球标记的第一配体，对所述第三配体进行时间分辨微球标记得到时间分辨微球标记的第三配体，且所述量子点或量子点微球和所述时间分辨微球的荧光发射波长有重合；将所述第二配体和所述第四配体固定在载体上；
S2，将所述量子点或量子点微球标记的第一配体和所述时间分辨微球标记的第三配体与检测样本接触后再与所述第二配体和所述第四配体进行接触并分别进行反应；
S3，单激发光源同时照射激发所述第二配体和所述第四配体所在的位置，所述量子点或量子点微球在有激发光下进行第一次荧光数据读取，所述时间分辨微球在无激发光下进行第二次荧光数据读取，所述第一次荧光数据读取和所述第二次荧光数据读取的时间间隔为小于10秒。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述S1中，获取能够与所述第一配体和所述第三配体结合的第五配体，将所述第五配体固定在所述载体上；所述S2中，将所述量子点或量子点微球标记的第一配体和所述时间分辨微球标记的第三配体与检测样本接触后再与所述第五配体进行接触，在所述S3中同时对所述第五配体所在的位置进行检测并进行荧光数据读取。


3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述量子点或量子点微球的激发光波长在300～480nm，荧光发射波长在590～630nm；所述时间分辨微球的激发光波长在300～480nm，荧光发射波长在590～630nm；所述第一次荧光数据读取和所述第二次荧光数据读取的时间间隔为100～500μs；
优选的，在同一激发波长下，所述量子点或量子点微球和所述时间分辨微球的荧光发射波长差值为0～30nm，更优选差值为0～20nm。


4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述量子点或量子点微球的激发光波长为365nm，荧光发射波长为610nm；所述时间分辨微球的激发光波长为365nm，荧光发射波长为610nm；优选所述时间分辨微球的荧光物质为铕离子。


5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述S3中，所述量子点或量子点微球标记的第一配体和所述时间分辨微球标记的第三配体混合使用，所述S1中，所述第二配体和所述第四配体混合后固定在所述载体上。


6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述载体选自硝酸纤维素膜、聚酯膜、聚偏二氟乙烯膜、经壳聚糖进行表面处理的玻璃基片或高聚物基片；
优选的，所述高聚物基片的材质选自由纸纤维、玻璃纤维或聚苯乙烯组成的组中的一种或多种。


7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S1包括，提供微孔板，将所述量子点或量子点微球标记的第一配体和所述时间分辨微球标记的第三配体混合后固化在所述微孔板的每一微孔内；所述步骤S2包括，将所述检测样本加入到所述微孔内溶解固化的所述量子点或量子点微球标记的第一配体和所述时间分辨微球标记的第三配体，然后再与所述第二配体和所述第四配体进行接触。


8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S1包括，提供具有吸取液体功能的管状物，所述管状物具有储存固体或液体的储存件，将所述量子点或量子点微球标记的第一配体和所述时间分辨微球标记的第三配体混合后置于所述储存件内；所述步骤S2包括，使用所述管状物吸取所述检测样本，使所述检测样本与所述量子点或量子点微球标记的第一配体和所述时间分辨微球标记的第三配体接触以形成混合溶液，然后将所述混合溶液与所述第二配体和所述第四配体进行接触。


9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述管状物为移液器或塑料吸...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹少伟，
申请(专利权)人：北京纳晶生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11