一种用于荧光法测定叶绿素的藻液的制备方法，选取蛋白核小球藻藻种，配制BG-11培养基，然后将培养基灭菌、冷却，于无菌条件下进行藻种接种，接种完成，置于恒温光照培养箱中培养，在培养基灭菌之前，向所述的BG-11培养基中添加琼脂粉来培养蛋白核小球藻。本发明专利技术根据琼脂粉的凝胶性、稳定性提出了一种藻液的制备方法、向BG-11培养基中添加琼脂粉(0.08-0.10g/100ml)作为助悬剂培养蛋白核小球藻，培养的蛋白核小球藻作为制备藻液，提高了藻液的悬浮性、稳定性，进而确保了利用荧光法测定叶绿素含量的结果的准确性。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于水质环境监测的
，具体涉及一种用于荧光法测定叶绿素含量 的藻液的制备方法。
技术介绍
叶绿素 a含量在一定程度上反应水体中藻类数量和水质状况，是水体水质环境监 测中的常规监测项目、是水体富营养化指标之一。 实验室分光光度法、荧光分光光度法是实验室测定叶绿素 a实现对浮游植 物的定量测定的最为常用的方法。采用荧光光度法测定水体中的叶绿素 a，灵敏度比分光光 度法高10倍，不需要对样品进行预处理，操作简单，可连续监测，随着荧光法叶绿素在线分 析仪的开发与研究，实现水体中叶绿素的实时原位分析。 实验过程中发现现有技术荧光检测法直接测定藻液时，藻细胞沉降明显、测量值 随时间变化较大得到的数据不准确，无法正确判断出水质环境。准确、完整的监测数据是环 境管理工作的基础和依托，一个错误的数据可能导致错误的决策与行动，因此正确测量水 质环境至关重要。
技术实现思路
本专利技术为解决现有技术中荧光法测定藻液时，容易沉降，无法获得准确的藻液浓 度数据，提供了。本专利技术为实现其目的 采用的技术方案是： -种用于荧光法测定叶绿素含量的藻液的制备方法，选取蛋白核小球藻藻种，配 制BG-Il培养基，然后将培养基灭菌、冷却，于无菌条件下进行藻种接种，接种完成，置于恒 温光照培养箱中培养，在培养基灭菌之前，向所述的BG-Il培养基中添加琼脂粉来培养蛋 白核小球藻。 所述的BG-Il培养基放入灭菌锅于121°C下灭菌30min，取出后放入超净台冷却。 所述的BG-Il培养基在接种之前，置于紫外灯下照射30min以上。 所述恒温光照培养箱中的培养条件是：光照度为20001x，温度为25°C，湿度为 75% RH，光暗周期为12h :12h，静置培养，每日摇瓶2-3次，同时更换锥形瓶的位置，以免引 起光照不足。 BG-Il培养基中琼脂粉的添加量为0· 08-0. 10g/100mL。 本专利技术的有益效果是：本专利技术根据琼脂粉的凝胶性、稳定性提出了一种藻液的制 备方法、向BG-Il培养基中添加琼脂粉（0. 08-0. 10g/100ml)作为助悬剂培养蛋白核小球 藻，培养的蛋白核小球藻作为制备藻液，提高了藻液的悬浮性、稳定性，减少藻体沉降对测 定结果的影响，进而确保了利用荧光法测定叶绿素含量的结果的准确性。【附图说明】 图1是蛋白核小球藻叶绿素 a的激发光谱和发射光图谱。横坐标为扫描波长，纵 坐标为荧光强度，左边为激发图谱，右边为发射图谱。 图2是测量间隔时间与1号原藻液荧光值间的关系曲线。横坐标为测量间隔时间， 纵坐标为荧光值的变化率，图中Λ F/F。= -9. 96%表示当T = Imin时，Λ F/F。= -9. 96%。 图3是测量间隔时间与1-6号荧光值相对变化率间的关系曲线。横坐标为测量间 隔时间，纵坐标为荧光值的变化率。 图4是测量间隔时间与光密度值相对变化率间的关系曲线。横坐标为测量间隔时 间，纵坐标为光密度值的变化率。【具体实施方式】 本专利技术为解决现有技术中荧光法测定藻液时，藻容易沉降，无法获得准确的藻液 浓度数据，提供了。下面结合具体实施 例为本专利技术作进一步说明。 1、实验仪器与试剂 仪器：光照培养箱（Ε-30Β0美国Percival);可见分光光度计（722型上海光谱 仪器有限公司）；紫外分光光度计（UV-2600上海天美科学仪器有限公司）；荧光分光光度 计（RF-5301日本岛津公司）；离心机（Ζ323德国HERMLE - Ζ323);循环水式多用真空栗 (SHB - III郑州长城科工贸有限公司）。 试剂：盐酸（分析纯石家庄市华迪化工工贸有限公司）；氢氧化钠（分析纯天津市 大陆化学试剂厂）；叶绿素 a标准品（日本wako公司，IOmg装）；蛋白核小球藻（藻种购自 中国科学院野生生物质库一一淡水藻种库，培养基为灭菌BG-Il培养液）；琼脂粉（Japan Mff :3000-9000)〇 2、添加不同浓度琼脂粉配置BG-Il培养基 选取6个规格为250ml的锥形瓶，每个锥形瓶中配置100mLBG-Il培养基，并向每 个锥形瓶中添加不同量的琼脂粉。 BG-Il培养基的配方为： 其中， 1号培养基：添加琼脂粉0g/100mL。 2号培养基：添加琼脂粉0· 02g/100mL。 3号培养基：添加琼脂粉0· 04g/100mL。 4号培养基：添加琼脂粉0· 06g/100mL。 5号培养基：添加琼脂粉(λ 08g/100mL。 6号培养基：添加琼脂粉0. lg/100mL。 3、制备蛋白核小球藻藻液 选取的蛋白核小球藻购买自中国科学院野生生物质库一一淡水藻种库，选择一瓶 处于对数增长期且生长状态良好的蛋白核小球藻120ml，摇匀，平均分成6份，每份20ml，将 六份蛋白核小球藻分别接种于1-6号培养基中作为出发藻，然后将接种有出发藻的锥形瓶 置于E-30B0光照培养箱中培养，培养条件为：培养温度25°C，光照条件20001x，时间设置为 12h昼/12h夜，湿度条件75% RH。藻种静置培养，每日摇动锥形瓶2次同时更改锥形瓶位 置，七日后同时取出即得用于荧光法测定叶绿素含量的藻液。 4、对制备的用于焚光法测定叶绿素的藻液悬浮稳定性的检测试验 4. 1确定叶绿素 a的最佳激发波长和发射波长 提取1号培养基中培养的蛋白核小球藻中的叶绿素 a，使用岛津RF5301荧光分 光光度计分别对叶绿素 a进行光谱扫描。扫描条件：设定激发波长扫描范围为400nm~ 50当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于荧光法测定叶绿素含量的藻液的制备方法，选取蛋白核小球藻藻种，配制BG‑11培养基，然后将培养基灭菌、冷却，于无菌条件下进行藻种接种，接种完成，置于恒温光照培养箱中培养，其特征在于，在培养基灭菌之前，向所述的BG‑11培养基中添加琼脂粉来培养蛋白核小球藻。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：崔建升，樊琳琳，段莉丽，高柳堂，高思，周盼，
申请(专利权)人：河北科技大学，
类型：发明
国别省市：河北;13
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