美洲帘蛤多糖的制备方法技术

本发明专利技术公开了美洲帘蛤多糖的制备方法，其具体制备步骤为：将美洲帘蛤鲜肉绞碎、匀浆，向帘蛤肉糜中加入石油醚，超声波脱脂，离心，沉淀物质干燥，粉碎，即得脱脂帘蛤粉；向脱脂帘蛤粉中加入蒸馏水，混合均匀，通过进液泵，缓慢通过高压脉冲电场装置，即得帘蛤粗多糖提取液；将首乌多糖提取液加入离子液体‑无机盐双水相体系中，振荡得混合体系，静置分相，将上下相分离，将下相装入透析袋透析，浓缩；将除蛋白得到的浓缩液中加入乙醇溶液，混合均匀，沉淀过夜，离心，干燥，即得帘蛤精制多糖。有益效果为：本发明专利技术制备方法简单，工艺流程短、能耗低，多糖的提取效率和得率均较高，能够保证多糖活性。

Preparation of Polysaccharide from Meretrix americana

The invention discloses a preparation method of polysaccharide of American clam, the specific preparation steps are as follows: grind and homogenize the fresh meat of American clam, add petroleum ether to the minced meat of American clam, ultrasonic degrease, centrifugate, dry and crush the precipitated substance, and then obtain degreased clam powder; add distilled water to the degreased clam powder, mix evenly, slowly pass through the high-voltage pulse electric field device through the liquid inlet pump, The crude polysaccharide extract of the clam is obtained; the Polygonum multiflorum polysaccharide extract is added into the ionic liquid-inorganic salt two-phase system, the mixture system is obtained by shaking, the upper and lower phases are separated, the lower phases are put into dialysis bags for dialysis and concentration; the concentrated solution obtained by protein removal is added with ethanol solution, and the mixture is uniform, the precipitation is overnight, centrifugation and drying, so the refined polysaccharide of the clam is obtained. The beneficial effect is: the preparation method of the invention is simple, the process flow is short, the energy consumption is low, the extraction efficiency and the yield of the polysaccharide are high, and the polysaccharide activity can be guaranteed.

【技术实现步骤摘要】
美洲帘蛤多糖的制备方法
本专利技术涉及多糖提取
，尤其是涉及美洲帘蛤多糖的制备方法。
技术介绍
美洲帘蛤Mercenariamercenaria又称硬壳蛤、北方帘蛤或小圆蛤，原产地分布在美国佛罗里达州Cawrence湾，墨西哥湾，加利福尼亚Hamboldt湾到英格兰海域，与我国的文蛤（Meretrixmeretrix）同属帘蛤科，是一种生长快，适应能力强，适温、适盐范围广，经济价值高的大型双壳贝类。目前生产性人工育苗已成功，2000年山东省海洋水产研究所由美国引入种贝，2001和2002年连续两年成功地进行了工厂化育苗，滩涂养殖正在逐步走向规模化。作为新的养殖品种其引种和育苗的成功，将有效促进美洲帘蛤浅海滩涂养殖，充分调动沿海渔民的积极性，其经济效益和社会效益将十分显著。美洲帘蛤肉质饱满肥嫩，味道鲜美，属上乘的高蛋白优质海产品，其营养成分均衡、丰富，富含人体必需的各种氨基酸、维生素、无机盐等营养成分，从而有望成为新的食品和保健品资源。美洲帘蛤软体部主要营养成分分析结果显示，粗蛋白含量较高，干品（DS）粗蛋白为60.69%，粗脂肪为5.60%，灰分为18.80%。与陶平等对大连沿海9种双壳贝类软体部（FS）的分析结果比较，除二倍体和三倍体帘蛤（蛋白质含量分别为52.94%和46.08%）外，远高于其它种类，美洲帘蛤鲜样蛋白质含量则与文蛤等其它双壳类的平均含量（10.63%）非常接近，而粗脂肪含量（0.96%）却远低于其它双壳贝类的平均值（5.49%），其主要营养组成体现出双壳贝类共有的高蛋白低脂肪的特点，而美洲帘蛤低脂肪的特点尤其突出。现有技术如授权公告号为CN101736051B的中国专利技术专利，公开了一种美洲帘蛤多糖的制备方法，依次按以下步骤进行：制美洲帘蛤肉糜制品；蛤肉糜制品与水匀浆，得到蛤肉糜浆；向蛤肉糜浆中加入木瓜蛋白酶或碱性蛋白酶或复合蛋白酶酶解；用风味酶进一步酶解；向蛤肉酶解液中加入盐酸或氢氧化钠溶液，得到蛤肉酶解中和液；将蛤肉酶解中和液浓缩，离心去沉淀后，添加食盐得到蛤肉酶解盐溶液；向得到的蛤肉酶解盐溶液中加入无水乙醇，得到上清液和沉淀两部分；将沉淀物用丙酮洗涤，用Sevag试剂脱蛋白后，装入截留分子量为6000Da的透析袋中透析24h，得到粗多糖；将所得的粗多糖过DEAE-52纤维素离子交换柱，收集单一糖峰组分并采用Sephadex-G100凝胶层析柱作进一步分离纯化，浓缩，冻干，即得到美洲帘蛤多糖。但是该美洲帘蛤多糖除蛋白方法工艺流程较长，能耗较大。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种制备方法简单，工艺流程短、能耗低，多糖的提取效率和得率均较高，能够保证多糖活性的美洲帘蛤多糖的制备方法。本专利技术针对上述技术中提到的问题，采取的技术方案为：美洲帘蛤多糖的制备方法，包括原料预处理、帘蛤粗多糖提取液制备、除蛋白、帘蛤纯多糖制备，其具体制备步骤为：脱脂：将美洲帘蛤鲜肉绞碎、匀浆，然后按料液比为1:2-4向帘蛤肉糜中加入石油醚，在温度为50-60℃、功率为100-150W下超声波脱脂40-55min，脱脂结束后在5000-7000rpm下离心15-20rnin，沉淀物质在50-60℃下干燥，粉碎，即得脱脂帘蛤粉，帘蛤多糖的组织细胞多有脂质包围，组织中往往含有较多的蛋白，而脂肪的存在可对产品的风味、色泽等产生不良影响，同时容易造成水解液的浑浊，影响帘蛤多糖的活性，所以要先进行脱脂处理，超声波振动能产生并传递强大的能量，给于石油醚大速度和加速度，超声波的空化作用使媒质被撕裂成很多的小空穴，这些小空穴瞬时生成、生长、崩溃会产生高达几千个大气压的瞬时压力，使脂肪组织软化、损伤，加速石油醚在组织中的渗透和扩散，从而使油脂加速渗透出来，可以除去毛蚶中的脂肪；帘蛤粗多糖提取液制备：按料液比为1:16-20向脱脂帘蛤粉中加入蒸馏水，混合均匀，通过进液泵，缓慢通过高压脉冲电场装置，高压脉冲电场电场强度为15-25kV/cm，脉冲数为6-10，即得帘蛤粗多糖提取液，在高压脉冲电场的作用下，由于细胞内外电场强度的差异使细胞膜损坏，改变细胞膜的通透性，进而利于细胞内活性物质的溶出和目标物质的提取，该提取过程中温度变化较小，帘蛤粗多糖提取率较高，并且不会污染环境，操作安全、节约时间、消耗能量少；除蛋白：将帘蛤多糖提取液加入离子液体-无机盐双水相体系中，振荡得混合体系，然后在20-30℃下静置分相10-15h，将上下相分离，将下相装入200-300kDa透析袋中，于蒸馏水中透析20-30h以除去盐及其它小分子杂质，将所得的透析液减压浓缩至原体积的0.15-0.25倍，备用，离子液体-无机盐双水相体系的粘度较小，该步骤可将帘蛤多糖提取液中的蛋白质、矿物质等小分子杂质萃取到双水相体系上相，而帘蛤多糖分配在下相中，回收双水相体系中下相，加醇沉淀即可得到纯化的帘蛤多糖，与传统工艺相比，条件温和，缩短了工艺流程，降低了能耗，减少了有机溶剂用量，同时离子液体可以得到有效的回收再利用，降低了物耗，更适合大规模生产与应用；帘蛤纯多糖制备：将除蛋白得到的浓缩液中加入4-6倍体积的93-97%乙醇溶液，混合均匀，沉淀过夜，离心，干燥，即得帘蛤精制多糖，由于帘蛤多糖是极性的，不溶于乙醇溶液，因此可在多糖提取液中加入一定浓度的乙醇溶液，多糖形成沉淀，从而使多糖与水溶性单糖等其他物质分离，得到的帘蛤精制多糖对·OH、超氧自由基均具有较强的清除率。作为优选，除蛋白步骤中离子液体的质量分数为16-20%，离子液体为丁基甲基咪唑四氟硼酸盐[C4mim]BF4，[C4mim]BF4能与许多无机盐形成双水相体系，大部分杂质如蛋白质、矿物质和酚类物质能够被萃取到离子液体相内，同时[C4mim]BF4能被萃取到二氯甲烷溶液中，除去二氯甲烷后，能够回收利用。作为优选，除蛋白步骤中无机盐的质量浓度为16-20%，无机盐为重量比为100:1.35-1.45的磷酸二氢钠和扁桃酸，扁桃酸中L-扁桃酸和D-扁桃酸的重量比为100:3-5，磷酸二氢钠体系具有较高的萃取效率，适合作为成相盐，同时磷酸二氢钠和扁桃酸溶液体系具有较适合的pH范围更适合帘蛤多糖的稳定存在，且该重量比例范围内的磷酸二氢钠和扁桃酸含量，可使得多糖在盐相的萃取效率达到最佳，同时该无机盐能够使下相体系的pH值较低，而带电的蛋白质与离子液体的阴阳离子发生了静电排斥作用，使得更多蛋白质容易被萃取到上相，能够提高蛋白质的去除率，同时的D-扁桃酸加入能够保证帘蛤多糖的抗氧化活性。与现有技术相比，本专利技术的优点在于：1）本专利技术制备方法简单，工艺流程短、能耗低，多糖的提取效率和得率均较高，能够保证多糖活性；2）该制备方法可快速除去美洲帘蛤中的脂肪，避免脂肪的存在对多糖的风味、色泽等产生不良影响，同时提高帘蛤多糖的活性；3）本专利技术利用高压脉冲电场进行提取粗多糖，提取过程中温度变化较小，帘蛤粗多糖提取率较高，并且不会污染环境，操作安全、节约时间、消耗能量少；4）本专利技术制备方法采用离子液体-无机盐双水相体系进行除蛋白，条件温和，可使得多糖在盐相的萃取效率达到最佳，缩本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.美洲帘蛤多糖的制备方法，包括脱脂、帘蛤粗多糖提取液制备、除蛋白、帘蛤纯多糖制备，其特征在于：所述除蛋白步骤为：将首乌多糖提取液加入离子液体-无机盐双水相体系中，振荡得混合体系，静置分相，将上下相分离，将下相装入透析袋透析，将所得的透析液减压浓缩，备用，所述离子液体为丁基甲基咪唑四氟硼酸盐[C

【技术特征摘要】
1.美洲帘蛤多糖的制备方法，包括脱脂、帘蛤粗多糖提取液制备、除蛋白、帘蛤纯多糖制备，其特征在于：所述除蛋白步骤为：将首乌多糖提取液加入离子液体-无机盐双水相体系中，振荡得混合体系，静置分相，将上下相分离，将下相装入透析袋透析，将所得的透析液减压浓缩，备用，所述离子液体为丁基甲基咪唑四氟硼酸盐[C4mim]BF4，无机盐为磷酸二氢钠和扁桃酸的混合物。


2.根据权利要求1所述的美洲帘蛤多糖的制备方法，其特征在于：所述除蛋白步骤中离子液体的质量分数为16-20%，无机盐的质量浓度为16-20%。


3.根据权利要求1所述的美洲帘蛤多糖的制备方法，其特征在于：所述除蛋白步骤中无机盐为重量比为100:1.35-1.45的磷酸二氢钠和扁桃酸，扁桃酸中L-扁桃酸和D-扁桃酸的重量比为100:3-5。


4.根据权利要求1所述的美洲帘蛤多糖的制备方法，其特征在于：所述除蛋白步骤中除蛋白步骤中静置分相温度为20-30℃，时间为10...

【专利技术属性】
技术研发人员：邢晓丹，
申请(专利权)人：浦江县昂宝生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33