一种羊肚菌多糖及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种羊肚菌多糖，所述多糖是由甘露糖、葡萄糖、半乳糖组成的杂多糖，所述甘露糖、葡萄糖、半乳糖的残基摩尔比为4：4：1，所述甘露糖选自α‑D‑甘露糖或β‑D‑甘露糖；葡萄糖选自α‑D‑葡萄糖或β‑D‑葡萄糖；半乳糖选自α‑D‑半乳糖或β‑D‑半乳糖；更优选的，所述α‑D‑甘露糖为α‑D‑吡喃甘露糖，α‑D‑葡萄糖为α‑D‑吡喃葡萄糖，α‑D‑半乳糖为α‑D‑吡喃半乳糖。

A Morchella polysaccharide and its preparation and Application

The invention discloses a Morchella Morel polysaccharide, which is a heteropolysaccharide composed of mannose, glucose and galactose. The molar ratio of residues of the mannose, glucose and galactose is 4:4:1. The mannose is selected from \u03b1 - D-mannose or \u03b2 - D-mannose; the glucose is selected from \u03b1 - D-glucose or \u03b2 - D-glucose; the galactose is selected from \u03b1 - D-galactose or \u03b2 - D-galactose More preferably, the \u03b1 \u2011 D \u2011 mannose is \u03b1 \u2011 D \u2011 glucopyranose, \u03b1 \u2011 D \u2011 glucose is \u03b1 \u2011 D \u2011 glucopyranose, and \u03b1 \u2011 D \u2011 galactose is \u03b1 \u2011 D \u2011 galactopyranose.

【技术实现步骤摘要】
一种羊肚菌多糖及其制备方法和应用
本专利技术属于真菌多糖应用
，具体地说，涉及一种羊肚菌多糖及其制备方法和应用。
技术介绍
真菌多糖是由真菌菌丝体和子实体产生的，能够控制细胞分裂分化和调节细胞生长及衰老的一类代谢产物。同时活性多糖还可以刺激免疫细胞增殖，并通过多种其他方式参与免疫调控系统。真菌多糖因其独特的生物活性已被国际公认为生物调节效应剂(biologicalresponsemodifiers，BRM)。近20年来，关于多糖生物活性的研究报道主要集中在免疫调节、抗肿瘤、抗病毒、抗氧化和降血糖等方面，其作用是多途径、多环节、多靶点的。羊肚菌(Morehellaesculenta)隶属于子囊菌亚门盘菌纲盘菌目羊肚菌科羊肚菌属，因其酷似羊肚，从而得名羊肚菌。野生羊肚菌，子实体个头中等或偏小，菌盖椭圆形且表面类似蜂窝状，顶端钝圆，菌柄近白色，味道鲜美，是很好的食用和药用真菌。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服上述技术存在的缺陷，提供一种羊肚菌多糖及其制备方法和应用。本专利技术的目的是通过以下及技术方案实现的：一种羊肚菌多糖，所述多糖是由甘露糖、葡萄糖、半乳糖组成的杂多糖，所述甘露糖、葡萄糖、半乳糖的残基摩尔比为4：4：1。优选的，所述甘露糖选自α-D-甘露糖或β-D-甘露糖；葡萄糖选自α-D-葡萄糖或β-D-葡萄糖；半乳糖选自β-D-半乳糖。更优选的，所述α-D-甘露糖为α-D-吡喃甘露糖，β-D-甘露糖为β-D-吡喃甘露糖。在本专利技术的一个优选实施方式中，所述羊肚菌多糖主链由(2,4→6)-α-D-吡喃甘露糖和(2,4→6)-β-D-吡喃甘露糖组成，(1,2→6)-β-D-半乳糖作为侧链与两个甘露糖6-O相连，4-β-D-葡萄糖作为末端糖与(1,2→6)-β-D-半乳糖2-O相连，其余甘露糖6-O分别与一个(1→6)-α-D-葡萄糖相连。优选的，所述羊肚菌多糖的重均分子量为8000-20000Da(如8000、10000、12000、15000、16000、17000、20000Da)；在本专利技术的一个优选实施方式中，所述羊肚菌多糖的重均分子量为16348Da。在本专利技术的一个优选实施方式中，所述羊肚菌多糖的结构式如下：其中，n为10-100的整数(如10、20、50、60、70、80、100)。本专利技术还提供一种羊肚菌多糖的制备方法，包括如下步骤：(1)取羊肚菌子实体粉末，热水浸提，所得水提物依次经浓缩、醇沉、除蛋白得到粗多糖；(2)将步骤(1)所得粗多糖通过离子交换柱层析，洗脱，收集洗脱液；(3)将步骤(2)所得洗脱液用透析袋进行透析浓缩。(4)将步骤(3)完成后的透析袋内液体离心，取上清液，冷冻干燥，得到羊肚菌多糖。优选的，热水浸提步骤中，浸提温度为80-100℃(如80、85、90、95、100℃)，在本专利技术的一个实施例中，该浸提温度为100℃。优选的，热水浸提步骤中，水与羊肚菌子实体粉末的液料比为1-10:1(体积质量比，如1:1、2:1、3:1、5:1、6:1、8:1、10:1，mL/g)；在本专利技术的一个实施例中，该液料比为3:1。优选的，浸提次数为1次或多次(如2、3、4、5次)；在本专利技术的一个实施例中，该浸提次数为3次。优选的，每次浸提时间为4-10小时(如4、6、8、10小时)；在本专利技术的一个实施例中，每次浸提时间为6小时。优选的，醇沉步骤中，醇与水提物的浓缩液的体积比为1-10:1(如1:1、3:1、4:1、5:1、10:1)；在本专利技术的一个实施例中，该体积比为3:1。在本专利技术的一个实施例中，醇沉步骤中，醇为乙醇。在本专利技术的一个实施例中，除蛋白采用Sevage法。更优选的，步骤(1)包括：取羊肚菌子实体粉末，热水浸提，收集上清液，浓缩，加入无水乙醇，收集沉淀，烘干，除去其中的蛋白质，得到粗多糖。离子交换柱为纤维素柱，该纤维素柱的填料如DEAE-52纤维素。洗脱所用洗脱剂为蒸馏水。更优选的，步骤(2)包括：将步骤(1)所得粗多糖的水溶液通过纤维素柱，洗脱，收集洗脱液，浓缩，离心，收集上清液。优选的，步骤(3)包括：将步骤(2)所得洗脱液置于透析袋，半天换一次水，透析两天。透析袋的截留分子量为5000-10000Da(如5000、7000、8000、10000Da)；在本专利技术的一个实施例中，该截留分子量为7000Da。本专利技术提供一种羊肚菌多糖在制备增强免疫的药物、保健品或食品中的应用。本专利技术提供一种羊肚菌多糖在制备用于预防和/或治疗肿瘤的药物、保健品或食品中的应用。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：本专利技术一定剂量的羊肚菌多糖ME-X具有显著的免疫调节活性：当ME-X多糖浓度为10μg/mL时，T、B淋巴细胞增殖活性最好；当ME-X多糖浓度为20μg/mL时，促进RAW264.7细胞的增殖能力及噬细胞吞噬活性均最好。本专利技术一定剂量的羊肚菌多糖ME-X具有显著的抗肿瘤活性：当ME-X多糖浓度为10μg/mL时，抑制MFC细胞增殖效果最好；当ME-X多糖浓度为20μg/mL时，抑制CT26.WT和S180细胞增殖效果最好。附图说明图1羊肚菌多糖ME-XHPGPC谱图；图2羊肚菌多糖ME-X的红外谱图；图3羊肚菌多糖ME-X的1HNMR图谱；图4羊肚菌多糖ME-X的13CNMR图谱；图5羊肚菌多糖ME-X的化学结构；图6羊肚菌多糖ME-X抑制CT-26细胞增殖结果统计图；图7羊肚菌多糖ME-X抑制MFC细胞增殖结果统计图；图8羊肚菌多糖ME-X抑制S180细胞增殖结果统计图。具体实施方式除非另有定义，本专利技术中所使用的所有科学和技术术语具有与本专利技术涉及
的技术人员通常理解的相同的含义。下面结合附图和具体实施例对本专利技术的技术方案作进一步详细地说明。实施例1羊肚菌多糖ME-X的分离提取采用热水提取法提取羊肚菌粗多糖，并结合DEAE-纤维素柱层析法和透析法对羊肚菌粗多糖进一步分离纯化，具体步骤如下：S1：通过热水提取法提取羊肚菌粗多糖将烘干的羊肚菌子实体打粉，按照液料比为3:1的比例在100℃水中煮沸6小时，重复3次，收集上清液并浓缩，加入三倍体积的无水乙醇形成絮状沉淀，收集沉淀并干燥，用Sevage法除去其中的蛋白质，得到羊肚菌粗多糖；S2：利用DEAE-52纤维素柱层析法分离纯化羊肚菌粗多糖用蒸馏水将DEAE-52纤维素50.00g搅拌均匀后，加入0.5mol/LNaOH溶液浸泡2小时，反复用蒸馏水洗至中性，再加入0.5mol/LHC1溶液浸泡2小时以上，反复用蒸馏水洗至中性，将中性的纤维素装入玻璃柱，利用蒸馏水作为流动相将纤维素压实，取适量的上步制备的粗多糖溶解于蒸馏水，并加入至纤维素柱中，以蒸馏水作本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种羊肚菌多糖，所述多糖是由甘露糖、葡萄糖、半乳糖组成的杂多糖，所述甘露糖、葡萄糖、半乳糖的残基摩尔比为4：4：1，其中，所述甘露糖选自α-D-甘露糖或β-D-甘露糖；葡萄糖选自α-D-葡萄糖或β-D-葡萄糖；半乳糖选自α-D-半乳糖或β-D-半乳糖；更优选的，所述α-D-甘露糖为α-D-吡喃甘露糖，α-D-葡萄糖为α-D-吡喃葡萄糖，α-D-半乳糖为α-D-吡喃半乳糖。/n

【技术特征摘要】
1.一种羊肚菌多糖，所述多糖是由甘露糖、葡萄糖、半乳糖组成的杂多糖，所述甘露糖、葡萄糖、半乳糖的残基摩尔比为4：4：1，其中，所述甘露糖选自α-D-甘露糖或β-D-甘露糖；葡萄糖选自α-D-葡萄糖或β-D-葡萄糖；半乳糖选自α-D-半乳糖或β-D-半乳糖；更优选的，所述α-D-甘露糖为α-D-吡喃甘露糖，α-D-葡萄糖为α-D-吡喃葡萄糖，α-D-半乳糖为α-D-吡喃半乳糖。


2.根据权利要求1所述的羊肚菌多糖，其特征在于，所述α-D-甘露糖为α-D-吡喃甘露糖，α-D-葡萄糖为α-D-吡喃葡萄糖，α-D-半乳糖为α-D-吡喃半乳糖。


3.根据权利要求2所述的羊肚菌多糖，其特征在于，所述羊肚菌多糖主链由(2,4→6)-α-D-吡喃甘露糖组成，(1,2→6)-α-D-半乳糖作为侧链与其中一个甘露糖6-O相连，→2)-α-D-葡萄糖作为末端糖与(1,2→6)-α-D-半乳糖1-O相连，其余甘露糖6-O分别与一个(1→6)-α-D-葡萄糖相连。


4.根据权利要求3所述的羊肚菌多糖，其特征在于，所述羊肚菌多糖的结构式如下：



其中，n为10-100的整数(如10、20、50、60、70、80、100)。


5.根据权利要求1-4任一所述的羊肚菌多糖，其特征在于，所述羊肚菌多糖的重均分子量...

【专利技术属性】
技术研发人员：丁祥，侯怡铃，黄瑶，
申请(专利权)人：西华师范大学，
类型：发明
国别省市：四川;51