靶向AXL的抗体及抗体-药物偶联物及其制备方法和用途技术

本发明专利技术公开了一种新的靶向AXL的单克隆抗体以及抗体‑药物偶联物。本发明专利技术还公开了制备所述抗体、抗体‑药物偶联物的方法。本发明专利技术的AXL抗体能够高效，高特异性地结合纯化的人AXL蛋白和多种肿瘤细胞表面的AXL，所述人源化抗体同样具有很高的亲和力及很低的免疫原性，所述AXL抗体‑药物偶联物对AXL高表达的肿瘤细胞具有显著的抗肿瘤作用。

Antibodies and antibody drug conjugates targeting Axl and their preparation and Application

The invention discloses a new monoclonal antibody targeting Axl and an antibody \u2011 drug conjugate. The invention also discloses a method for preparing the antibody and the antibody \u2011 drug conjugate. The Axl antibody of the invention can efficiently and specifically bind the purified human Axl protein and Axl on the surface of various tumor cells. The humanized antibody also has high affinity and low immunogenicity. The Axl antibody \u2011 drug conjugate has significant anti-tumor effect on the tumor cells with high expression of Axl.

【技术实现步骤摘要】
靶向AXL的抗体及抗体-药物偶联物及其制备方法和用途
本专利技术涉及药物领域，更具体地，涉及靶向于AXL的抗体及抗体药物偶联物及其制备方法和用途。
技术介绍
AXL是受体酪氨酸激酶亚家族-TAM家族成员之一，TAM家族包括Tyro-3、Axl和Mer，它们的配体均为生长停滞特异性基因6(Gas6)所编码的蛋白分子。AXL与Gas6结合后被激活，从而活化其下游如PI3K/AKT，RAS/ERK和β-Catenin/TCF等信号转导通路，从而调节细胞的增殖、凋亡、趋化、黏附和识别等多种生理功能。研究发现AXL在多种癌症中呈激活表达状态，如肺癌、乳腺癌、前列腺癌、甲状腺癌、子宫内膜癌、卵巢癌和肾癌等多种肿瘤组织中，参与肿瘤细胞上皮间质转化、血管生成、凋亡和免疫调节等多种机制，并与不良预后(CancerCell2015,27:533-46)和许多情况下的耐药(Oncotarget2015,6:15321-31；CancerRes.2013,19:279-90)相关，包括EGFR抑制剂难治的肺癌(Nat.Genet.2012,44:852-60)、PI3K抑制剂耐药的头颈癌(CancerCell2015,27:533-46)、抗HER2耐药的乳腺癌(Trans.2014,42:822-30)，舒尼替尼耐药的肾癌(Oncogene2016,35:2687-97)和ALK抑制剂耐药的神经母细胞瘤(Oncogene2016,35:3681-91)。此外，AXL的表达与传统化疗和放疗的获得性耐药相关(Theranostics2016,6:1205-19)。抑制AXL后耐药细胞对细胞毒性药物和靶向抑制剂的敏感性增强(Nat.Commun.2016,7:13898)。鉴于AXL在肿瘤靶向治疗中的重要性和作为潜在的药物靶标，期望研究开发更多具有良好特性的特异性结合AXL的抗体。本专利技术人前期研究也发现与正常组织相比，AXL在肿瘤组织中异常激活表达，尤其是在高侵袭、高转移的基底样和/或三阴性乳腺癌、转移性肺癌、胰腺癌等，并且与其他靶点相比，靶向AXL的抗体可被快速大量的内化，可见AXL可能是一个更为优选的抗体-药物偶联物(antibody-drugconjugate，ADC)开发靶点。然而，目前国际上，尤其国内尚缺乏高特异性的针对人AXL的抗体药物偶联物。抗体药物偶联物一般由三部分组成：抗体或抗体类配体，小分子药物，和将配体与药物偶联起来的连接子。目前进入临床试验的抗体药物偶联物结构中，高活性的细胞毒性药物通常是通过连接子连接在配体表面的赖氨酸残基，或者抗体铰链区域的半胱氨酸残基(由链间二硫键部分还原得到)上，最佳的药物/配体比值(DAR)为2-4。抗体表面大量的赖氨酸残基(超过80个)以及偶联反应的非选择性，导致偶联数目和位点的不确定性，进而导致生成的抗体药物偶联物的不均一性。根马布公司报导了一类靶向AXL的抗体偶联物(CN201580045131.4)，也是基于传统偶联技术的抗体药物偶联物。此外，抗体药物偶联物的作用机制看似简单，但一个抗体药物偶联物是否能成为安全有效的药物是非常复杂和不可预测的，依赖于多种因素，例如：1)靶点的特性：靶点是否能有效内吞，靶点的表达水平，靶点是否在癌细胞和正常细胞中有足够的表达水平差异，靶点是否会被分泌或脱落至细胞外部分而到血液中。2)单抗的特性：单抗对于靶点的特异性是否足够好(与其它蛋白无交叉反应)，单抗稳定性和与靶点结合后内吞速率等。3)接头的特性：接头需要在血液中足够稳定，同时接头的变化对于ADC上链接的药物数量和区域位置均会有改变，最终将导致整个ADC药物的安性性和有效性的变化。可以看出，ADC药物的研发需要大量的实验摸索和验证，其安全性和有效性是无法在实验前预测的。综上，本领域迫切需要开发亲和力高、免疫原性低、稳定性好的靶向AXL的抗体及抗体药物偶联物。
技术实现思路
本专利技术提供了一种靶向人源AXL的抗体，其具有阻断AXL的生物活性，具有抑制肿瘤生长和转移活性，并可以减少抗肿瘤治疗耐药性的出现。本专利技术还提供了靶向AXL的抗体药物偶联物，所述偶联物对AXL高表达的肿瘤细胞具有显著抗肿瘤作用。在本专利技术的第一方面，提供了一种抗体的重链可变区，所述的重链可变区包括以下三个互补决定区CDR：SEQIDNO.:1所示的CDR1，SEQIDNO.:2所示的CDR2，和SEQIDNO.:3所示的CDR3；或者，SEQIDNO.:9所示的CDR1，SEQIDNO.:10所示的CDR2，和SEQIDNO.:11所示的CDR3；或者，SEQIDNO.:17的CDR1，SEQIDNO.:18所示的CDR2，和SEQIDNO.:19所示的CDR3；其中，上述氨基酸序列中任意一种氨基酸序列还包括任选地经过添加、缺失、修饰和/或取代至少一个氨基酸的，并能够保留AXL结合亲和力的衍生序列。在另一优选例中，所述重链可变区包括以下互补决定区：SEQIDNO.:1、SEQIDNO.:2、SEQIDNO.:3所示mAb002c的重链互补决定区HCDR1、HCDR2、HCDR3；或SEQIDNO.:9、SEQIDNO.:10、SEQIDNO.:11所示mAb005c的重链互补决定区HCDR1、HCDR2、HCDR3；或SEQIDNO.:17、SEQIDNO.:18、SEQIDNO.:19所示mAb001c的重链互补决定区HCDR1、HCDR2、HCDR3。在另一优选例中，所述重链可变区还包括人源的FR区或鼠源的FR区。在另一优选例中，所述重链可变区具有SEQIDNO.:7所示的氨基酸序列。在另一优选例中，所述重链可变区具有SEQIDNO.:15所示的氨基酸序列。在另一优选例中，所述重链可变区具有SEQIDNO.:23所示的氨基酸序列。在另一优选例中，所述重链可变区具有SEQIDNO.:25、SEQIDNO.:26、SEQIDNO.:27所示的氨基酸序列。在本专利技术的第二方面，提供了一种抗体的重链，所述的重链具有本专利技术第一方面所述的重链可变区。在另一优选例中，所述的抗体的重链还包括重链恒定区。在另一优选例中，所述的重链恒定区为人源、鼠源或兔源的。在本专利技术的第三方面，提供了一种抗体的轻链可变区，所述轻链可变区包括以下三个互补决定区CDR：或者，SEQIDNO.:4所示的CDR1'，SEQIDNO.:5所示的CDR2'，和SEQIDNO.:6所示的CDR3'；或者，SEQIDNO.:12所示的CDR1'，SEQIDNO.:13所示的CDR2'，和SEQIDNO.:14所示的CDR3'；或者，SEQIDNO.:20所示的CDR1'，SEQIDNO.:21所示的CDR2'，和SEQI本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗体的重链可变区，其特征在于，所述的重链可变区包括以下三个互补决定区CDR：/nSEQ ID NO.:1所示的CDR1，/nSEQ ID NO.:2所示的CDR2，和/nSEQ ID NO.:3所示的CDR3；/n或者，/nSEQ ID NO.:9所示的CDR1，/nSEQ ID NO.:10所示的CDR2，和/nSEQ ID NO.:11所示的CDR3；/n或者，/nSEQ ID NO.:17的CDR1，/nSEQ ID NO.:18所示的CDR2，和/nSEQ ID NO.:19所示的CDR3；/n其中，上述氨基酸序列中任意一种氨基酸序列还包括任选地经过添加、缺失、修饰和/或取代至少一个氨基酸的，并能够保留AXL结合亲和力的衍生序列。/n

【技术特征摘要】
1.一种抗体的重链可变区，其特征在于，所述的重链可变区包括以下三个互补决定区CDR：
SEQIDNO.:1所示的CDR1，
SEQIDNO.:2所示的CDR2，和
SEQIDNO.:3所示的CDR3；
或者，
SEQIDNO.:9所示的CDR1，
SEQIDNO.:10所示的CDR2，和
SEQIDNO.:11所示的CDR3；
或者，
SEQIDNO.:17的CDR1，
SEQIDNO.:18所示的CDR2，和
SEQIDNO.:19所示的CDR3；
其中，上述氨基酸序列中任意一种氨基酸序列还包括任选地经过添加、缺失、修饰和/或取代至少一个氨基酸的，并能够保留AXL结合亲和力的衍生序列。


2.一种抗体的重链，其特征在于，所述的重链具有如权利要求1所述的重链可变区。


3.一种抗体的轻链可变区，其特征在于，所述的轻链可变区包括以下三个互补决定区CDR：
SEQIDNO.:4所示的CDR1'，
SEQIDNO.:5所示的CDR2'，和
SEQIDNO.:6所示的CDR3'；
或者，
SEQIDNO.:12所示的CDR1'，
SEQIDNO.:13所示的CDR2'，和
SEQIDNO.:14所示的CDR3'；
或者，
SEQIDNO.:20所示的CDR1'，
SEQIDNO.:21所示的CDR2'，和
SEQIDNO.:22所示的CDR3'；
其中，上述氨基酸序列中任意一种氨基酸序列还包括任选地经过添加、缺失、修饰和/或取代至少一个氨基酸的，并能够保留AXL结合亲和力的衍生序列。


4.一种抗体的轻链，其特征在于，所述的轻链具有如权利要求3所述的轻链可变区。


5.一种抗体，其特征在于，所述抗体具有：
(1)如权利要求1所述的重链可变区；和/或
(2)如权利要求3所述的轻链可变区；
或者，所述抗体具有：如权利要求2所述的重链；和/或如...

【专利技术属性】
技术研发人员：余科，沈竞康，孟韬，马兰萍，王昕，金锐，裴金鹏，杜志彦，陈驎，于霆，张永良，
申请(专利权)人：复旦大学，中国科学院上海药物研究所，
类型：发明
国别省市：上海;31