The invention provides a method for separating Mycoplasma ovipneumoniae, which comprises the following steps: (1) collecting samples and sample processing to obtain sample inoculation solution; (2) chicken embryo inoculation; (3) separation of Mycoplasma ovipneumoniae: collecting dead chicken embryo and / or non dead chicken embryo 9 days after inoculation, taking chicken embryo allantoic fluid for live bacteria detection of Mycoplasma ovipneumoniae, if collecting chicken embryo allantoic fluid for sheep lung If Mycoplasma inflammatis is positive, it shall be preserved; if the first generation of chicken embryo allantoic fluid is negative, the chicken embryo will be collected for blind transmission, the method is the same as above; if the third generation of blind transmission is still negative, the sample shall be determined as Mycoplasma ovipneumoniae negative and discarded. The method of the invention is simple in operation, does not need to prepare the Mycoplasma ovipneumoniae culture medium with complex components, avoids the problems of high-pressure sterilization or large capacity filter in the preparation of the separation culture medium of the prior art; the method of the invention can obtain Mycoplasma ovipneumoniae without animal serum.
【技术实现步骤摘要】
一种分离绵羊肺炎支原体的方法
本专利技术属于兽医生物技术研究
,具体涉及一种分离绵羊肺炎支原体的方法。
技术介绍
绵羊肺炎支原体是一种可引起羊呼吸系统疾病的微生物。绵羊肺炎支原体既可感染绵羊,也可感染山羊。健康羊鼻腔也可分离出该病原。该病原呈全球性分布。该病原目前在我国流行,给养羊业带来严重威胁。绵羊肺炎支原体比较娇嫩,分离及培养需要特殊的培养基。改良Thiaucourt's培养基是一种常用的绵羊肺炎支原体分离培养基,培养绵羊肺炎支原体效果较其他培养基如改良KM2培养基等培养滴度高,效果较好。现有技术绵羊肺炎支原体培养基成分复杂,除含有碳源、氮源、蛋白质、无机盐等诸多营养组分外一般还需要添加10%~20%不等的动物血清。现有技术培养基配制步骤繁琐,常需要准备多达8~9种试剂,此外常需要配制新鲜酵母浸出液、1%NaOH、1%的酚红等试剂,配制培养基须经灭菌或滤膜滤过除菌等步骤。现有技术培养绵羊肺炎支原体仍存在繁殖能力差等问题。此外,现有技术培养基中使用血清存在诸多问题,如血清批次差异容易导致培养基批间差异较大、成本高、生物安全、易增加免疫副反应等问题。
技术实现思路
为了解决现有技术中存在的问题,本专利技术提供了一种分离绵羊肺炎支原体的方法。本专利技术提供一种分离绵羊肺炎支原体的方法,包括以下步骤:(1)采集样品及样品处理,得到样品接种液;(2)鸡胚接种:将步骤(1)得到的样品接种液接种7-8日龄健康SPF鸡胚,接种后,将鸡胚置于孵化箱中继续培养;(3) ...
【技术保护点】
1.一种分离绵羊肺炎支原体的方法,其特征在于:包括以下步骤:/n(1)采集样品及样品处理,得到样品接种液;/n(2)鸡胚接种:将步骤(1)得到的样品接种液接种7-8日龄健康SPF鸡胚,接种后,将鸡胚置于孵化箱中继续培养;/n(3)绵羊肺炎支原体的分离:收集接种后死亡鸡胚和/或9d后未死亡鸡胚,取鸡胚尿囊液进行绵羊肺炎支原体进行活菌检测,若收集鸡胚尿囊液绵羊肺炎支原体阳性,进行保存;若第1代鸡胚尿囊液均为阴性,则将收集鸡胚尿囊液盲传鸡胚,方法同上,若盲传3代仍为阴性,则判定样品为绵羊肺炎支原体阴性,弃去。/n
【技术特征摘要】
1.一种分离绵羊肺炎支原体的方法,其特征在于:包括以下步骤:
(1)采集样品及样品处理,得到样品接种液;
(2)鸡胚接种:将步骤(1)得到的样品接种液接种7-8日龄健康SPF鸡胚,接种后,将鸡胚置于孵化箱中继续培养;
(3)绵羊肺炎支原体的分离:收集接种后死亡鸡胚和/或9d后未死亡鸡胚,取鸡胚尿囊液进行绵羊肺炎支原体进行活菌检测,若收集鸡胚尿囊液绵羊肺炎支原体阳性,进行保存;若第1代鸡胚尿囊液均为阴性,则将收集鸡胚尿囊液盲传鸡胚,方法同上,若盲传3代仍为阴性,则判定样品为绵羊肺炎支原体阴性,弃去。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(1)中,所述采集样品及样品处理的具体方法为:无菌棉签采集羊鼻拭子;...
【专利技术属性】
技术研发人员:郝华芳,陈胜利,储岳峰,袁婷,颜新敏,刘永生,
申请(专利权)人:中国农业科学院兰州兽医研究所,
类型:发明
国别省市:甘肃;62
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