低分子量透明质酸的制备方法技术

本发明专利技术提供一种低分子量透明质酸的制备方法，其中，分子量为100,000至200,000道尔顿，并且包括在2.5至3.5的pH下热处理含有分子量为500,000道尔顿以上的透明质酸的水溶液。

Preparation of low molecular weight hyaluronic acid

The invention provides a preparation method of low molecular weight hyaluronic acid, wherein the molecular weight is 100000 to 200000 daltons, and includes heat treatment of an aqueous solution containing hyaluronic acid with molecular weight more than 500000 daltons at a pH of 2.5 to 3.5.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】低分子量透明质酸的制备方法
本专利技术涉及一种具有优异的皮肤渗透和保湿效果的分子量范围的透明质酸的制备方法。
技术介绍
透明质酸基于D-葡糖醛酸和N-乙酰-D-葡糖胺，分子量为数十万至数百万道尔顿，几乎所有具有相同结构的生物体中发现的线性聚合物，并且是细胞外基质的组成部分。由于没有物种之间的差异具有相同的结构，因此，无论来源如何都没有免疫反应。迄今为止是一种用于退行性关节炎、白内障、皱纹改善、给药、干细胞支持和化妆品保湿成分等领域的安全的天然多糖。作为聚合物的透明质酸具有密度变高，分子量大，粘度高的特征。最初，透明质酸是从鸡冠中提取的，并且在工业上用于医药、化妆品和食品【Biomacromolecules，5，2122-2127(2004)】。然而，最近，由于担心可能由禽流感等动物引起的传染病，主要通过使用微生物的发酵来产生。【申请微生物。生物技术。66(4)：341-51(2005)】。据报道，人体皮肤中透明质酸的量随着衰老而降低，这被认为是皮肤弹性和含水量降低的直接原因之一。【In：FreeradicalDamageantItscontrol，281-300，Elsevier科学(1994年)】。透明质酸因其能够溶于水并在其分子结构中保持大量水分而被广泛用作化妆品的保湿剂，适用于火伤或创伤的乳霜、注射剂、纱布等，也用作保护角膜的内侧的配方。此外，透明质酸已经用于组织工程领域，用于生产用于伤口涂层和牙科基质的多孔海绵状基质。然而，通过从动物组织中提取或发酵产生的透明质酸通常是500,000道尔顿或更高的聚合物多糖，具有高聚合度，因此通常不会渗透皮肤。即，当将500,000道尔顿以上的透明质酸应用于皮肤时，由于吸收空气中水分的性质，可以防止皮肤水分蒸发，但由于不会渗透皮肤，会停留在皮肤表面，很容易被洗脸时从皮肤表面洗掉，因此，皮肤的保湿效果难以维持。另一方面，100,000道尔顿以下的透明质酸可以渗透皮肤，但分子尺寸小，因此缺乏含水分的性质不能持久保湿效果。此外，20,000道尔顿以下的HA有效地穿透皮肤，但已知会引起促炎反应，这是因为免疫反应可以通过结合皮肤巨噬细胞上的Toll样受体2和4来启动。低分子量透明质酸的实例包括γ射线，超声波或紫外线(JournalofChromatography，435，pp335-342，1988；Int.Biol.Macrmol。，P10，1988)，使用酸或碱催化剂的方法(日本专利公开号S63-57602)，使用微流化器的方法等是公知的。然而，公知的方法是制备100,000道尔顿以下的透明质酸的方法，并且没有给予皮肤渗透的直接效果或有效制备能够吸收和含有水分的分子量范围内的透明质酸的方法。
技术实现思路
要解决的技术问题本专利技术是鉴于所述诸多问题而提出的，其目的在于，提供一种在保持用作现有化妆品原料的超过500,000道尔顿的透明质酸的保湿效果的同时，克服了不渗透到皮肤角质层中并被洗清不能长时间提供皮肤保湿效果的缺点，渗透到皮肤并且能够保持最佳的湿润状态的有效制备低分子量透明质酸的方法。技术方案为了实现所述目的，用于解决本专利技术中的上述问题的手段如下。1.一种低分子量透明质酸的制备方法，其中，分子量为100,000至200,000道尔顿，并且包括在2.5至3.5的pH下热处理含有分子量为500,000道尔顿以上的透明质酸的水溶液。2.根据权利要求1所述的低分子量透明质酸的制备方法，其中，所述水溶液的浓度为1至2％(重量/体积)。3.根据权利要求1所述的低分子量透明质酸的制备方法，其中，所述热处理温度为80至90℃。4.根据权利要求1所述的低分子量透明质酸的制备方法，其中，所述热处理时间为15分钟至30分钟。5.根据权利要求1所述的低分子量透明质酸的制备方法，其中，在所述热处理后，用碱金属氢氧化物水溶液中和所述反应溶液，获得碱金属盐形态的低分子量透明质酸。6.根据权利要求5所述的低分子量透明质酸的制备方法，其中，所述碱金属盐为钠盐。7.根据权利要求5所述的低分子量透明质酸的制备方法，其中，在中和后，在反应溶液中添加有机溶剂，形成沉淀，过滤后，得到粉末状的透明质酸的碱金属盐。8.根据权利要求7所述的低分子量透明质酸的制备方法，其中，所述有机溶剂是选自甲醇、乙醇、丙酮和异丙醇中的一种以上。9.根据权利要求7所述的低分子量透明质酸的制备方法，其中，基于所述反应溶液，以1∶5至1∶6的体积比添加所述有机溶剂。有益效果根据本专利技术，通过省略各种现有的复杂方法，通过简化的方法克服现有的作为化妆品原料的透明质酸的缺点的难以渗透皮肤的问题，除了皮肤渗透之外，还提供了一种制备分子量为100至200kDa的能够保持最大保湿能力的透明质酸的方法。通过本专利技术提出的方法制备的低分子量透明质酸可渗透皮肤并保持最大水分，因此，缓和过敏症，从而适合化妆品，医药品及医药组合物。附图说明图1是HPLC色谱图，证实了实施例1至3中制备的低分子量透明质酸钠的分子量分布。(蓝色：分子量200,000道尔顿标准，红色：实施例1，绿色：实施例2，黑色：实施例3)图2是HPLC色谱图，证实了在本专利技术的实施例4和5中制备的低分子量透明质酸钠的分子量分布。(蓝色：分子量200,000道尔顿标准，红色：实施例4，绿色：实施例5)图3是HPLC色谱图，证实了在本专利技术的实施例6和7中制备的低分子量透明质酸钠的分子量分布。(蓝色：分子量200,000道尔顿标准，红色：实施例6，绿色：实施例7)图4是HPLC色谱图，证实了比较例1至3中制备的透明质酸钠的分子量分布。(蓝色：分子量200,000道尔顿标准，红色：分子量100,000道尔顿标准，绿色：比较例1，黑色：比较例2，粉红色：比较例3))图5是HPLC色谱图，证实了在本专利技术的比较例4至6中制备的透明质酸钠的分子量分布。(蓝色：分子量200,000道尔顿标准，红色：分子量100,000道尔顿标准，绿色：比较例4，黑色：比较例5，粉红色：比较例6))图6是将荧光标记的本专利技术的实施例4，对照组和比较例7的样品在Balb/c-裸鼠背部涂布10μL(10μg/ml)后，15分钟后用PBS缓冲液清洗老鼠的左侧，30分钟后清洗右侧后去除残留物，然后经过30分钟后，1小时后，2小时后，6小时后，24小时后立即用IVISSepctrum测量。图7是将荧光标记的本专利技术的实施例4，对照组和比较例7的样品在Balb/c-裸鼠背部涂布10μL(10μg/ml)后，15分钟后用PBS缓冲液清洗去除残留物后，取出小鼠的皮肤切片，用4％甲醛固定以制备切口标本，并使用双光子显微镜对皮肤组织切片进行共焦成像。具体实施方式本专利技术涉及分子量为100,000至200,000道尔顿的低分子量透明质酸的制备方法，该方法包括在2.5至3.5的pH下热处理含有分子量为500,000道尔顿以上的透明质酸的水溶液。在本专利技术中，用作起始材料的分子量为500,000至3,000,000道尔顿的透明质酸包括一般的透明质酸化妆品级原料为500,000道尔顿的平均分子量，100万道尔顿的药物原料级和300万道尔顿的透明质酸。通常，优选使用价格低廉的化妆品原料平均分子量为500,000道尔顿的透明质酸，但不限于此。所述水溶液可以是溶解在本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种低分子量透明质酸的制备方法，其中，分子量为100,000至200,000道尔顿，并且包括在2.5至3.5的pH下热处理含有分子量为500，000道尔顿以上的透明质酸的水溶液。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2017.04.07 KR 10-2017-00453421.一种低分子量透明质酸的制备方法，其中，分子量为100,000至200,000道尔顿，并且包括在2.5至3.5的pH下热处理含有分子量为500，000道尔顿以上的透明质酸的水溶液。2.根据权利要求1所述的低分子量透明质酸的制备方法，其中，所述水溶液的浓度为1至2％(重量/体积)。3.根据权利要求1所述的低分子量透明质酸的制备方法，其中，所述热处理温度为80至90℃。4.根据权利要求1所述的低分子量透明质酸的制备方法，其中，所述热处理时间为15分钟至30分钟。5.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：严香梅，
申请(专利权)人：优瑞有限公司，
类型：发明
国别省市：韩国,KR