一种甘草渣指纹图谱检测方法技术

本发明专利技术提供了一种甘草渣指纹图谱检测方法，其特征在于，包括以下步骤：对照样品预处理，待测甘草渣样品预处理，对照样品和待测甘草渣样品检测，建立对照指纹图谱，待测甘草渣样品指纹图谱分析，参比样品制备，参比样品色谱图，对照样品主要成分分析，待测甘草渣样品主要成分分析，待测甘草渣样品质量判定。本发明专利技术的有益效果在于：本发明专利技术提供的一种甘草渣指纹图谱检测方法具有以下优势：发明专利技术提供的一种甘草渣指纹图谱检测方法具有特征的指纹特性，获得了甘草渣中所含化合物的色谱条件，建立了指纹档案，且此方法简便、稳定、精密度高、重现性好，能有效表征甘草渣的质量，有利用于监控产品的质量。

A method for fingerprint detection of liquorice residue

【技术实现步骤摘要】
一种甘草渣指纹图谱检测方法
本专利技术属于药物分析检测及质量控制
，具体涉及一种甘草渣指纹图谱检测方法。
技术介绍
甘草，又名国老、甜草、乌拉尔甘草、甜根子。豆科、甘草属，多年生草本，根与根状茎粗壮，是一种补益中草药。药用部位为根和根茎，药材性状根呈圆柱形，长25-100厘米，直径0.6-3.5厘米。外皮松紧不一，表面红棕色或灰棕色。根茎呈圆柱形，表面有芽痕，断面中部有髓。功能主治清热解毒、祛痰止咳、脘腹等，是一种重要且常用的中草药。目前《中国药典》2015年版甘草项下采用高效液相色谱法对甘草中的甘草苷和甘草酸含量进行测定，建立了相应的质量标准。但是没有针对干草渣的全面质量检测和控制方法，而且考虑到中草药的成分繁多，各个成分间容易相互影响，仅以一两个有效成分的含量难以全面评价中草药的真实质量。因此，需要开发一种可以监控甘草渣中多个成分的检测方法，以更加全面地监控甘草渣的质量状况。随着现代药物分析技术的发展，指纹图谱技术是当今国际公认的控制中药质量的质控模式，它在原药材的栽培、引种，中成药生产工艺的规范与优化，产品质量标准的制定等方面都提供全方位的质量保证。近年来，国外对中草药产品的质量评价也在提倡指纹图谱。随着各种分析技术的创新和提高以及计算机应用技术的不断发展，世界各国对天然药物的了解和研究在不断深入，中药指纹图谱技术在国内外已成为一种发展趋势，其研究的方法和技术更趋成熟完善，成为国际公认的控制中药和天然药质量最有效的方法和手段。我国对中药指纹图谱的研究尚处于初级阶段，与发达国家相比有一定差距。目前主要为使用各种方法建立中药材及制剂的指纹图谱，以及对相应信息进行数字化处理，使其能够评价和控制中药材及制剂的质量。针对以上问题，我们急需将指纹图谱和研究方法与甘草渣的质量控制联系起来，建立一种简便、高效、实用的甘草渣指纹图谱检测方法，用于对甘草渣的质量评价。
技术实现思路
为了弥补现有技术的不足，本专利技术提供了一种简便、高效、实用的甘草渣指纹图谱检测方法。本专利技术提供的一种甘草渣指纹图谱检测方法，包括以下步骤：(1)对照样品预处理：取对照甘草渣样品充分粉碎、过80目筛得到对照甘草渣粉，取前述对照甘草渣粉适量，加23倍量的75-80％乙醇间歇超声浸提，之后用75-80％乙醇补足损失溶液量，摇匀，用0.2μm微孔滤膜滤过，得到对照样品溶液；前述间歇超声浸提的具体方法为，首先在功率50W、频率45kHz条件下超声3mim，快速冷却，然后在功率60W、频率55kHz条件下超声5mim，冷却至室温；(2)待测甘草渣样品预处理：取待测甘草渣样品充分粉碎、过80目筛得到待测甘草渣粉，取前述待测甘草渣粉适量，加23倍量的75-80％乙醇间歇超声浸提，之后用75-80％乙醇补足损失溶液量，摇匀，用0.2μm微孔滤膜滤过，得到待测甘草渣样品溶液；前述间歇超声浸提的具体方法为，首先在功率50W、频率45kHz条件下超声3mim，快速冷却，然后在功率60W、频率55kHz条件下超声5mim，冷却至室温；(3)对照样品和待测甘草渣样品检测：分别精密吸取前述对照样品溶液与前述待测甘草渣样品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪进行检测，并记录100min内的色谱图，得到对照样品色谱图和待测甘草渣样品色谱图；前述高效液相色谱仪检测条件如下：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充相；检测波长：335-340nm；流动相：以乙腈为流动相A，以冰醋酸溶液为流动相B；梯度洗脱程序如下：流速：1.2-1.5mL/min；柱温：26-28℃；(4)建立对照指纹图谱：前述对照样品色谱图即为对照指纹图谱，前述对照指纹图谱包括11个特征峰，且前述特征峰的相对保留时间分别为：峰1：0.117±0.005；峰2：0.517±0.005；峰3：0.638±0.005；峰4：0.655±0.005；峰5：0.707±0.005；峰6：0.793±0.005；峰7：0.965±0.005；峰8：1.00±0.005；峰9：1.052±0.005；峰10：1.241±0.005；11：1.259±0.005；(5)待测甘草渣样品指纹图谱分析：前述待测甘草渣样品色谱图即为待测甘草渣样品指纹图谱，将前述待测甘草渣样品指纹图谱与前述对照指纹图谱进行比对，利用指纹图谱软件计算相似度，确定相似度数值；(6)参比样品制备：取甘草查尔酮A、甘草苷、甘草酸及芒柄花素对照品适量，加23倍量的75-80％乙醇制成混合溶液作为参比样品溶液；(7)参比样品色谱图：精密吸取参比样品溶液10μL，注入高效液相色谱仪按照步骤(3)中前述高效液相色谱仪的检测条件进行检测，并记录100min内的色谱图，得到参比样品色谱图；(8)对照样品主要成分分析：将对照样品指纹图谱与参比样品色谱图进行比对，确定对照样品中取甘草查尔酮A、甘草苷、甘草酸及芒柄花素的含量；(9)待测甘草渣样品主要成分分析：将待测甘草渣样品指纹图谱与参比样品色谱图进行比对，确定待测甘草渣样品中取甘草查尔酮A、甘草苷、甘草酸及芒柄花素成分含量；(10)待测甘草渣样品质量判定：当待测甘草渣样品指纹图谱与对照指纹图谱相似度数值大于0.85，且待测甘草渣样品与对照样品各主要成分的偏差都控制在5％以内，前述待测甘草渣样品为合格样品。作为一种优选的方案，步骤(3)中所述高效液相色谱仪检测条件的色谱柱型号为GRACEPrevailC185μ4.6×250mm。更为优选的是，步骤(3)中所述高效液相色谱仪检测条件的检测波长为338nm。更为优选的是，步骤(3)中所述高效液相色谱仪检测条件的流动相为：以乙腈为流动相A，以0.5％冰醋酸溶液为流动相B。更为优选的是，步骤(3)中所述高效液相色谱仪检测条件的流速为1.2mL/min，柱温为28℃。前述的一种甘草渣指纹图谱检测方法用于甘草渣指纹图谱的检测。前述的一种甘草渣指纹图谱检测方法用于甘草渣样品质量判定。本专利技术的有益效果在于：本专利技术提供的一种甘草渣指纹图谱检测方法具有以下优势：①专利技术提供的一种甘草渣指纹图谱检测方法具有特征的指纹特性，获得了甘草渣中所含化合物的色谱条件，建立了指纹档案，为药材的质量检测提供了技术支撑；②专利技术提供的一种甘草渣指纹图谱检测方法具有出峰多、分离度良好、重复性好、精密度高的特点，为全面监控甘草渣的质量提供了有效保障；③专利技术提供的一种甘草渣指纹图谱检测方法还可以检测甘草渣中甘草查尔酮A、甘草苷、甘草酸及芒柄花素的含量，实现多角度对甘草渣的质量控制；④专利技术提供的一种甘草渣指纹图谱检测方法简便、稳定、精密度高、重现性好，能有效表征甘草渣的质量，有利用于监控产品质量。附图说明图1是本专利技术的具体实施例中的对照指纹图谱；图2是本专利技术的具体实施例中的参比样品色谱图。具体实施方式为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例1一种甘草渣指纹图谱检测方法，包括以下步骤：(1)对照样品预处理：取对照甘草渣(新疆全安药业有限公司提供)样品充分粉碎、过80目筛得到对照甘草渣本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种甘草渣指纹图谱检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)对照样品预处理：取对照甘草渣样品充分粉碎、过80目筛得到对照甘草渣粉，取所述对照甘草渣粉适量，加23倍量的75‑80％乙醇间歇超声浸提，之后用75‑80％乙醇补足损失溶液量，摇匀，用0.2μm微孔滤膜滤过，得到对照样品溶液；所述间歇超声浸提的具体方法为，首先在功率50W、频率45kHz条件下超声3mim，快速冷却，然后在功率60W、频率55kHz条件下超声5mim，冷却至室温；(2)待测甘草渣样品预处理：取待测甘草渣样品充分粉碎、过80目筛得到待测甘草渣粉，取所述待测甘草渣粉适量，加23倍量的75‑80％乙醇间歇超声浸提，之后用75‑80％乙醇补足损失溶液量，摇匀，用0.2μm微孔滤膜滤过，得到待测甘草渣样品溶液；所述间歇超声浸提的具体方法为，首先在功率50W、频率45kHz条件下超声3mim，快速冷却，然后在功率60W、频率55kHz条件下超声5mim，冷却至室温；(3)对照样品和待测甘草渣样品检测：分别精密吸取所述对照样品溶液与所述待测甘草渣样品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪进行检测，并记录100min内的色谱图，得到对照样品色谱图和待测甘草渣样品色谱图；所述高效液相色谱仪检测条件如下：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充相；检测波长：335‑340nm；流动相：以乙腈为流动相A，以冰醋酸溶液为流动相B；梯度洗脱程序如下：...

【技术特征摘要】
1.一种甘草渣指纹图谱检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)对照样品预处理：取对照甘草渣样品充分粉碎、过80目筛得到对照甘草渣粉，取所述对照甘草渣粉适量，加23倍量的75-80％乙醇间歇超声浸提，之后用75-80％乙醇补足损失溶液量，摇匀，用0.2μm微孔滤膜滤过，得到对照样品溶液；所述间歇超声浸提的具体方法为，首先在功率50W、频率45kHz条件下超声3mim，快速冷却，然后在功率60W、频率55kHz条件下超声5mim，冷却至室温；(2)待测甘草渣样品预处理：取待测甘草渣样品充分粉碎、过80目筛得到待测甘草渣粉，取所述待测甘草渣粉适量，加23倍量的75-80％乙醇间歇超声浸提，之后用75-80％乙醇补足损失溶液量，摇匀，用0.2μm微孔滤膜滤过，得到待测甘草渣样品溶液；所述间歇超声浸提的具体方法为，首先在功率50W、频率45kHz条件下超声3mim，快速冷却，然后在功率60W、频率55kHz条件下超声5mim，冷却至室温；(3)对照样品和待测甘草渣样品检测：分别精密吸取所述对照样品溶液与所述待测甘草渣样品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪进行检测，并记录100min内的色谱图，得到对照样品色谱图和待测甘草渣样品色谱图；所述高效液相色谱仪检测条件如下：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充相；检测波长：335-340nm；流动相：以乙腈为流动相A，以冰醋酸溶液为流动相B；梯度洗脱程序如下：流速：1.2-1.5mL/min；柱温：26-28℃；(4)建立对照指纹图谱：所述对照样品色谱图即为对照指纹图谱，所述对照指纹图谱包括11个特征峰，且所述特征峰的相对保留时间分别为：峰1：0.117±0.005；峰2：0.517±0.005；峰3：0.638±0.005；峰4：0.655±0.005；峰5：0.707±0.005；峰6：0.793±0.005；峰7：0.965±0.005；峰8：1.00±0.005；峰9：1.052±0.005；峰10：1.241±0.005；11：1.259±0.005；(5)待测甘草渣样品指...

【专利技术属性】
技术研发人员：冀祖恩，石子怡，周寒利，罗恒磊，
申请(专利权)人：新疆全泰兴药业科技有限公司，
类型：发明
国别省市：新疆,65