本发明专利技术涉及HPV抗体检测技术领域，特别公开了一种HPV抗体快速检测试纸条及其制备方法和使用方法，所述试纸条包括沿层析方向依次设置的样品垫、结合垫、分析膜、吸水垫和手柄，所述样品垫的表面附着有柠檬酸‑柠檬酸钠，所述结合垫上设置有抗人IgG抗体‑纳米金颗粒，所述分析膜上设置有检测带和质控带，所述检测带的主要成分为HPV L1，所述质控带的主要成分为与抗人IgG抗体结合的二抗。该试纸条通过静电纺丝的方式制备相应的样品垫、结合垫、分析膜和吸水垫，便于批量测定HPV疫苗的接种效果，提高了HPV疫苗接种效果的检测效率，具有制备简单、便于批量生产的特点，适合医院、疾控、基层、卫生单位检测及家庭自用。
A test strip for rapid detection of HPV antibody and its preparation method and application method
【技术实现步骤摘要】
一种HPV抗体快速检测试纸条及其制备方法和使用方法
本专利技术涉及HPV抗体检测
，特别涉及一种HPV抗体快速检测试纸条及其制备方法和使用方法。
技术介绍
宫颈癌是临床最为常见的妇科肿瘤之一,主要由人乳头状瘤病毒(HPV)感染引发的，其发病率仅次于乳腺癌,居女性恶性肿瘤的第2位。在发展中国家，宫颈癌是女性癌症中死亡率最高的肿瘤。到目前为止，已报道发现的HPV有120多种，根据其致癌性分为高危型(致癌型)HPV、可能致癌性和低危型HPV，高危型HPV中以HPV16、HPV18、HPV31、HPV33型与宫颈癌的发病关系最为密切，尤其以HPV16、HPV18最为常见。据报道，在宫颈癌中这两种类型的HPV的检出率达70％以上。HPV16型多见于宫颈鳞癌，HPV18型多见于宫颈腺癌，而低危型HPV多在湿疣等良性病变中发现。HPV基因组编码的10个开放读码框架分别为E1～E8及L1～L2，其中HPVL1为主要衣壳蛋白。HPVL1是HPV病毒入侵细胞前便暴露于机体免疫系统的抗原，相比于其他病毒蛋白更容易被免疫系统识别和清除，是目前研究开发HPV疫苗的主要靶向抗原。随着HPV预防疫苗Gardasil和Cervarix的问世，宫颈癌成为第一个可预防的肿瘤，目前接种HPV疫苗的人群在不断增加，由此，HPV疫苗接种效果的检测问题也随之产生。目前，用于抗体检测的ELISA或者竞争性放射免疫分析法存在周期长、技术要求高等特点，难以满足对大批量疫苗接种人群的接种效果的检测，因此目前急需研发出一种能够批量测定HPV疫苗接种效果的方法。
技术实现思路
针对现有技术存在的不足，本专利技术的第一个目的在于提供一种HPV抗体快速检测试纸条，其通过对全血中HPV抗体的定性测定，能够快速有效的检测疫苗是否接种成功，便于批量测定HPV疫苗的接种效果，提高了HPV疫苗接种效果的检测效率。本专利技术的第二个目的是提供一种HPV抗体快速检测试纸条的制备方法，具有制备简单、便于批量生产的特点。本专利技术的第三个目的是提供一种HPV抗体快速检测试纸条的使用方法，其操作方便，适合医院、疾控、基层、卫生单位检测及家庭自用，适合推广。为实现上述第一个目的，本专利技术提供了如下技术方案：一种HPV抗体快速检测试纸条，包括沿层析方向依次设置的样品垫、结合垫、分析膜、吸水垫和手柄，所述样品垫的表面附着有柠檬酸-柠檬酸钠，所述结合垫上设置有抗人IgG抗体-纳米金颗粒，所述分析膜上设置有检测带和质控带，所述检测带的主要成分为HPVL1，所述质控带的主要成分为与抗人IgG抗体结合的二抗。通过采用上述技术方案，本申请在使用时，样品滴定在样品垫上，利用试纸条的免疫层析，再结合以抗人IgG抗体-纳米金颗粒和HPVL1作为双抗原，能够快速有效的检测疫苗是否接种成功，相对于ELISA或者竞争性放射免疫分析法对HPV抗体的含量测定，本申请技术要求低且便于批量测定HPV疫苗的接种效果，从而有效提高了HPV疫苗接种效果的检测效率。其原理具体为：倘若样品中含有HPV抗体，该HPV抗体先在结合垫上被抗人IgG抗体-纳米金颗粒中的抗人IgG抗体捕获结合，形成HPV抗体-抗人IgG抗体-纳米金颗粒，随后样品继续在分析膜上扩散，检测带上的HPVL1能与HPV抗体结合，进而HPVL1对HPV抗体-抗人IgG抗体-纳米金颗粒加以捕获并固定，形成HPVL1-HPV抗体-抗人IgG抗体-纳米金颗粒，由此检测带因纳米金颗粒的存在而显色，表示HPV疫苗接种成功。反之，若未显色则说明HPV疫苗接种失败。与此同时，样品继续在分析膜上扩散，质控带上的二抗能与抗人IgG抗体结合，进而二抗对多余的抗人IgG抗体-纳米金颗粒加以捕获并固定，形成二抗-抗人IgG抗体-纳米金颗粒，由此质控带因纳米金颗粒的存在而显色，表示试纸条有效。待样品层析结束后，多余的样品和抗人IgG抗体-纳米金颗粒被吸水垫吸收，能够保证检测过程的整洁，手柄的设置便于人们的握持，以此操作人员的操作更为便捷。另外，HPV抗体的检测通常是对全血的测定，本申请在样品垫吸附的上柠檬酸-柠檬酸钠能够为全血维持一个较为稳定的缓冲环境，减少全血的凝集，与此同时，还能改善分析膜的分子结构，加快抗体抗原在分析膜中的扩散速率，以此便于提高试纸条对HPV疫苗接种效果的测定速率。进一步地，所述试纸条还包括底板，所述样品垫、结合垫、分析膜和吸水垫沿层析方向依次固定于底板的一侧面上，所述手柄的一端与所述底板相连。通过采用上述技术方案，底板的设置有助于为样品垫、结合垫、分析膜和吸水垫提供良好的支撑作用，增加试纸条的结构强度，使得样品能够匀速的进行层析，保证试纸条的检测效率。为实现上述第二个目的，本专利技术提供了如下技术方案：一种HPV抗体快速检测试纸条的制备方法，包括以下步骤：①、胶液的配制将羧甲基纤维素钠和蒸馏水按1：99的重量比混合均匀，得到胶液；②、柠檬酸-柠檬酸钠膏体的配制将柠檬酸、柠檬酸钠和蒸馏水按2：8：90的重量比混合均匀，得到柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液；③、样品垫的浸润干燥处理将样品垫浸入步骤②制得的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液中，润湿后取出沥干柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液；④、试纸条的粘接成型取出底板，在底板的一侧面涂覆上步骤①制得的胶液，先将分析膜铺设于底板的中部，再依次将结合垫铺设于分析膜在远离手柄的一端、将吸水垫铺设于分析膜在靠近手柄的一端、将经浸润干燥后的样品垫铺设于结合垫远离分析膜的一端，晾干蒸馏水后根据试纸卡的规格切割成一定的长度和宽度，即得所述的试纸条。通过采用上述技术方案，本申请使用羧甲基纤维素钠作为粘结剂，通过胶粘和晾干蒸馏水的方式使得样品垫、结合垫、分析膜和吸水垫稳定的固定于底板上，以此相对于热熔压制的方式能够较好的保证试纸条中如抗人IgG抗体、二抗等组分的活性，实现试纸条的定性测定。进一步地，所述样品垫的制备方法包括以下步骤：a、将硝酸纤维素、高分子吸水树脂分别使用乙醇溶解，对应的形成NC胶液和树脂胶液；b、用PVC片作为基层，采用静电纺丝法自下而上依次对树脂胶液和NC胶液进行纺丝，乙醇挥发完全后得到“NC膜-吸水层-基层”结构的样品垫。通过采用上述技术方案，基层为NC膜和吸水层提供良好的支撑作用，使得样品垫具有一定的结构强度，其中NC膜和吸水层采用静电纺丝的方式制备而成，以此使得NC膜和吸收层具有较大的孔隙率，便于样品能够在样品垫中的扩散，加快试纸条的检测效率。进一步地，所述结合垫的制备方法包括以下步骤：c、将胶体金溶液的pH调节至6.0-6.4后与抗人IgG抗体合并反应15-20min，随后加入BSA终止合并，依次经混匀、静置及离心，得到抗人IgG抗体-纳米金颗粒；d、将硝酸纤维素颗粒使用乙醇溶解，采用静电纺丝法制成片材，乙醇充分挥发后将步骤A中获得的抗人IgG抗体-纳米金颗粒经分散稀释后涂覆在片材上，干燥后得到结合垫。通过采用上述技术方案，胶体金溶液中的纳米金颗粒先与抗人IgG抗体结合，BSA为牛血清白蛋白，其作为终止剂终止纳米金颗粒和抗人IgG抗体的结合，以此能够快速有效的获得抗人IgG抗体-纳米金颗粒，反应条件温和，保证了各组分的生物活性。硝酸纤维素采用静电纺丝方式制成的片材，其高孔隙率的特点有助于吸附较多的抗人IgG抗体-纳米金颗粒，使得试纸条的结果显示本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种HPV抗体快速检测试纸条，其特征在于，包括沿层析方向依次设置的样品垫(2)、结合垫(3)、分析膜(4)、吸水垫(5)和手柄(6)，所述样品垫(2)的表面附着有柠檬酸‑柠檬酸钠，所述结合垫(3)上设置有抗人IgG抗体‑纳米金颗粒，所述分析膜(4)上设置有检测带(7)和质控带(8)，所述检测带(7)的主要成分为HPV L1，所述质控带(8)的主要成分为与抗人IgG抗体结合的二抗。
【技术特征摘要】
1.一种HPV抗体快速检测试纸条，其特征在于，包括沿层析方向依次设置的样品垫(2)、结合垫(3)、分析膜(4)、吸水垫(5)和手柄(6)，所述样品垫(2)的表面附着有柠檬酸-柠檬酸钠，所述结合垫(3)上设置有抗人IgG抗体-纳米金颗粒，所述分析膜(4)上设置有检测带(7)和质控带(8)，所述检测带(7)的主要成分为HPVL1，所述质控带(8)的主要成分为与抗人IgG抗体结合的二抗。2.根据权利要求1所述的一种HPV抗体快速检测试纸条，其特征在于，所述试纸条还包括底板(1)，所述样品垫(2)、结合垫(3)、分析膜(4)和吸水垫(5)沿层析方向依次固定于底板(1)的一侧面上，所述手柄(6)的一端与所述底板(1)相连。3.根据权利要求2所述的一种HPV抗体快速检测试纸条的制备方法，包括以下步骤：①、胶液的配制将羧甲基纤维素钠和蒸馏水按1：99的重量比混合均匀，得到胶液；②、柠檬酸-柠檬酸钠膏体的配制将柠檬酸、柠檬酸钠和蒸馏水按2：8：90的重量比混合均匀，得到柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液；③、样品垫(2)的浸润干燥处理将样品垫(2)浸入步骤②制得的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液中，润湿后取出沥干柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液；④、试纸条的粘接成型取出底板(1)，在底板(1)的一侧面涂覆上步骤①制得的胶液，先将分析膜(4)铺设于底板(1)的中部，再依次将结合垫(3)铺设于分析膜(4)在远离手柄(6)的一端、将吸水垫(5)铺设于分析膜(4)在靠近手柄(6)的一端、将经浸润干燥后的样品垫(2)铺设于结合垫(3)远离分析膜(4)的一端，晾干蒸馏水后根据试纸卡的规格切割成一定的长度和宽度，即得所述的试纸条。4.根据权利要求3所述的一种HPV抗体快速检测试纸条的制备方法，其特征在于，所述样品垫(2)的制备方法包括以下步骤：a、将硝酸纤维素、高分子吸水...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈彬，
申请(专利权)人：津熙医学科技上海有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31
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