一种超临近流体提取鸡骨香根提取物及其方法、应用技术

本发明专利技术属于药物提取技术领域，具体涉及一种超临近流体提取鸡骨香根提取物及其方法、应用。该鸡骨香提取物，命名为化合物J‑1，具体结构式为：

Extraction of Root Extract from Chicken Bone by Super-adjacent Fluid and Its Method and Application

【技术实现步骤摘要】
一种超临近流体提取鸡骨香根提取物及其方法、应用
本专利技术属于药物提取
，具体涉及一种超临近流体提取鸡骨香根提取物及其方法、应用。
技术介绍
巴豆属是大戟科，在全球拥有超过1300种，是广泛分布于热带和亚热带地区的一个大属。中国大约生长有21种巴豆属植物，其中一些长期以来被用于缓解痛经和中医治疗消化不良和疟疾。巴豆属的植物以其多种萜类化合物而闻名，具有广泛的生物活性。此外，还获得了生物碱，黄烷酮，木脂素，多酚化合物，苯基丁酸和肽。CrotoncrassifoliusGeisel是巴豆属的一种，主要分布于中国南部和东南亚其他地区。作为一种名为“鸡骨香”的中药材，其根已被用于治疗癌症，胃痛，喉咙痛和风湿病。现有的植物化学研究表明，C.crassifolius中的主要植物化学物质是萜类化合物，包括倍半萜，二萜和三萜。二萜被认为是C.crassifolius中的主要和特征化合物，具有各种生物活性，如抗病毒和抗血管生成活性。目前，关于C.crassifolius的大多数研究都关注其根提取物在医学中的应用，并且很少研究其低极性部分的利用。现有技术中，据报道该草药的低极性部分含有丰富的活性化合物，但是具体的研究较少。尚未有本专利技术化合物提取的相关记载。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供了一种超临近流体提取鸡骨香根提取物，该提取物具有高的抗肿瘤活性，具有抗增殖和诱导细胞凋亡的作用。本专利技术还提供了一种超临近流体提取鸡骨香根提取物的提取方法。本专利技术另一目的在于提供了一种上述鸡骨香根提取物的应用。本专利技术为了实现上述目的所采用的技术方案为：一种超临界流体提取鸡骨香根提取物，所述提取物的结构式如下：本专利技术还提供了一种超临界流体提取鸡骨香根提取物的方法，包括以下步骤：（1）取鸡骨香干燥根，粉碎，过40目筛，称取样品，装入超临界CO2流体萃取仪的反应釜中，首先静态提取，接着动态提取，以甲醇为夹带剂，获得深黄色浸膏，将浸膏用温水冲散，以二氯甲烷充分萃取，得萃取物；（2）配制洗脱剂，极性梯度为石油醚/丙酮(50:1~1:2)，每个比例洗脱5.0L，将萃取物经薄层色谱分析，选择石油醚-丙酮分离体系，用100-200目硅胶干法装柱，进行粗分；薄层色谱检测合并，获得5个组分A1～A5；（3）将A4用200-300目硅胶细分；配制石油醚-乙酸乙酯体系洗脱液进行梯度洗脱，极性梯度为8:1-5:1，将薄层色谱检测合并为6个部分A4a-A4f；A4f部分先经SephadexLH-20柱层析，以二氯甲烷-甲醇反复洗脱，取中间段经C18柱并65-85%CH3OH/H2O(2mL/min,20min)梯度洗脱，紫外检测器210nm处检测，将14.600min馏分浓缩后继续以55%CH3CN/H2O(2mL/min)等度洗脱，获得鸡骨香提取物，命名为化合物J-1。进一步的，所述静态提取为在压力25MPa，温度35℃条件下提取30min。进一步的，所述动态提取时，CO2流速5.0L/min，以甲醇为夹带剂，甲醇的流速为5.4mL/min。进一步的，所述A1为石油醚/丙酮=50:1-30:1部分；A2为石油醚/丙酮=15:1部分；A3为石油醚/丙酮=10:1-8:1部分；A4为石油醚/丙酮=6:1-2:1部分；A5为石油醚/丙酮=1:1-1:2部分。进一步的，所述A4a-A4f分别为：0-800mL;800-2000mL;2000-2800mL;2800-4000mL;4000-52000mL;5200-6000mL。进一步的，步骤（3）中，所述二氯甲烷-甲醇的体积比为1：1。本专利技术还提供了一种上述提取方法提取的化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。本专利技术从鸡骨香中提取的化合物具有抑制A549细胞增殖并将A549细胞周期阻滞于G2/M期。化合物增加了A549细胞中Bax/Bcl-2的比例，导致线粒体膜电位崩溃，随后细胞色素C的释放和caspase级联反应的激活，导致PARP的裂解和最终的细胞凋亡。通过主动追踪方法分离天然二萜类化合物1，并且抗增殖评价证明其作为未来抗癌疗法候选物的潜力。本专利技术的有益效果为：（1）本专利技术提取的化合物药物原料易得，易于产业化，可以根据需要制备成不同的剂型，具有巨大的社会效益。（2）本专利技术提取的化合物，纯度高，且抗肿瘤活性高，具有抗增殖和诱导细胞凋亡的作用，具有作为抗癌疗法候选物的潜力。附图说明图1为化合物J-1的HMBC和RORSY的谱图，以及ECD光谱。图2为不同浓度的化合物J-1对A549细胞迁移的影响图。图3为不同浓度的化合物J-1处理肺癌细胞A549细胞后，用Hoechst33258染色图。具体实施方式下面通过具体的实施例对本专利技术的技术方案作进一步的解释和说明。实施例1（1）材料和方法Crassifolius根于2017年10月在中国安徽亳州的中草药市场购买。该物种由山东省农业科学院农产品研究所单成钢教授鉴定（IAST，SAAS），济南，中国。凭证样本（No.17-10-29）保存在SAAS的IAST生物活性物质和功能食品实验室。（2）提取过程：取鸡骨香干燥根，中药粉碎机粉碎，过40目筛(450μm)。称取2.0kg样品，分10次装入超临界CO2流体萃取仪的反应釜(650mL)中，每次200g。在25MPa、35oC下静态提取30分钟，接着动态提取30分钟(CO2流速5.0L/min)，以甲醇为夹带剂(流速5.4mL/min)。共获得深黄色浸膏100.4g，将浸膏用500mL温水冲散，以二氯甲烷r(500mL×5次)充分萃取，共得到萃取物77.0g；经薄层色谱分析，选择石油醚-丙酮分离体系。用100-200目硅胶干法装柱，进行粗分。配制洗脱剂，极性梯度为石油醚/丙酮(50:1~1:2)，每个比例洗脱5.0L，薄层色谱检测合并，获得5个组分A1~A5。A4(石油醚/丙酮=6:1-2:1部分，7.3g)用200-300目硅胶细分。配制石油醚-乙酸乙酯体系洗脱液进行梯度洗脱，极性梯度为8:1-5:1，在8:1部分析出无色块状晶体，薄层色谱检测不纯，甲醇溶解后以半制备液相进一步纯化，经C18柱并65-85%CH3OH/H2O(2mL/min,20min)梯度洗脱，紫外检测器210nm处检测，获得化合物J-11(4.1mg,tR16.800min)；将母液再次薄层色谱检测合并为6个部分A4a-A4f；A4f部分先经SephadexLH-20柱层析，以二氯甲烷-甲醇(1:1)反复洗脱，取中间段经C18柱并65-85%CH3OH/H2O(2mL/min,20min)梯度洗脱，紫外检测器210nm处检测，将14.600min馏分浓缩后继续以55%CH3CN/H2O(2mL/min)等度洗脱，获得化合物J-1(2.4mg,tR23.492min)，具体结构式如下：（3）实验程序室温下在AutopolVI旋光仪上测量旋光度。利用NICOLETIR200FT-IR分光光度计记录红外辐射（IR）光谱。在ShimadzuUV-2550分光光度计上获得UV数据。ECD数据在JASCO810分光光度计上获得。利用BrukerAvanceDRX-400光谱仪在600MHz（1H）和150MHz（13C）下记录NMR光谱。HR-ESI-MS在Agile本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种超临界流体提取鸡骨香根提取物，其特征在于，所述提取物的结构式如下：

【技术特征摘要】
1.一种超临界流体提取鸡骨香根提取物，其特征在于，所述提取物的结构式如下：。2.一种如权利要求1所述的超临界流体提取鸡骨香根提取物的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）取鸡骨香干燥根，粉碎，过40目筛，称取样品，装入超临界CO2流体萃取仪的反应釜中，首先静态提取，接着动态提取，以甲醇为夹带剂，获得深黄色浸膏，将浸膏用温水冲散，以二氯甲烷充分萃取，得萃取物；（2）配制洗脱剂，极性梯度为石油醚/丙酮(50:1~1:2)，每个比例洗脱5.0L，将萃取物经薄层色谱分析，选择石油醚-丙酮分离体系，用100-200目硅胶干法装柱，进行粗分；薄层色谱检测合并，获得5个组分A1～A5；（3）将A4用200-300目硅胶细分；配制石油醚-乙酸乙酯体系洗脱液进行梯度洗脱，极性梯度为8:1-5:1，将薄层色谱检测合并为6个部分A4a-A4f；A4f部分先经SephadexLH-20柱层析，以二氯甲烷-甲醇反复洗脱，取中间段经C18柱并65-85%CH3OH/H2O(2mL/min,20min)梯度洗脱，紫外检测器210nm处检测，将14.600min馏分浓缩后继续以55%CH...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘超，孙金月，张瑞瑞，王青，程安玮，王新坤，郭溆，
申请(专利权)人：山东省农业科学院农产品研究所，
类型：发明
国别省市：山东,37