抗Tau纳米抗体制造技术

本发明专利技术涉及抗Tau纳米抗体。

Anti-Tau nanoantibodies

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗Tau纳米抗体
本专利技术涉及抗Tau纳米抗体。
技术介绍
目前有一种共识，认为阿尔茨海默氏病(AD)的散发形式(sporadicform)是一种连续体，从临床前无症状形式到临床上以认知和记忆测试为特征的疾病，以及各种生物标志物(Dubois等人，LancetNeurology,13,614-629(2014))。然而，新治疗策略的开发需要诊断方法，其允许早期检测并且使得可以监测处于危险中的群体中的神经变性迹象，以便选择应被治疗的患者并控制治疗的效果。AD由进行性痴呆综合征和两种特征性脑损伤的组合定义：由淀粉样肽(Aβ)组成的细胞外老年斑(AP)和由过度磷酸化的Tau蛋白聚集体组成的神经原纤维变性(NFD)。在皮质中观察到AP之前，NFD出现在内嗅皮层结构中(Braak等人，JournalofNeuropathologicalExperimentalNeurology,70(11):960-969(2011))。此外，皮质分布和NFD的数量与AD患者的记忆问题相关(Nelson等人，JournalofNeuropathologicalExperimentalNeurology,71(5)；362-381(2012))。最近，已经表明Tau的寡聚形式代表了Tau蛋白病的传播相关的毒性形式(Usenovic等人，JournalofNeuroscience,35(42):14234-14250(2015))(Goedert等人，CurrentNeurologyandNeuroscience,14:495(2014))，如AD，通过逐渐污染神经元。核脑成像(单光子发射计算机断层扫描(SPECT)和正电子发射断层扫描(PET))是确定与AD相关的分子病变的存在和进展的适当工具(Dubois等人，Alzheimer’s&Dementia,12(3):292-323(2016))。AP的放射性配体已经可用作(Catafau和Bullich,ClinicalandTranslationalImaging,3(1):39-55(2015))一些放射示踪剂。目前正在开发针对NFD内的□-片的示踪剂。它们中的两个，18F-AV-1451(Ossenkoppele等人，Brain,139(5):1551-1567(2016))和18F-THK5117(Jonasson等人，JournalofNuclearMedicine,57(4):574-581(2016))，可能有助于患有NFD型病变的患者的分层。另一方面，它们都不能检测和监测Tau的可溶性寡聚形式。在生理条件下，高度可溶的Tau蛋白与微管相互作用以稳定它们，其部分磷酸化允许其与微管交替分离。Tau蛋白通常非常易溶并且是非结构化形式。在某些病理条件下，Tau的翻译后修饰，特别是过度磷酸化，导致蛋白质结构化并形成聚集体：二聚体、寡聚体、纤维：螺旋形细丝对导致NFD的形成。从AD和其他tau蛋白病的病变的毒性和传播的角度来看，目前主要重点属于Tau寡聚体。在申请US2015/0266947中描述了针对寡聚体形式、特别是二聚体和三聚体形式的Tau蛋白的scFv。这些大小为约30kDa的scFv不针对纤维形式的Tau。为了开发用于靶向该分子的各种聚集形式的核成像的Tau的病理形式的新标记，本专利技术人通过靶向病理形式，特别是Tau的早期病理形式，开发了纳米抗体(Nbs)，特别是VHH，更特别是寡聚体形式和可选的纤维形式的Tau。因此，这些纳米抗体能够改善AD的诊断和监测，并且还能够评估潜在治疗的效果。这些纳米抗体还可以靶向并因此鉴定除AD之外的tau蛋白病中Tau的病理形式的存在。根据本专利技术的VHH形式的纳米抗体是对应于某些骆驼科抗体的重链的可变结构域的抗体的小片段。它们是衍生自具有抗原结合结构域的免疫球蛋白的最小功能元件(10-15kDa)，并且它们对抗原的亲和力为约1纳摩尔。由于它们结构简单，没有Fc型结构域，分子量低，因此它们是穿越血脑屏障的合适工具(Caljon等人，BritishJournalofPharmacology,165(7):2341-2353(2012))。
技术实现思路
因此，本专利技术涉及结合Tau蛋白的病理形式的纳米抗体，Tau蛋白的病理形式特别是Tau的早期病理形式，例如寡聚体形式的Tau和可选的纤维形式的Tau。因此，本专利技术的主题是针对寡聚体形式的Tau蛋白并且针对纤维形式的Tau蛋白的纳米抗体。本专利技术还涉及针对Tau蛋白的纳米抗体，所述Tau蛋白为寡聚体形式且所述纳米抗体缺乏轻链。因此，本专利技术的主题是针对Tau蛋白的纳米抗体，所述Tau蛋白是病理形式，特别是寡聚体形式，并且所述纳米抗体与包含以下氨基酸序列的纳米抗体竞争结合寡聚体形式的Tau蛋白：(i)GRTFSX1X2X3(SEQIDNo.1)作为CDR1，其中氨基酸X1是S或R，X2是D或Y并且X3是T或A，(ii)ISX1SGGX2T(SEQIDNo.2)作为CDR2，其中氨基酸X1是P或R，并且X2是S或V，和(iii)NRDPKYGNTRY(SEQIDNo.5)或TARRRISGTPQWHY(SEQIDNo.8)作为CDR3。本专利技术进一步涉及针对Tau蛋白的纳米抗体，所述Tau蛋白是病理形式，特别是寡聚体形式，并且所述纳米抗体与纳米抗体竞争结合寡聚体形式的Tau蛋白，包含以下各项：a)氨基酸序列(i)GRTFSSDT(SEQIDNo.3)作为CDR1，(ii)ISPSGGVT(SEQIDNo.4)作为CDR2和(iii)NRDPKYGNTRY(SEQIDNo.5)作为CDR3；或b)氨基酸序列(i)GRTFSRYA(SEQIDNo.6)作为CDR1，(ii)ISRSGGST(SEQIDNo.7)作为CDR2，(iii)TARRRISGTPQWHY(SEQIDNo.8)作为CDR3。本专利技术还涉及针对Tau蛋白的纳米抗体，所述纳米抗体包含以下氨基酸序列：(i)GRTFSX1X2X3(SEQIDNo.1)作为CDR1，其中氨基酸X1是S或R，X2是D或Y并且X3是T或A，(ii)ISX1SGGX2T(SEQIDNo.2)作为CDR2，其中氨基酸X1是P或R，并且X2是S或V，和(iii)NRDPKYGNTRY(SEQIDNo.5)或TARRRISGTPQWHY(SEQIDNo.8)作为CDR3。本专利技术进一步涉及针对Tau蛋白的纳米抗体，包含：a)氨基酸序列(i)GRTFSSDT(SEQIDNo.3)作为CDR1，(ii)ISPSGGVT(SEQIDNo.4)作为CDR2和(iii)NRDPKYGNTRY(SEQIDNo.5)作为CDR3；或b)氨基酸序列(i)GRTFSRYA(SEQIDNo.6)作为CDR1，(ii)ISRSGGST(SEQIDNo.7)作为CDR2，(iii)TARRRISGTPQWHY(SEQIDNo.8)作为CDR3；或a)或b)中定义的纳米抗体的功能保守变体，其包含序列SEQIDNo.3、SEQIDNo.4和SEQIDNo.5或SEQIDNo.6、SEQIDNo.7和SEQIDNo.8中分别一个、两个或三个中的一个或两个氨基酸的保守替换。本专利技术还涉及如上定义本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种针对Tau蛋白的纳米抗体，所述Tau蛋白为寡聚体形式且所述纳米抗体缺乏轻链。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.10.27 FR 16604501.一种针对Tau蛋白的纳米抗体，所述Tau蛋白为寡聚体形式且所述纳米抗体缺乏轻链。2.如权利要求1所述的纳米抗体，所述纳米抗体与包含以下氨基酸序列的纳米抗体竞争结合寡聚体形式的Tau蛋白：(i)GRTFSX1X2X3(SEQIDNo.1)作为CDR1，其中氨基酸X1是S或R，X2是D或Y并且X3是T或A，(ii)ISX1SGGX2T(SEQIDNo.2)作为CDR2，其中氨基酸X1是P或R，并且X2是S或V，和(iii)NRDPKYGNTRY(SEQIDNo.5)或TARRRISGTPQWHY(SEQIDNo.8)作为CDR3。3.如权利要求1或2所述的纳米抗体，所述纳米抗体与选自包含以下的纳米抗体的纳米抗体竞争结合寡聚体形式的Tau蛋白：a)氨基酸序列(i)GRTFSSDT(SEQIDNo.3)作为CDR1，(ii)ISPSGGVT(SEQIDNo.4)作为CDR2和(iii)NRDPKYGNTRY(SEQIDNo.5)作为CDR3；或b)氨基酸序列(i)GRTFSRYA(SEQIDNo.6)作为CDR1，(ii)ISRSGGST(SEQIDNo.7)作为CDR2和(iii)TARRRISGTPQWHY(SEQIDNo.8)作为CDR3。4.如权利要求1至3中任一项所述的纳米抗体，所述纳米抗体包含以下氨基酸序列：(i)GRTFSX1X2X3(SEQIDNo.1)作为CDR1，其中氨基酸X1是S或R，X2是D或Y并且X3是T或A，(ii)ISX1SGGX2T(SEQIDNo.2)作为CDR2，其中氨基酸X1是P或R，并且X2是S或V，和(iii)NRDPKYGNTRY(SEQIDNo.5)或TARRRISGTPQWHY(SEQIDNo.8)作为CDR3。5.如权利要求1至4中任一项所述的纳米抗体，所述纳米抗体包含：a)氨基酸序列(i)GRTFSSDT(SEQIDNo.3)作为CDR1，(ii)ISPSGGVT(SEQIDNo.4)作为CDR2和(iii)NRDPKYGNTRY(SEQIDNo.5)作为CDR3；或b)氨基酸序列(i)GR...

【专利技术属性】
技术研发人员：丹尼尔·法格雷，玛塞勒·穆兰，卡特琳·盖齐，帕斯卡莱·佩雷特，萨比娜·谢里西，
申请(专利权)人：阿尔卑斯格勒诺布尔大学，格勒诺布尔大学中心医院，法国国家健康与医学研究院，
类型：发明
国别省市：法国,FR