【技术实现步骤摘要】
一种基于CRISPR/Cas13a的食源性致病菌核酸纳米荧光痕量检测方法
本专利技术属于食源性致病菌痕量检测
，尤其涉及一种基于CRISPR/Cas13a的食源性致病菌核酸纳米荧光痕量检测方法。
技术介绍
食源性致病菌是引发食源性疾病的主要原因之一，是世界食品安全的重要，已严重威胁到人类健康。食源性致病菌的检测是食品安全保障的重要手段。伴随着核酸检测技术的快速发展，各种食源性致病菌的快速检测方法相继而生。常用的有聚合酶链式反应及其衍生技术、核酸恒温扩增技术、寡核苷酸微阵列技术和免疫磁性细胞分离技术等。现有的这些方法虽各有优势，但存在检测周期长或者检测时荧光背景太强等缺陷。鉴于申请人在食品无损检测领域积累的良好经验以及团队成员熟练的分子生物学基础，特别是在上转换荧光检测技术以及CRISPR/Cas
的深入研究，本项目拟构建一种基于CRISPR/Cas13a的食源性致病菌核酸纳米荧光痕量检测方法，深入探究快速、灵敏的食源性致病菌核酸定量检测方法，该方法适用于食品安全、环境监测等
目前，运用上转换荧光纳米技术实现食源性致病菌核酸的快速检测方法仍未报道...
【技术保护点】
1.一种基于CRISPR/Cas13a的食源性致病菌核酸纳米荧光痕量检测方法，其特征在于，以食源性致病菌核酸为研究对象，运用CRISPR/Cas13a技术，结合重组酶聚合酶扩增技术制备核酸靶标，并合成猝灭荧光RNA报告标志物，构建一套强大的核酸检测工具，运用核酸酶Cas13a对痕量致病菌细胞中的特定核酸靶标进行精确切割，并利用核酸酶Cas13a附带切割效应，剪切猝灭荧光RNA报告标志物，释放可被检测的荧光；借助荧光光谱系统采集荧光光谱数据，获取上转换荧光纳米材料最大吸收峰的荧光强度值，构建上转换纳米荧光强度与食源性致病菌核酸靶标含量的定量检测模型，实现食源性致病菌核酸纳米荧光痕量快速检测。
【技术特征摘要】
1.一种基于CRISPR/Cas13a的食源性致病菌核酸纳米荧光痕量检测方法，其特征在于，以食源性致病菌核酸为研究对象，运用CRISPR/Cas13a技术，结合重组酶聚合酶扩增技术制备核酸靶标，并合成猝灭荧光RNA报告标志物，构建一套强大的核酸检测工具，运用核酸酶Cas13a对痕量致病菌细胞中的特定核酸靶标进行精确切割，并利用核酸酶Cas13a附带切割效应，剪切猝灭荧光RNA报告标志物，释放可被检测的荧光；借助荧光光谱系统采集荧光光谱数据，获取上转换荧光纳米材料最大吸收峰的荧光强度值，构建上转换纳米荧光强度与食源性致病菌核酸靶标含量的定量检测模型，实现食源性致病菌核酸纳米荧光痕量快速检测。2.根据权利要求1所述的一种基于CRISPR/Cas13a的食源性致病菌核酸纳米荧光痕量检测方法，其特征在于，所述荧光光谱数据采集的方法为：将纯化的Cas13a蛋白、crRNA、猝灭荧光RNA报告标志物、RNA酶抑制剂、背景RNA和不同含量的致病菌体外转录的RNA核酸靶标混合在核酸酶测定缓冲液中孵育，通过上转换荧光光谱仪记录不同含量致病菌核酸靶标所...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈全胜，李欢欢，吕鹏，刘蕊，欧阳琴，王平月，许婧，许艺，郭志明，
申请(专利权)人：江苏大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32
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