一种DNA片段及其在构建表达红色荧光蛋白基因的重组流感病毒中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种DNA片段及其在构建表达红色荧光蛋白基因的重组流感病毒中的应用。本发明专利技术在H9N2流感病毒毒株的NS1基因后面插入mCherry荧光基因，其中，完整NS基因以NS1基因、mCHerry荧光基因和NEP基因依次连接而成，该基因与NEP基因中间用可以被蛋白酶识别并切割的PTV‑1 2A序列相连，从而构成荧光蛋白标记的NS融合基因，其核苷酸如SEQ ID NO:1所示。本发明专利技术构建的重组流感病毒为可产生表达红色荧光蛋白的活病毒，其在病毒传代的过程中较为稳定，不影响病毒自身的功能，且生长曲线与滴度与野生病毒株相似，可将其用于后续研究，对抗流感病毒药物的研发、筛选和生产具有重要意义。

A DNA Fragment and Its Application in Construction of Recombinant Influenza Virus Expressing Red Fluorescent Protein Gene

【技术实现步骤摘要】
一种DNA片段及其在构建表达红色荧光蛋白基因的重组流感病毒中的应用
本专利技术属于分子生物学领域，特别涉及一种DNA片段及其在构建表达红色荧光蛋白基因的重组流感病毒中的应用。
技术介绍
流感病毒属于正粘病毒科的单股负链RNA病毒，分为A(甲)、B(乙)、C(丙)三型。其中A型病毒的天然宿主是野生水禽，可以感染多种禽类和哺乳动物，是导致人类流感和禽流感流行的病原。禽流感自1978年首次报道以来，已经引发世界范围内多次大流行导致人和家禽大规模的死亡，严重威胁养禽业和公共卫生安全。此外，根据最近的研究，季节性流感影响了约20％的世界人口，并导致每年250,000至500,000人死亡。病毒的蛋白经过荧光蛋白标记后，拯救的重组病毒会携带荧光基因，从而能够在活细胞或者活体中被观察到。近年来，已有多种病毒，例如乙肝病毒、腺病毒以及流感病毒等成功经过荧光标记后，用于科学研究。齐鲁医药学院成功构建一株表达绿色荧光蛋白(EGFP)基因的人肠道病毒EV71型重组病毒，用于借助酶标仪建立中草药或中草药单体抗病毒的高通量筛选技术。遵义医学院附属医院将流感病毒的NP蛋白与绿色荧光蛋白(EGFP)融合，可以通过本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种DNA片段，其特征在于：其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种DNA片段，其特征在于：其核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。2.含有权利要求1所述的DNA片段的重组质粒或重组病毒。3.一种重组质粒，其特征在于：为将权利要求1所述的DNA片段插入到双向表达载体pHW2000的AarI的酶切位点上获得。4.权利要求3所述的重组质粒的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：将权利要求1所述的DNA片段用AarI限制性内切酶进行酶切，然后将其用连接酶连接到用BsmBI限制性内切酶切后的双向表达载体pHW2000上，得到重组表达质粒pHW-NS1-mCherry-NEP。5.权利要求3所述的重组质粒在构建重组禽流感病毒中的应用。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述的禽流感病毒为H9N2亚型禽流感病毒A/chicken/Guangdong/V/2008株。7.一种表达红色荧光蛋白基因的重组流感病毒的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)构建7个基因的重组表达质粒：将PB2、PB1、PA、HA、NP、NA和M基因分别用BsmBI限制性内切酶酶切，然后分别用连接酶连接到用BsmBI限制性内切酶切后的双向表达载体pHW2000上，得到重组表达质粒pHW-V-PB2、pHW-V-PB1、pHW-V-PA、pHW-V-HA、pHW-V-NP、pHW-V-NA和pHW-V-M；(2)构建NS1蛋白携带mCherry荧光基因的重组流感病毒将权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：亓文宝，周傲白雪，劳光杰，廖明，李华楠，李小康，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：广东,44