一种诱导人羊膜上皮细胞向视网膜色素上皮细胞分化的方法及其应用技术

本发明专利技术涉及一种诱导人羊膜上皮细胞向视网膜色素上皮细胞分化的方法及其在治疗视网膜退行性疾病中的应用，该方法为向人羊膜上皮细胞中添加含有10‑100mM烟酰胺和1‑10μM曲古抑菌素A的诱导组合物，诱导产生的细胞高表达MITF、PMEL17、RPE65、Bestrophin等视网膜色素上皮细胞的典型基因。将利用该方法诱导产生的细胞注射到RCS大鼠视网膜下腔，通过ERG以及眼底检测发现大鼠眼睛电生理信号明显增强，眼底结构明显改善，眼球切片HE染色显示其视网膜厚度明显增加，经过上述方案诱导分化后的细胞经注射后对大鼠的视力有一定程度的恢复。本发明专利技术中的诱导复合物能够用于人羊膜上皮细胞向视网膜色素上皮细胞的分化以及治疗视网膜损伤相关的眼部疾病。

A Method of Inducing Human Amniotic Epithelial Cells to Differentiate into Retinal Pigment Epithelial Cells and Its Application

【技术实现步骤摘要】
一种诱导人羊膜上皮细胞向视网膜色素上皮细胞分化的方法及其应用
本专利技术属于生物
，具体涉及一种诱导人羊膜上皮细胞向视网膜色素上皮细胞分化的方法及其在治疗视网膜退行性疾病中的应用。技术背景视网膜神经退行性疾病目前已经成为世界范围内不可逆致盲的主要原因，影响着数以千万人的视力健康，如视网膜色素变性(RetinitisPigmentosa,RP)、年龄相关性黄斑变性(Age-relatedMacularDegeneration,AMD)及青光眼等。主要表现为视网膜色素上皮(Retinalpigmentepithelial，RPE)细胞及感光细胞(Photoreceptorcell)进行性损伤、丢失而引起视网膜功能障碍，最终导致患者进行性不可逆性视功能下降或丧失，此类疾病至今仍无有效的治疗方法，目前临床上对此缺乏行之有效的治疗手段。但近些年随着技术的发展，基因治疗、干细胞治疗以及人工视觉等方法给上述疾病提供了治疗的可能。由于眼部较为特殊的生理以及解剖学特点，使其成为上述前沿治疗技术的先行者。首先，由于血-视网膜屏障的存在使眼部成为一个相对独立的器官，外来移植物不容易引起较大的机体本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种诱导人羊膜上皮细胞向视网膜色素上皮细胞分化的方法，所述方法包括如下的步骤：(1)取人羊膜上皮细胞，在适宜的条件下培养12‑48小时；(2)添加诱导组合物继续培养5‑20天，诱导人羊膜上皮细胞分化为视网膜色素上皮细胞，其中所述的诱导组合物为含有10‑100mM烟酰胺和1‑10μM曲古抑菌素A的细胞培养基。

【技术特征摘要】
2018.04.18 CN 20181034795331.一种诱导人羊膜上皮细胞向视网膜色素上皮细胞分化的方法，所述方法包括如下的步骤：(1)取人羊膜上皮细胞，在适宜的条件下培养12-48小时；(2)添加诱导组合物继续培养5-20天，诱导人羊膜上皮细胞分化为视网膜色素上皮细胞，其中所述的诱导组合物为含有10-100mM烟酰胺和1-10μM曲古抑菌素A的细胞培养基。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述方法步骤(1)中所述的人羊膜上皮细胞为P0或者P1人羊膜上皮细胞。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述方法步骤(2)中将细胞培养液添加诱导组合物继续培养10-20天，诱导人羊膜上皮细胞向视网膜色素上皮细胞分化。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述方法步骤(2)中的诱导组合物为含有30-70mM烟酰胺和3-7μM曲古抑菌素A的细胞培养基。5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于：所述方法中的羊膜上皮细胞通过包括...

【专利技术属性】
技术研发人员：余路阳，张传宇，李金英，袁惟芯，邱晨，郭礼和，邵小燕，刘佳，
申请(专利权)人：浙江大学，上海赛傲生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33