一种抗白色念珠菌烯醇化酶特异性单克隆抗体的制备方法及其应用技术

本发明专利技术提供了提供一种抗白色念珠菌烯醇化酶特异性单克隆抗体的制备方法及其应用，由此制备抗白色念珠菌烯醇化酶单克隆抗体，用于检测白色念珠菌烯醇化酶蛋白。配对的单克隆抗体可特异性的与白色念珠菌烯醇化酶蛋白反应，与其它主要的念珠菌病原烯醇化酶无交叉反应，因此可以应用于白色念珠菌的鉴定。配对的单克隆抗体可以扩展应用至其他基于抗原抗体反应的免疫学检测技术，包括免疫层析胶体金、化学发光定量检测等，与多克隆抗体相比，单克隆抗体具有稳定性好、易于标准化的优点，更适合用来建立商品化的标准检测方法。

Preparation and application of a specific monoclonal antibody against enolase of Candida albicans

【技术实现步骤摘要】
一种抗白色念珠菌烯醇化酶特异性单克隆抗体的制备方法及其应用
本专利技术属于生物
，具体涉及抗白色念珠菌烯醇化酶特异性单克隆抗体的制备及其应用。
技术介绍
念珠菌为条件致病性真菌，正常情况下可定植于宿主的皮肤、口腔、上呼吸道、阴道和肠道等部位，不引起疾病。当某些因素如广谱抗生素大量使用、放疗与化疗、免疫抑制剂使用等破坏了宿主免疫系统与念珠菌之间的平衡，念珠菌可侵入组织、血液并生长繁殖，导致宿主的组织损害、器官功能障碍和炎症反应等病理改变，此类感染为侵袭性念珠菌病(invasivecandidiasis，IC)，致病菌多为白色念珠菌。临床实验对白色念珠菌的鉴定主要依赖于传统的微生物培养，该方法阳性率低且耗时较长，已不适应现代医学发展的需要。(1,3)-β-D葡聚糖实验又称G实验，目前已在临床上逐渐得到应用，该方法利用真菌细胞壁组分(1,3)-β-D葡聚糖可以激活鲎变形细胞溶解产物G因子的原理诊断真菌感染，其检测效能已经得到多数实验室的肯定。然而，G实验仍有较明显的缺陷，如较高的假阳性率，不能明确真菌的种属，检测极易受致热原的影响等等。烯醇化酶(enolase，eno1)又称2-磷酸本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗白色念珠菌烯醇化酶特异性单克隆抗体的制备方法，其特征在于：以白色念珠菌烯醇化酶蛋白免疫BALb/C小鼠制备并筛选杂交瘤细胞株，制备腹水并纯化单克隆抗体。

【技术特征摘要】
1.一种抗白色念珠菌烯醇化酶特异性单克隆抗体的制备方法，其特征在于：以白色念珠菌烯醇化酶蛋白免疫BALb/C小鼠制备并筛选杂交瘤细胞株，制备腹水并纯化单克隆抗体。2.根据权利要求1所述的抗白色念珠菌烯醇化酶特异性单克隆抗体的制备方法，其特征在于，主要包括如下步骤：1)切胶法制备白色念珠菌免疫原；2)动物免疫；3)ELISA法测定免疫动物血清效价；4)免疫脾细胞的制备；5)细胞融合；6)杂交瘤细胞的克隆化(有限稀释法)及腹水制备；7)高分泌特异性的阳性克隆细胞筛选。3.根据权利要求2所述的抗白色念珠菌烯醇化酶特异性单克隆抗体的制备方法，其特征在于：所述步骤1)为，以液氮研磨法制备白色念珠菌全菌蛋白，制备得到的白色念珠菌全株蛋白采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PADE)后切取分子量大小约为48kD的胶条，胶条中的蛋白经电洗脱后以二喹啉甲酸(BCA)法测定蛋白浓度。4.根据权利要求2所述的抗白色念珠菌烯醇化酶特异性单克隆抗体的制备方法，其特征在于：所述步骤2)为，首次基础免疫采用切胶法制备的白色念珠菌免疫原蛋白(主要为烯醇化酶)0.4ml(1mg/ml)与等量弗氏完全佐剂充分混合乳化，采用腹腔注射免疫BALb/C小鼠两只，每只小鼠0.2ml(蛋白量200ug)；两周后，用弗氏不完全佐剂0.2ml与等量免疫原蛋白充分混合乳化，腹腔注射两只小鼠进行第二次免疫...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈兴，
申请(专利权)人：石家庄和亚生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：河北,13