【技术实现步骤摘要】
高度选择性核酸扩增引物本申请是申请号为201480019974.2，申请日为2014年2月7日，专利技术名称为“高度选择性核酸扩增引物”的中国专利申请的分案申请。相关申请的交叉引用本申请要求2013年2月7日递交的美国临时申请号61/762,117的优先权。该申请的内容通过引用以其全文并入本文。
本专利技术涉及引物依赖的核酸扩增反应，特别是DNA扩增反应(如PCR)，以及用于这样的反应的引物、反应混合物和试剂盒以及采用其的测定。
技术介绍
引物依赖的核酸扩增反应需要“特异性”，反应可以包括扩增产物(“扩增子”)的检测，即引物与核酸链中预期的位置的退火以及仅结合预期的靶序列的引物的延伸。常规地，通过使引物足够长，使得在扩增反应条件下，主要是在引物退火步骤过程中，引物只到达核酸链中的一个位置获得特异性。某些扩增反应旨在在等位基因变体(例如单核苷酸多态性(SNP))之间进行区分。做到这一点的一种方法是扩增所有的变体并通过等位基因特异性杂交探针(如分子信标探针)在它们之间进行区分。对于这样的方法，扩增引物与所有变体平等互补从而扩增包括在等位基因之间变异的序列的区域，并且探...
【技术保护点】
1.一种区分突变体DNA靶序列和密切相关的野生型DNA靶序列的多部分核酸扩增引物，所述引物以5'‑3'方向包含以下三个连续的DNA序列：锚定序列，其能够与突变体靶序列和与野生型靶序列形成长15‑40个核苷酸的杂交体；桥序列，其长至少6个核苷酸并且不与突变体靶序列或野生型靶序列任一个互补；以及足序列，其长5‑7个核苷酸，其中突变体靶序列与足序列完全互补，并且野生型靶序列与足序列具有足序列3'的核苷酸或3'倒数第二个核苷酸中至少一个核苷酸的错配，以及其中，如果引物的锚定和足序列与突变体靶序列或与野生型靶序列杂交，则在靶序列中有至少六个核苷酸长的插入序列，所述插入序列不与引物的桥...
【技术特征摘要】
2013.02.07 US 61/762,1171.一种区分突变体DNA靶序列和密切相关的野生型DNA靶序列的多部分核酸扩增引物，所述引物以5'-3'方向包含以下三个连续的DNA序列：锚定序列，其能够与突变体靶序列和与野生型靶序列形成长15-40个核苷酸的杂交体；桥序列，其长至少6个核苷酸并且不与突变体靶序列或野生型靶序列任一个互补；以及足序列，其长5-7个核苷酸，其中突变体靶序列与足序列完全互补，并且野生型靶序列与足序列具有足序列3'的核苷酸或3'倒数第二个核苷酸中至少一个核苷酸的错配，以及其中，如果引物的锚定和足序列与突变体靶序列或与野生型靶序列杂交，则在靶序列中有至少六个核苷酸长的插入序列，所述插入序列不与引物的桥序列杂交，并且桥序列和插入序列一起形成杂交体中的泡，所述泡具有16-52个核苷酸的周长。2.根据权利要求1所述的引物，其含有位于锚定序列5'的功能部分，所述功能部分不与突变体靶序列或不与野生型靶序列杂交。3.根据权利要求3所述的引物，其中功能部分含有荧光团并产生指示扩增的荧光信号。4.根据权利要求1所述的引物，其中足序列长6-7个核苷酸。5.根据权利要求4所述的引物，其中锚定序列能够与突变体靶序列和与野生型靶序列形成长15-30个核苷酸的杂交体。6.根据权利要求5所述的引物，其中泡具有28-44个核苷酸的周长。7.根据权利要求6所述的引物，其中桥序列和插入序列具有相等的长度。8.根据权利要求1所述的引物，其中泡具有28-44个核苷酸的周长。9.一种能够在含有每个突变体靶序列的密切相关的野生型DNA靶序列的混合物中扩增至少一个稀有的突变体DNA靶序列的扩增和检测方法，其包括在具有引物-退火温度的引物依赖的扩增反应中重复循环反应混合物，并检测扩增的产物，所述反应混合物包括所述至少一个突变体靶序列或其密切相关的野生型靶序列或二者都有、DNA聚合酶、扩增所需的其它试剂，以及针对每个突变体靶序列的包括多部分引物的引物对，所述多部分引物以5'-3'方向包含以下三个连续的DNA序列：锚定序列，其在引物-退火温度与突变体靶序列和与其密切相关的野生型靶序列杂交；桥序列，其长至少6个核苷酸并且不与突变体靶序列或其密切相关的野生型靶序列任一个互补；以及足序列，其长5-7个核苷酸，其中，突变体靶序列与足序列完全互补，并且密切相关的野生型靶序列与足序列具有足序列3'的核苷酸或3'倒数第二个核苷酸中至少一...
【专利技术属性】
技术研发人员：S·马拉斯，D·瓦尔加斯戈尔德，S·泰尔吉，F·R·克雷默，
申请(专利权)人：新泽西鲁特格斯州立大学，
类型：发明
国别省市：美国,US
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