一种酒蒸黄连的HPLC指纹图谱检测方法技术

本发明专利技术提供了一种酒蒸黄连的HPLC指纹图谱，它是采用高效液相色谱法检测，包括如下步骤：1)参照物溶液的制备；2)供试品溶液的制备；3)分别吸取参照物溶液和供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图。本发明专利技术酒蒸黄连的HPLC指纹图谱检测方法，建立的指纹图谱具有很强的特异性，特征峰的规律性强，一致性较好，可作为酒蒸黄连的质量评价方法，同时也可用于酒蒸黄连中格兰地新、非洲防己碱、表小檗碱、盐酸药根碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小襞碱和/或小檗红碱的含量测定，并能有效鉴别酒蒸黄连。

A Method for Detecting the Fingerprint of Steamed Coptis chinensis by HPLC

【技术实现步骤摘要】
一种酒蒸黄连的HPLC指纹图谱检测方法
本专利技术具体涉及一种酒蒸黄连的HPLC指纹图谱检测方法。
技术介绍
中药(TCM)是在中医理论指导下生产的药物，其是许多化学物质的集合，并且在这些组分中的一种或多种中有效。因此，用现有的质量评价方法难以真实地反映中药的多效性和完整性，难以准确反映中药的内部综合质量。因此，多组分同时测定的质量控制模型已成为未来中药质量控制的关键。多指标成分的定量分析是中药质量控制的最直接方法，可以揭示化学成分含量的变化，是中药质量控制的关键环节。在中国药典中，黄连是CoptischinensisFranch,CoptisdeltoideaC.Y.ChengetHsiao,orCoptisteetaWall.的干燥根茎。黄连在我国用药历史悠久，味连是目前的主流品种。在中医理论中，黄连具有“清热燥湿、泻火解毒”的功能。目前，现代药理研究表明，黄连可用于治疗腹泻、黄疸、高热、头晕、烦躁不安、失眠、心悸不安等。酒蒸黄连是黄连的炮制加工产品，对治疗糖尿病有很好的效果。近年来，有文献表明，小檗红碱在黄连酒蒸过程中可产生，是小檗碱的代谢产物，具有多种生物活性，如降血糖作用，抗肿瘤作用，抗炎作用等。研究表明，酒蒸黄连能够改善3T3-L1脂肪细胞的胰岛素抵抗，增强脂肪细胞吸收葡萄糖的能力，并利用其在体外提高细胞水平的胰岛素抵抗。降血糖药有益于改善糖尿病患者的症状，表明小檗碱是酒蒸黄连的活性成分之一，有抗糖尿病活性。然而，到目前为止，酒蒸黄连的质量控制体仍然缺乏，酒蒸黄连未被纳入2015年版中国药典，极少的文献研究它的含量测定。因此，为酒蒸黄连建立全面的质量控制方法非常重要。目前HPLC-ELSD、HPLC和UPLC-PAD可用于黄连的质量控制。在2015版《中国药典》和《香港中药材标准》中，分别采用4和2个化学组分对黄连质量进行控制。目前，酒蒸黄连的质量控制是建立在黄连的基础上，对酒蒸黄连缺乏专属性研究。此外，同时测定酒蒸黄连中的格兰地新、非洲防己碱、表小檗碱、盐酸药根碱、盐酸黄连碱、小檗红碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱尚无报道。
技术实现思路
为解决上述问题，本专利技术提供了一种酒蒸黄连的HPLC指纹图谱检测方法，它是采用高效液相色谱法检测，其操作步骤如下：1)参照物溶液的制备：取生物碱类对照品，加甲醇溶解，即得；2)供试品溶液的制备：取待测样品，加甲醇-盐酸提取，过滤，取滤液，加甲醇稀释2-5倍，即得；3)分别吸取参照物溶液和供试品溶液注入液相色谱仪，色谱条件如下：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：以乙腈为流动相A，以0.1％三氟乙酸溶液为流动相B梯度洗脱；梯度洗脱程序如下：。进一步地，步骤1)所述生物碱类对照品为格兰地新、非洲防己碱、表小檗碱、盐酸药根碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小襞碱和/或小檗红碱。更进一步地，所述格兰地新、非洲防己碱、表小檗碱、盐酸药根碱、盐酸黄连碱、小檗红碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱在参照物溶液中浓度分别为1.36μg/ml，7.12μg/ml,0.643μg/ml,4.176μg/ml,18.33μg/ml,0.515μg/ml,15.708μg/ml和58.32μg/ml。进一步地，步骤2)所述待测样品与甲醇-盐酸的质量体积比为0.2g：50ml；所述滤液加甲醇稀释5倍。进一步地，步骤2)所述甲醇-盐酸的体积比为100：1。进一步地，步骤2)所述加甲醇稀释5倍。进一步地，步骤2)所述提取为超声提取，时间30min，功率250W，频率40kHz。进一步地，步骤3)所述的分别注入液相色谱仪的参照物溶液和供试品溶液量为10μl。进一步地，步骤3)所述色谱条件的波长为346nm，柱温为25℃，流动相流速为1.00ml/min，理论板数不低于6000。进一步地，步骤3)所述十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱为Welch规格为：250mm×4.6mm，5μm。进一步地，所述检测方法得到的特征图谱中应呈现13个特征峰，与格兰地新参照物相应的峰为峰4，与非洲防己碱参照物相应的峰为峰7，与表小檗碱参照物相应的峰为峰8，与盐酸药根碱参照物相应的峰为峰9，与盐酸黄连碱参照物相应的峰为峰10，与小檗红碱参照物相应的峰为峰11，与盐酸巴马汀参照物相应的峰为峰12，与盐酸小檗碱参照物相应的峰为峰13。更进一步地，所述供试品为酒蒸黄连，其通过特征图谱计算的盐酸小檗碱含量大于7％，盐酸黄连碱的含量大于2％。本专利技术酒蒸黄连的HPLC指纹图谱检测方法，建立的指纹图谱具有很强的特异性，特征峰的规律性强，一致性较好，可作为酒蒸黄连的质量评价方法，同时也可用于酒蒸黄连中格兰地新、非洲防己碱、表小檗碱、盐酸药根碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小襞碱和/或小檗红碱的含量测定，并能有效鉴别酒蒸黄连。本专利技术酒蒸黄连的HPLC指纹图谱检测方法，相对于现有技术中酒蒸黄连的HPLC检测方法，具备以下优势：1.流动相配制简单快捷，在不调整流动相pH值的情况下，就能使流动相pH值范围达到理想状态，即能完成对成分的分离，又不损伤色谱柱；2.通过改变流动相及其比例，使酒蒸黄连中更多特征成分的色谱峰被分离，尤其是小檗红碱，且分离度更高，拖尾因子等参数也能达到标准，使更多色谱峰被指认确定。显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。附图说明图1黄连与酒蒸黄连图(A原植物(黄连)，B原药材，C黄连，D酒蒸黄连)图2酒蒸黄连高效液相色谱图(混合对照品(A)、样品(B)和空白溶液(C)；图中各标号表示4：格兰地新、7：非洲防己碱、8：表小檗碱、9：盐酸药根碱、10：盐酸黄连碱、11：小檗红碱、12：盐酸巴马汀、13：盐酸小檗碱)图3酒蒸黄连(S1-S10)的指纹图谱具体实施方式1、材料、试剂与仪器1.1实验仪器高效液相色谱仪：岛津LC-2030C3D系列高效液相色谱仪；电子天平：FA1204C电子天平(上海越平科学仪器有限公司)；超声波清洗器：PS-80超声波清洗机(深圳市洁康洗净电器有限公司)；色谱柱：Welch(250mm×4.6mm，5m)1.2试剂及试药格兰地新对照品(含量≥98％，批号：MUST-17110502)，非洲防己碱对照品(含量≥98％，批号：MUST-17031901)，表小檗碱对照品(含量≥98％，批号：MUST-072011)，盐酸药根碱对照品(含量≥98％，批号：MUST-17110702)，盐酸黄连碱对照品(含量≥98％，批号：MUST-17061705)，盐酸巴马汀对照品(含量≥98％，批号：MUST-17022604)，盐酸小襞碱对照品(含量≥98％，批号：MUST-17110105)购买于成都曼思特生物科技有限公司；小檗红碱对照品(含量≥98％，批号：16121302)购买于成都普菲德生物技术有限公司。Fisher色谱乙腈(色谱纯)、水(up水)，甲醇、盐酸、三氟乙酸等为分析纯。由雅安联成迅康提供5批酒蒸黄连样品(S1-本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种酒蒸黄连的HPLC指纹图谱检测方法，其特征在于：它是采用高效液相色谱法检测，其操作步骤如下：1)参照物溶液的制备：取生物碱类对照品，加甲醇溶解，即得；2)供试品溶液的制备：取待测样品，加甲醇‑盐酸提取，过滤，取滤液，加甲醇稀释2‑5倍，即得；3)分别吸取参照物溶液和供试品溶液注入液相色谱仪，色谱条件如下：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：以乙腈为流动相A，以0.1％三氟乙酸溶液为流动相B梯度洗脱；梯度洗脱程序如下：

【技术特征摘要】
1.一种酒蒸黄连的HPLC指纹图谱检测方法，其特征在于：它是采用高效液相色谱法检测，其操作步骤如下：1)参照物溶液的制备：取生物碱类对照品，加甲醇溶解，即得；2)供试品溶液的制备：取待测样品，加甲醇-盐酸提取，过滤，取滤液，加甲醇稀释2-5倍，即得；3)分别吸取参照物溶液和供试品溶液注入液相色谱仪，色谱条件如下：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：以乙腈为流动相A，以0.1％三氟乙酸溶液为流动相B梯度洗脱；梯度洗脱程序如下：。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤1)所述生物碱类对照品为格兰地新、非洲防己碱、表小檗碱、盐酸药根碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小襞碱和/或小檗红碱。3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于：所述格兰地新、非洲防己碱、表小檗碱、盐酸药根碱、盐酸黄连碱、小檗红碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱在参照物溶液中浓度分别为1.36μg/ml，7.12μg/ml,0.643μg/ml,4.176μg/ml,18.33μg/ml,0.515μg/ml,15.708μg/ml和58.32μg/ml。4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤2)所述待测样品与甲醇-盐酸的质量体积比为0.2g：50ml；所述滤液加甲醇稀释5倍。5.根据权利要求1或4所述的检测方法，其特征在于：步...

【专利技术属性】
技术研发人员：张海，岳顺疆，曹勇，纪奇森，王瑾，曾海蓉，
申请(专利权)人：雅安迅康药业有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51