固定化酮还原酶突变体及其在制备度洛西汀手性醇中间体及其类似物中的应用制造技术

本发明专利技术提供了一种固定化酮还原酶突变体，所述的固定化酮还原酶突变体为酮还原酶突变体的固定化细胞或固定化酶。本发明专利技术还提供了固定化酮还原酶突变体作为催化剂在制备S‑构型度洛西汀手性醇中间体及其类似物的应用。本发明专利技术具有如下技术效果：1）本发明专利技术的固定化酮还原酶突变体，可作为催化剂，与辅酶再生体系共同用于制备S‑构型的度洛西汀手性醇中间体及其类似物，反应转化率可达90%、95%或99%以上，产物的手性纯度值可达90%、95%或99%以上。2）固定化后的酶或细胞可以通过简单的过滤进行回收，回收后可以反复使用7‑10次，且重复使用时与初次使用的反应转化率和手性纯度值基本相同。

Immobilized keto reductase mutant and its application in preparation of doloxetine chiral alcohol intermediates and analogues

【技术实现步骤摘要】
固定化酮还原酶突变体及其在制备度洛西汀手性醇中间体及其类似物中的应用
本专利技术涉及一种固定化酮还原酶突变体及其在制备度洛西汀手性醇中间体及其类似物中的应用，属于生物酶工程和微生物应用领域。
技术介绍
盐酸度洛西汀【Duloxetinehydrochloride，(S)-N-甲基-3-(1-萘氧基)-3-(2-噻吩基)-1-丙胺盐酸盐】是由美国礼来公司研发的新型抗抑郁药，能有效地抑制5-羟色氨和去甲肾上腺素的再摄取，高效、安全、副作用小，对其他症状如全身疼痛和胃肠道紊乱也有疗效，该药还被批准用于糖尿病引起的神经疼痛以及女性尿失禁的治疗。2012年全球20个最畅销的处方药榜单中度洛西汀以49.94亿美元的年销售额排名第9。研究发现(S)-构型的盐酸度洛西汀药效是(R)型两倍，并且相对于(R)-盐酸度洛西汀来说，(S)型对映体是更强的5-羟色胺再摄取抑制剂，因而(S)-构型手性醇中间体的制备是盐酸度洛西汀的合成关键步骤。目前S-手性醇中间体的合成主要有化学合成和酶法合成两种途径。化学合成采用化学拆分和化学不对称合成来制备手性中间体，这两种方法均存在诸多问题，如化学拆分需要使用大量的拆分剂本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.固定化酮还原酶突变体，其特征在于，所述的固定化酮还原酶突变体为酮还原酶突变体的固定化细胞或固定化酶，固定化酶是所述的突变体固定化于固相支撑物上；固定化细胞是所述的酮还原酶突变体表达于固定化于固相支撑物上的微生物细胞中；所述的酮还原酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，编码所述的酮还原酶突变体的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。

【技术特征摘要】
1.固定化酮还原酶突变体，其特征在于，所述的固定化酮还原酶突变体为酮还原酶突变体的固定化细胞或固定化酶，固定化酶是所述的突变体固定化于固相支撑物上；固定化细胞是所述的酮还原酶突变体表达于固定化于固相支撑物上的微生物细胞中；所述的酮还原酶突变体的氨基酸序列如SEQIDNO：1所示，编码所述的酮还原酶突变体的基因的核苷酸序列如SEQIDNO：2所示。2.根据权利要求1所述的固定化酮还原酶突变体，其特征在于，所述的固定化细胞的方法为采用壳聚糖对含酶细胞和戊二醛溶液进行交联，用无水碳酸钠进行制粒，过滤后得到固定化细胞。3.根据权利要求1所述的固定化酮还原酶突变体，其特征在于，所述的固定化酶采用戊二醛交联活化后的树脂，加入酶液连接到树脂上，最后用丙氨酸封闭树脂上的活性位点，获得固定在树脂上的酶。4.如权利要求1-3任意一项所述的固定化酮还原酶突变体作为催化剂在制备S-构型度洛西汀手性醇中间体及其类似物的应用，其特征在于，所述制备方法如下：在辅酶再生体系的存在下，固定化酮还原酶...

【专利技术属性】
技术研发人员：林涛，徐明文，蒋丽丽，于丽珺，
申请(专利权)人：南京趣酶生物科技有限公司，上海仁酶生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32