The invention provides a method for immobilizing lipase by block polymer micelles. The method includes: dithiodipropionic acid reacts with hyaluronic acid after carboxyl group is activated by activator to produce intermediate, the intermediate reacts with polylactic acid and glycolic acid to produce block polymer, and the block polymer is dissolved in deionized water to prepare block polymer micelle solution; Lipase powder was dissolved in phosphate buffer solution with pH=8.0, centrifuged by stirring, and the supernatant was transferred to the volumetric flask. After the buffer solution with pH=8.0 was volumetrized, the enzymatic synthesis of Cyhalothrin ester lipase was obtained. Polymer micelle solution was mixed with enzymatic synthesis of Cyhalothrin ester lipase, filtered and dissolved in deionized water, and washed with phosphate buffer solution with pH=8.0 to remove excess. Lipase was immobilized on block polymer micelles by freeze-drying with a constant volume of 1 L phosphate buffer at pH=8.0. The invention has simple process.
【技术实现步骤摘要】
一种嵌段聚合物胶束固定化脂肪酶的方法
本专利技术属于聚合物领域，更具体涉及一种嵌段聚合物胶束固定化脂肪酶的方法。
技术介绍
脂肪酶基本上存在于所有的生物体中，它在对脂类(如甘油三酸醋、脂肪、油等)的消化、运输和剪切中发挥着关键作用。脂肪酶能够催化酯类的水解反应、醇解反应、酯交换化反应以及水解的逆向合成等多种反应，具有稳定性高、底物特异性广泛、催化活性高且副反应少等特点，是一种重要的生物催化剂。因此，脂肪酶在能源领域，食品工业、洗涤剂、油脂工业、医药工业、农业等诸多领域都有重要的应用。脂肪酶作为一种绿色生物催化剂，具有高催化活性、副反应少、低污染、操作稳定性高等一系列优点，然而，脂肪酶在实际工业应用中，自身也存在一些局限性:在高温、有机溶剂、强酸或强碱等条件下不够稳定，易变性失活，对环境的耐受性差；易被降解，反应过程中易发生团聚现象，与底物难以充分接触。游离脂肪酶价格比较高，而且一般只能催化一次反应，无法从反应体系中回收和重复利用，使得产品的生产成本大大提高，限制其在工业实践中的广泛应用。而酶的固定化技术极大的扩展了酶的应用范围。固定化酶是通过适当的方法将酶固定在一...
【技术保护点】
1.一种嵌段聚合物胶束固定化脂肪酶的方法，其特征在于，包括：配制嵌段聚合物胶束：所述二硫代二丙酸经活化剂活化羧基后与所述透明质酸发生反应制得中间体，所述中间体经活化剂活化羧基后与聚乳酸‑羟基乙酸发生反应制得嵌段聚合物，将嵌段聚合物溶于去离子水，制得嵌段聚合物胶束溶液；配制脂肪酶酶液：将一定量的脂肪酶粉溶于pH＝8.0的磷酸缓冲盐溶液中，5℃下搅拌均匀后，以转速为12000r/min高速离心3min，将上清液转移到容量瓶中，用pH＝8.0的缓冲溶液定容后，得到酶促合成氰氟草酯脂肪酶；脂肪酶的固定化：将聚合物胶束溶液与酶促合成氰氟草酯脂肪酶混合，抽滤后加入去离子水溶解，并用pH...
【技术特征摘要】
1.一种嵌段聚合物胶束固定化脂肪酶的方法，其特征在于，包括：配制嵌段聚合物胶束：所述二硫代二丙酸经活化剂活化羧基后与所述透明质酸发生反应制得中间体，所述中间体经活化剂活化羧基后与聚乳酸-羟基乙酸发生反应制得嵌段聚合物，将嵌段聚合物溶于去离子水，制得嵌段聚合物胶束溶液；配制脂肪酶酶液：将一定量的脂肪酶粉溶于pH＝8.0的磷酸缓冲盐溶液中，5℃下搅拌均匀后，以转速为12000r/min高速离心3min，将上清液转移到容量瓶中，用pH＝8.0的缓冲溶液定容后，得到酶促合成氰氟草酯脂肪酶；脂肪酶的固定化：将聚合物胶束溶液与酶促合成氰氟草酯脂肪酶混合，抽滤后加入去离子水溶解，并用pH＝8.0磷酸盐缓冲液洗至去除多余的脂肪酶，定容到1L的pH＝8.0磷酸盐缓冲液，冷冻干燥得到嵌段聚合物胶束固定化的脂肪酶。2.根据权利要求1所述的嵌段聚合物胶束固定化脂肪酶的方法，其特征在于，所述透明质酸与二硫代二丙酸的质量比1:2-4，所述活化剂与二硫代二丙酸的摩尔比0.8-1.2:1。3.根据权利要求1所述的嵌段聚合物胶束固定化脂肪酶的方法，其特征在于，制备所述中间体的反应温度为30-45℃，反应时间为10-16h。4.根据权利要求1所述的嵌段聚合物胶束固定化脂肪酶的方法，其特征在于，所述配制嵌段聚合物胶束的反应溶剂选自水、N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜...
【专利技术属性】
技术研发人员：殷凤山，孙伯旺，李瑶嘉，王明亮，周钰明，陈方慧，单永祥，顾海亚，王晋阳，
申请(专利权)人：江苏丰山集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32
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