一种达托霉素的纯化方法技术

本发明专利技术公开了一种达托霉素的纯化方法，属于药物纯化技术领域，包括如下步骤：1）溶解；2）吸附；3）解析；4）收集；5）纳滤浓缩；6）结晶；7）抽滤：8）冻干，最终得到达托霉素纯品。本发明专利技术的纯化方法显著提高了达托霉素纯品的纯度，并且纯化周期短、溶媒使用量低；纯化过程所用大孔吸附树脂再生方法简单，纯化过程使用先进的自动化设备，降低了操作人员的人数及操作强度。

A Purification Method of Daptomycin

【技术实现步骤摘要】
一种达托霉素的纯化方法
本专利技术涉及药物的纯化，尤其是一种达托霉素的纯化方法，属于药物纯化

技术介绍
达托霉素是脂肽类家族的一员，属于环十脂肽结构群，是一种微浅黄色或黄色的晶体粉末，由玫瑰孢链霉菌(Streptomycesroseosporus)发酵而得,是目前全球首个成功开发的环脂肽类抗生素。达托霉素结构新颖、杀菌机制独特，能在多个方面破坏细菌细胞膜功能，并杀死革兰氏阳性菌，其特性表现为抑制作用迅速、体内与体外杀菌作用所需的浓度低、抗生素作用的有效性时间长等。化学式为C12H10N17O25，分子量为1620.67，结构式如下：目前，达托霉素被公认为是在万古霉素之后的最佳抗生素替代品，是美国礼来公司于20世纪80年代末发现，1997年Cubist公司获得了达托霉素的全球独家开发、生产及销售权。研究表明，达托霉素对2002-2005年间从美国和加拿大各医院收集的19615株临床革兰氏阳性菌中的99％具有抑制作用。2003年FDA批准了达托霉素注射剂用于治疗由革兰氏阳性菌所致的复杂皮肤和软组织感染，以及金葡菌引起的菌血症和右侧心内膜炎，其安全性和耐受性好，是一种应用前途广阔的抗生素。另外，达托霉素除了能作用于大多数临床相关的革兰氏阳性菌之外，其对已呈现甲氧西林、万古霉素和利奈唑烷等耐药性质的分离菌种也具有很强的活性，这一特性对于危重感染患者具有非常重要的临床意义。目前美国cubist制药公司拥有达托霉素的全球独家开发、生产及销售权，国内也有较多公司机构对其进行研究，目前制备高纯度达托霉素的生产工艺交替使用阴离子树脂FP-DA13、大孔树脂HP-20SS、阴离子树脂PorosD50或Poros150反复纯化，得到纯度为98％的达托霉素，但其工艺过于繁琐，难以放大，成本较高、收率偏低，不利于工业化规模生产。中国专利CN101830970A、CN102276696A在其基础上进行了工艺改进，简化了流程、降低了成本，但仍无法完成工业化生产。大孔吸附树脂是纯化
常用到的分离材料，是一类不含交换基团且有大孔结构的高分子吸附树脂，具有良好的大孔网状结构和较大的比表面积，可以有选择地通过物理吸附水溶液中的有机物，大孔吸附树脂上有大小不同的空洞通道，且这些通道的直径最小要大于所要分离的颗粒的最小粒径，而且最大还要小于要分离的最大颗粒的粒径，否则起不到分离的效果。树脂种类众多，型号各异，性能差异大，其中树脂型号主要有：AmberliteXAD系列与DiaionHP-10、-20、-30、-40、-50(非极性)，其它牌号吸附树脂还有：国外的主要有ParapetP-S、ParapetQ、ParapetR、ParapetS、ParapetN、Chromosorb系列等；中国主要的树脂有天津某股份有限公司的D系列，西安蓝晓科技公司的LX、XDA系列，上海试剂厂101、102、402等，南开某化工厂产品D系列、H系列、AB-8(弱极性)和上海某工业研究院SIP系列等。常用的大孔吸附树脂有D101、AB-8,、HP-20、D312、HZ-816等。利用大孔吸附树脂进行分离纯化工艺也存在较多的缺点，如有机残留物高、预处理难度大；树脂强度差，使用过程中破碎严重，使用寿命短；树脂粒径分布范围广，分离效果差等。动态轴向压缩柱系统，是制备色谱领域的装柱技术之一，能在各种规模的柱层析中保持良好分离效果的技术。常规的轴向压缩技术很难装填出高柱效的色谱柱。只能采用动态轴向压缩技术简称DAC，它是公认唯一能在各种规模的柱层析中保持良好分离效果的技术，也是当今制备色谱领域最佳的装柱技术，先进DAC动态轴向压缩制备柱系统能自行装柱、维持柱压、自行卸柱，兼有色谱柱和装柱机的功能，采用DAC装填的色谱柱完全满足床层的连续性、均匀性、稳定性和紧密性等要求。目前还没有将动态轴向压缩技术应用在达托霉素纯化工艺中的先例，也没有用此技术进行药物的大规模生产的先例，现有利用此技术的主要是一些科研院所等生产少量的标准品或对照品。现有的动态轴向压缩柱的填料主要是一些硅胶类的材料，因树脂材料强度差，在加压压缩过程中易破碎，并且并非所有型号的树脂在压缩后就会提高分离效果，如D312树脂将其压缩到极限(指破碎的临界线)时其分离效果依然不变，因此，寻找更多的在压缩后能提高分离效果，并适用于达托霉素纯化的价格较低廉的树脂仍是迫切需要的。达托霉素纯化过程中大孔吸附树脂吸附工艺所用解吸剂一般为乙醇或异丙醇，因达托霉素分子式中有五个羧基，导致在树脂上吸附的较牢固，需要浓度较大的乙醇或异丙醇才能洗脱，如专利文献CN102924572A中所用解析剂为浓度70～75％的乙醇水溶液，专利文献CN105481950B中所用解析剂为浓度60％的乙醇溶液，高浓度乙醇溶液的使用大大提高了溶媒的用量，提高了企业生产成本，且提高了后续处理回收的难度，还加大了环境污染。因此，寻找高效的高纯度的达托霉素提取制备工艺，同时又适于工业化大规模生产就显得尤为重要。
技术实现思路
本专利技术需要解决的技术问题是提供一种达托霉素的纯化方法，提高达托霉素的纯度、提高生产效率，适宜于工业化应用。为解决上述技术问题，本专利技术所采用的技术方案是：一种达托霉素的纯化方法，纯化原料为由达托霉素发酵液制备得到的达托霉素钙盐粗粉，包括如下步骤：1)溶解：将达托霉素钙盐粗粉溶于纯化水中，然后加入饱和磷酸氢二钠溶液得到溶解液；2)吸附：向溶解液中加入助滤剂后进行过滤，得到澄清的滤液，再将滤液导入压缩后的大孔吸附树脂进行富集吸附，至大孔吸附树脂吸附饱和；3)解析：先用纯水洗涤吸附饱和的大孔吸附树脂，待流出液无色时使用浓度为15～25％的乙醇溶液洗脱，至流出液无色，最后使用浓度为35～45％的乙醇溶液进行解吸；4)收集：根据HPLC图谱收集出峰口大于92％的解吸液；5)纳滤浓缩：检测收集到的解吸液，将效价大于1000μg/mL的解吸液合并，进行超滤纳滤浓缩，得到浓缩液；6)结晶：在浓缩液中加入饱和乙酸钙溶液作为结晶溶液进行结晶，再滴加乙醇溶液并搅拌得到混合溶液；7)抽滤：将步骤6)混合溶液进行抽滤，然后用乙醇淋洗滤饼、干燥滤饼，得到达托霉素粉状物；用水溶解达托霉素粉状物，再用树脂进行脱盐得到脱盐液；8)冻干：冻干脱盐液，最终得到达托霉素纯品。本专利技术技术方案的进一步改进在于：达托霉素钙盐粗粉是由达托霉素发酵液依次经过滤、阴离子树脂吸附解吸、大孔吸附树脂吸附解吸、浓缩后与乙酸钙反应得到。本专利技术技术方案的进一步改进在于：达托霉素钙盐粗粉制备过程中用到的阴离子树脂的型号为D152、110或XRPD30中的任一种，大孔吸附树脂的型号为HZ801、XAD1600或XRP-S3#中的任一种。本专利技术技术方案的进一步改进在于：步骤1)中加纯化水溶解至浓度为3～4万μg/mL，加入饱和磷酸钙溶液至体系中达托霉素与磷酸氢二钠摩尔比至1:4.5～5；步骤2)中助滤剂为珍珠岩，珍珠岩的加入量为溶解液重量的1～1.5％。本专利技术技术方案的进一步改进在于：步骤2)中大孔吸附树脂的型号为HZ801、XAD1600或XRP-S3#中的任一种，大孔吸附树脂压缩使用DAC动态轴向压缩技术进行，大孔吸附树脂压缩后体积减小20～30％；吸附的流速为0.5～1BV/h，吸附本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种达托霉素的纯化方法，纯化原料是由达托霉素发酵液制备得到的达托霉素钙盐粗粉，其特征在于包括如下步骤：1）溶解：将达托霉素钙盐粗粉溶于纯化水中，然后加入饱和磷酸氢二钠溶液得到溶解液；2）吸附：向溶解液中加入助滤剂后进行过滤，得到澄清的滤液，再将滤液导入压缩后的大孔吸附树脂进行富集吸附，至大孔吸附树脂吸附饱和；3）解析：先用纯水洗涤吸附饱和的大孔吸附树脂，待流出液无色时使用浓度为15～25％的乙醇溶液洗脱，至流出液无色，最后使用浓度为35～45％的乙醇溶液进行解吸；4）收集：根据HPLC图谱收集出峰口大于92％的解吸液；5）纳滤浓缩：检测收集到的解吸液，将效价大于1000 μg/mL的解吸液合并，进行超滤纳滤浓缩，得到浓缩液；6）结晶：在浓缩液中加入饱和乙酸钙溶液作为结晶溶液进行结晶，再滴加乙醇溶液并搅拌得到混合溶液；7）抽滤：将步骤6）混合溶液进行抽滤，然后用乙醇淋洗滤饼、干燥滤饼，得到达托霉素粉状物；用水溶解达托霉素粉状物，再用树脂进行脱盐得到脱盐液；8）冻干：冻干脱盐液，最终得到达托霉素纯品。

【技术特征摘要】
1.一种达托霉素的纯化方法，纯化原料是由达托霉素发酵液制备得到的达托霉素钙盐粗粉，其特征在于包括如下步骤：1）溶解：将达托霉素钙盐粗粉溶于纯化水中，然后加入饱和磷酸氢二钠溶液得到溶解液；2）吸附：向溶解液中加入助滤剂后进行过滤，得到澄清的滤液，再将滤液导入压缩后的大孔吸附树脂进行富集吸附，至大孔吸附树脂吸附饱和；3）解析：先用纯水洗涤吸附饱和的大孔吸附树脂，待流出液无色时使用浓度为15～25％的乙醇溶液洗脱，至流出液无色，最后使用浓度为35～45％的乙醇溶液进行解吸；4）收集：根据HPLC图谱收集出峰口大于92％的解吸液；5）纳滤浓缩：检测收集到的解吸液，将效价大于1000μg/mL的解吸液合并，进行超滤纳滤浓缩，得到浓缩液；6）结晶：在浓缩液中加入饱和乙酸钙溶液作为结晶溶液进行结晶，再滴加乙醇溶液并搅拌得到混合溶液；7）抽滤：将步骤6）混合溶液进行抽滤，然后用乙醇淋洗滤饼、干燥滤饼，得到达托霉素粉状物；用水溶解达托霉素粉状物，再用树脂进行脱盐得到脱盐液；8）冻干：冻干脱盐液，最终得到达托霉素纯品。2.根据权利要求1所述的一种达托霉素的纯化方法，其特征在于：达托霉素钙盐粗粉是由达托霉素发酵液依次经过滤、阴离子树脂吸附解吸、大孔吸附树脂吸附解吸、浓缩后与乙酸钙反应得到。3.根据权利要求2所述的一种达托霉素的纯化方法，其特征在于：达托霉素钙盐粗粉制备过程中用到的阴离子树脂的型号为D152、110或XRPD30中的任一种，大孔吸附树脂的型号为HZ801、XAD1600或XRP-S3#中的任一种。4.根据权利要求1所述的一种达托霉素的纯化方法，其特征在于：步骤1...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵辉，张志江，王杨，张义，栗婷婷，杨丰，张丽娟，谷岩翡，刘翠莉，齐立辉，王健，
申请(专利权)人：华北制药华胜有限公司，
类型：发明
国别省市：河北,13