一种高纯度他克莫司及其制备方法技术

本发明专利技术涉及医药技术领域，具体公开一种高纯度他克莫司及其制备方法。本发明专利技术通过将他克莫司发酵液分离所得的菌丝体经短链醇溶剂和盐溶液浸泡，初步去除菌丝体中含有的色素及其它蛋白质杂质，然后用切割分子量为200Da

【技术实现步骤摘要】
一种高纯度他克莫司及其制备方法


[0001]本专利技术涉及生物医药
，尤其涉及一种高纯度他克莫司及其制备方法。

技术介绍

[0002]他克莫司(tacrolimus)，是一种大环内酯类的免疫抑制剂，广泛应用于肝脏、胰腺、肾脏、心脏和肺等实体器官移植后的抗排异治疗。他克莫司于1993年6月7日首次在日本批准上市，商品名为Prograf，随后相继在英国、美国、德国等几十个国家上市，开发剂型有胶囊剂、注射剂和软膏剂。
[0003]现代工业主要采用筑波链霉菌、链霉菌等进行微生物发酵，将发酵液进行提取纯化获得他克莫司。由于他克莫司的结构复杂，发酵液中还含有他克莫司类似物，如子囊霉素和二氢他克莫司。因此，难以通过常规的纯化技术纯化得到高纯度的他克莫司。
[0004]目前，高纯度他克莫司的制备方法有：将发酵液通过XAD1180树脂进行多次纯化后，收集他克莫司纯度高的部分，用乙酸乙酯萃取，浓缩，加入乙酸乙酯、环己烷和水进行结晶，并重复结晶2
‑
3次，得到纯度为99.84％的他克莫司产品，收率仅为32.6％。该方法步骤繁琐，需用树脂进行多次纯化和多次重结晶，产品收率很低，仅有32.6％左右。还有文献报道，将他克莫司发酵液用二氯甲烷萃取，萃取液浓缩后再用乙酸乙酯结晶。该方法的缺点是萃取剂二氯甲烷不但毒性大，而且沸点低，萃取剂回收率低，造成生产成本较高。因此，研发一种操作简单、收率和纯度均较高的他克莫司的制备方法，对于扩大他克莫司在医药领域的进一步开发和应用具有十分重要的意义。

技术实现思路

[0005]针对现有制备他克莫司的方法存在的操作繁琐、成本高，以及制备得到的他克莫司的收率和纯度较低的问题，本专利技术提供一种高纯度他克莫司及其制备方法，其主要通过将他克莫司发酵液过滤浸泡、纳滤浓缩、结晶，以及高压层析
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液相色谱分离，依次去除他克莫司中杂质及色素，有效提高了他克莫司的纯度和收率。
[0006]为解决上述技术问题，本专利技术提供的技术方案是：
[0007]一种高纯度他克莫司的制备方法，包括如下步骤：
[0008]步骤a，将他克莫司发酵液分离所得的菌丝体加入短链醇溶剂浸泡，得醇浸泡液；向所述醇浸泡液中加入无机盐溶液，继续浸泡，固液分离，得盐浸泡液；
[0009]步骤b，将所述盐浸泡液用切割分子量为200Da
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300Da的纳滤浓缩器进行浓缩，得纳滤液；
[0010]步骤c，向所述纳滤液中加入十二烷基苯磺酸钠，混合均匀，加入纯化水，结晶，固液分离，洗涤，干燥，得他克莫司粗粉；
[0011]步骤d，将所述他克莫司粗粉用极性溶剂溶解后，加入纯化水，混合均匀，加入动态轴向压缩柱中，以极性溶剂和纯化水的混合溶液为层析液进行洗脱，收集目标组分，得层洗液；其中，所述动态轴向压缩柱的填料为UniSil10
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120C8 UItra Plus，所述极性溶剂为乙
醇、甲醇或乙腈中至少一种；
[0012]步骤e，将所述层析液浓缩至无极性溶剂，得浓缩液；向所述浓缩液中加入乙酸酯类溶剂进行萃取，将萃取液浓缩至干，加入乙醇溶液溶解，结晶，固液分离，洗涤，干燥，得他克莫司产品。
[0013]相对于现有技术，本专利技术提供的高纯度他克莫司的制备方法，通过将他克莫司发酵液分离所得的菌丝体经短链醇溶剂和无机盐溶液浸泡，初步去除菌丝体中含有的色素及其它蛋白质杂质，然后用切割分子量为200Da
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300Da的纳滤浓缩器浓缩除去离子以及小分子杂质后，向浓缩液中加入十二烷基苯磺酸钠，改变他克莫司和杂质在母液和晶体中的分配比，增大杂质在母液的溶解度，使得他克莫司充分结晶析出，进一步去除发酵过程中所产生的次级代谢产物，提高目的产物的质量，最后以填料为UniSil 10
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120C8 UItra Plus的动态轴向压缩柱进行纯化分离，充分去除子囊霉素和二氢他克莫司等类似物杂质，大幅度提高了他克莫司的纯度，最终得到含量可达99.98％以上的高纯度他克莫司产品。
[0014]本专利技术仅通过浸泡、纳滤、结晶以及高压层析等简单工艺就可将他克莫司发酵液中的色素、离子、蛋白质和类似物杂质分离除去，且纯化效率高，有利于实现快速、大量生产精制他克莫司产品的目的，产品纯度可达到99.98％以上，提高了临床用药的安全性，且无需经过大孔吸附树脂多次纯化，有效简化了他克莫司的制备工艺，降低了生产成本，具有极高的推广应用价值。
[0015]优选的，步骤a中，所述短链醇溶剂为甲醇、乙醇或异丙醇中至少一种。
[0016]优选的，步骤a中，所述无机盐溶液为质量浓度20％
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25％的硫酸铝溶液、黄血盐溶液或硫酸锌溶液中至少一种。
[0017]优选的，步骤a中，所述醇浸泡液中短链醇溶剂的含量为70％
‑
75％。
[0018]优选的，步骤a中，所述无机盐溶液的加入量为醇浸泡液体积的4％
‑
6％。
[0019]优选的，步骤a中，浸泡时间均为2h
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3h。
[0020]优选的短链醇溶剂、无机盐以及加入量，可充分去除菌丝体中含有的色素及其它蛋白质杂质。
[0021]优选的，步骤b中，浓缩至效价10万μg/mL
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15万μg/mL。
[0022]优选的浓缩液浓度，有利于提高他克莫司的纯度和收率，同时，还有利于减少后续结晶时纯化水的加入量。
[0023]优选的，步骤c中，所述十二烷基苯磺酸钠与纳滤液的质量体积比为0.02
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0.05:1，其中，质量单位g，体积单位mL。
[0024]优选的，步骤c中，所述纯化水与纳滤液的体积比为0.75
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1.0:1。
[0025]优选的，步骤c中，所述纯化水采用缓慢加入的方式，加入时间控制为1h
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2h。
[0026]优选的，步骤c中，结晶温度为15℃
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35℃，结晶时间为12h
‑
24h。
[0027]优选的十二烷基苯磺酸钠、纯化水的加入量以及结晶条件，可使他克莫司充分结晶析出，且减少晶体中夹杂杂质的含量，提高他克莫司与杂质的分离效果，进而有利于提高后续高压层析的纯化效果和效率。
[0028]进一步地，步骤c中，采用45wt％
‑
50wt％的乙醇溶液对滤饼进行洗涤。
[0029]优选的，步骤d中，所述他克莫司粗粉的上样量为柱体积的0.8％
‑
1.0％，其中，上样量的单位为g，柱体积的单位为mL。
[0030]优选的，步骤d中，所述极性溶剂与他克莫司粗粉的体积质量比为8
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12:1，其中，体积单位mL，质量单位g。
[0031]优选的，步骤d中，所述纯化水的加入量为溶解液体积的20％
‑
25％。
[0032]优选的，步骤d中，所述层析液本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高纯度他克莫司的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤a，将他克莫司发酵液分离所得的菌丝体加入短链醇溶剂浸泡，得醇浸泡液；向所述醇浸泡液中加入无机盐溶液，继续浸泡，固液分离，得盐浸泡液；步骤b，将所述盐浸泡液用切割分子量为200Da
‑
300Da的纳滤浓缩器进行浓缩，得纳滤液；步骤c，向所述纳滤液中加入十二烷基苯磺酸钠，混合均匀，加入纯化水，结晶，固液分离，洗涤，干燥，得他克莫司粗粉；步骤d，将所述他克莫司粗粉用极性溶剂溶解后，加入纯化水，混合均匀，加入动态轴向压缩柱中，以极性溶剂和纯化水的混合溶液为层析液进行洗脱，收集目标组分，得层洗液；其中，所述动态轴向压缩柱的填料为UniSil C8 UItra Plus，所述极性溶剂为乙醇、甲醇或乙腈中至少一种；步骤e，将所述层析液浓缩至无极性溶剂，得浓缩液；向所述浓缩液中加入乙酸酯类溶剂进行萃取，将萃取液浓缩至干，加入乙醇溶液溶解，降温结晶，固液分离，洗涤，干燥，得他克莫司产品。2.如权利要求1所述的高纯度他克莫司的制备方法，其特征在于，步骤a中，所述短链醇溶剂为甲醇、乙醇或异丙醇中至少一种；和/或步骤a中，所述无机盐溶液为质量浓度20％
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25％的硫酸铝溶液、黄血盐溶液或硫酸锌溶液中至少一种。3.如权利要求2所述的高纯度他克莫司的制备方法，其特征在于，步骤a中，所述醇浸泡液中短链醇溶剂的含量为70％
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75％；和/或步骤a中，所述无机盐溶液的加入量为醇浸泡液体积的4％
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6％；和/或步骤a中，浸泡时间均为2h
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3h。4.如权利要求1所述的高纯度他克莫司的制备方法，其特征在于，步骤b中，浓缩至效价10万μg/mL
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15万μg/mL。5.如权利要求1所述的高纯度他克莫司的制备方法，其特征在于，步骤c中，所述十二烷基苯磺酸钠与纳滤液的质量体积比为0.02
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0.05:1，其中，质量单位g，体积单位mL；和/或步骤c中，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵辉，赵建强，张志江，田鑫，程启东，栗婷婷，安宁，鞠家学，吴茂华，刘翠莉，赵建辉，
申请(专利权)人：华北制药华胜有限公司，
类型：发明
国别省市：