一种注射用达托霉素及其制备方法技术

本发明专利技术提供了一种注射用达托霉素及其制备方法，其依次通过离子交换树脂、大孔吸附树脂、聚合物树脂、C18树脂进行分离纯化，然后经结晶、复溶、脱盐和特定的冻干工艺制备而成。本发明专利技术制备的产品纯度高、外形丰满、不萎缩、不鼓泡、呈多孔性、复溶速度快、残余水分低、颜色浅，含量、澄清度和稳定性大幅提高。产品的质量和稳定性远远高于现生产的产品，提高了临床用药的安全性。本发明专利技术工艺简单，更有利于工业化生产，对注射用达托霉素的生产及临床应用具有重要的理论意义和应用价值。要的理论意义和应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种注射用达托霉素及其制备方法


[0001]本专利技术涉及达托霉素制备
，具体地说是涉及一种注射用达托霉素及其制备方法。

技术介绍

[0002]达托霉素是由玫瑰孢链霉菌发酵产生的一种由一个十碳烷侧链与一个由13个氨基酸残基组成的环状β
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氨基酸肽链N
‑
末端的色氨酸连接而成的酸性环脂肽类抗生素，也是目前全球首个成功开发的环脂肽类抗生素。达托霉素结构新颖、杀菌机制独特，能在多个方面破坏细菌细胞膜功能，并杀死革兰氏阳性菌，其特性表现为抑制作用迅速、体内与体外杀菌作用所需的浓度低、抗生素作用的有效性时间长等。此外，达托霉素可以在细胞没有发生自溶的情况下迅速杀死细菌，避免因磷壁酸、肽聚糖和DNA的释放引起炎症反应，因此较一般抗感染药物安全。达托霉素对多数革兰阳性菌都有快速杀灭活性，包括MRSA、糖肽类敏感的金葡菌、凝固酶阴性的葡萄球菌、耐青霉素的肺炎链球菌、耐万古霉素的菌株、万古霉素中度耐药菌株和耐万古霉素肠球菌、耐药肺炎链球菌等。多种链球菌也具有达托霉素易感性(MIC<1μg/mL)，新分离到的对奎奴普丁/达福普丁具有耐药性的粪肠球菌、凝固酶阴性并耐替考拉宁的葡萄球菌、耐利奈唑胺的粪肠球菌和金黄色葡萄球菌都对达托霉素敏感，但对革兰阴性菌没有活性。可作为MRSA所致骨、关节感染及骨髓炎的替代药物，特别对于那些不能耐受万古霉素治疗的患者。达托霉素抗菌谱广、抗菌活性高、安全性好，具有广阔的应用前景。
[0003]达托霉素为发酵类新型抗生素，其化学结构复杂，在酸碱、高温或水溶液条件下会降解产生降解产物，在发酵、纯化、生产和贮藏过程也会产生杂质。目前达托霉素的制备具有以下缺点：
[0004]1、目前制备高纯度达托霉素的生产工艺交替使用阴离子树脂FP
‑
DA13、大孔树脂HP
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20SS、阴离子树脂PorosD50或Poros 150反复纯化，得到纯度为98％的达托霉素，树脂层析工艺均为常压层析，但其工艺过于繁琐，难以放大，成本较高，收率偏低，不利于工业化规模生产；
[0005]2、专利CN101830970A、CN102276696A在其基础上进行了工艺改进，简化了流程、降低了成本，但仍无法完成工业化生产；
[0006]3、原料质量不稳定，纯度低，收率低，对注射用达托霉素的含量和稳定性影响较大；
[0007]4、注射用达托霉素含量低、杂质多、颜色、澄清度和稳定性较差；
[0008]5、注射用达托霉素在稀释剂中重建速率慢；
[0009]6、冻干工艺普遍存在的弊端是生产周期长，效率低，生产的产品内部结构不均匀、分层、萎缩和批间均一性较差等问题。
[0010]针对上述问题，研究一种适合工业化应用的、高纯度的注射用达托霉素的生产工艺具有重要的现实意义。

技术实现思路

[0011]本专利技术的目的是提供一种注射用达托霉素及其制备方法，以解决现有技术存在的不利于工业化规模生产，产品含量低、杂质多、颜色、澄清度等较差的问题。
[0012]本专利技术技术方案为：一种注射用达托霉素，所述注射用达托霉素中脱水达托霉素含量为1.0％
‑
1.4％，达托霉素的β异构体含量为0.13％
‑
0.24％，杂质RS
‑
2含量为0.05％
‑
0.08％。
[0013]所述注射用达托霉素中达托霉素含量为96％
‑
97.6％，内酯水解物含量为0％。
[0014]一种注射用达托霉素的制备方法，包括以下步骤：
[0015](a)将达托霉素发酵液过滤，滤液导入离子交换树脂进行富集吸附，吸附完毕后，先用纯水洗涤，再用0.01
‑
0.5M NaCl水溶液洗脱，最后用1
‑
5M NaCl水溶液解吸，收集解吸液，将解吸液进行超滤浓缩，得到浓缩滤液A；
[0016](b)将浓缩滤液A导入大孔吸附树脂进行富集吸附，吸附完毕后，先用纯水洗涤，再用15
‑
25vol％的乙醇水溶液洗脱，最后用35
‑
45vol％的乙醇水溶液解吸，收集解吸液，将解吸液进行超滤浓缩，得到浓缩滤液B；
[0017](c)将浓缩滤液B导入聚合物树脂进行吸附，吸附完毕后，先用纯水洗涤，再用0.05
‑
0.5M乙酸钠水溶液洗脱，最后用0.6
‑
2M的乙酸钠水溶液解吸，收集解吸液，将解吸液进行超滤浓缩，得到浓缩滤液C；
[0018](d)将浓缩滤液C导入C18树脂进行吸附，吸附完毕后，先用1
‑
10vol％乙醇水溶液洗涤，再用15
‑
40vol％乙醇水溶液解吸，收集解吸液，将解吸液进行超纳滤浓缩，去除内毒素，得到浓缩滤液D；
[0019](e)在浓缩滤液D中加入盐溶液进行结晶，再经抽滤、淋洗、干燥后得到达托霉素粉状物，将达托霉素粉状物溶解，得到效价为6
‑
10万u/mL的达托霉素水溶液，用强酸阳离子树脂对达托霉素水溶液进行脱盐，得到脱盐液；
[0020](f)在所述脱盐液中加入氢氧化钠水溶液，调节pH值至4.0～5.0，然后进行除菌过滤，最后将无菌药液灌装于西林瓶中，冻干后即得所述注射用达托霉素。
[0021]步骤(a)中，所述离子交换树脂为IRA958、D002或PD30。
[0022]步骤(b)中，所述大孔吸附树脂为HZ801、XAD1600、XRP
‑
S3#中的一种。
[0023]步骤(c)中，所述聚合物树脂为NMQ(PS30
‑
300)。
[0024]步骤(a)至(d)中，根据图谱收集出峰口大于92％的解吸液，检测收集到的解吸液，将效价大于1000u/mL的解吸液合并进行浓缩。
[0025]步骤(a)至(d)中，采用30KD的超滤膜进行超滤。
[0026]步骤(e)中，所述盐溶液为氯化钠或乙酸钠；所述强酸阳离子树脂为001*7或1*25，脱盐时pH维持在3.2
‑
3.6。
[0027]步骤(f)中，所述氢氧化钠水溶液浓度为0.5mol/L。
[0028]步骤(f)中，所述冻干的工艺为：将冷阱温度冷至
‑
40℃后抽真空，真空到达100
‑
300μbar时开始升温，干燥升温到
‑
10℃后，自动打开渗气阀，真空度升至250μbar，维持6
‑
8h，升温至
‑
5℃时，保温10
‑
12h，升温至0℃，保温5
‑
8h，升温至10℃，保温2
‑
5h，继续升温至23℃，维持7
‑
10h。
[0029]步骤(f)中，冻干过程进行充氮保护。
[0030]达托霉素发酵液的制备：
[0031]由玫瑰本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种注射用达托霉素，其特征在于，所述注射用达托霉素中脱水达托霉素含量为1.0%
‑
1.4%，达托霉素的β异构体含量为0.13%
‑
0.24%，杂质RS
‑
2含量为0.05%
‑
0.08%。2.根据权利要求1所述的注射用达托霉素，其特征在于，其达托霉素含量为96%
‑
97.6%，内酯水解物含量为0%。3.一种注射用达托霉素的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（a）将达托霉素发酵液过滤，滤液导入离子交换树脂进行富集吸附，吸附完毕后，先用纯水洗涤，再用0.01
‑
0.5 M NaCl水溶液洗脱，最后用1
‑
5M NaCl水溶液解吸，收集解吸液，将解吸液进行超滤浓缩，得到浓缩滤液A；（b）将浓缩滤液A导入大孔吸附树脂进行富集吸附，吸附完毕后，先用纯水洗涤，再用15
‑
25vol%的乙醇水溶液洗脱，最后用35
‑
45vol%的乙醇水溶液解吸，收集解吸液，将解吸液进行超滤浓缩，得到浓缩滤液B；（c）将浓缩滤液B导入聚合物树脂进行吸附，吸附完毕后，先用纯水洗涤，再用0.05
‑
0.5M乙酸钠水溶液洗脱，最后用0.6
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2M的乙酸钠水溶液解吸，收集解吸液，将解吸液进行超滤浓缩，得到浓缩滤液C；（d）将浓缩滤液C导入C18树脂进行吸附，吸附完毕后，先用1
‑
10vol%乙醇水溶液洗涤，再用15
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40vol%乙醇水溶液解吸，收集解吸液，将解吸液进行超纳滤浓缩，去除内毒素，得到浓缩滤液D；（e）在浓缩滤液D中加入盐溶液进行结晶，再经抽滤、淋洗、干燥后得到达托霉素粉状物，将达托霉素粉状物溶解，得到效价为6
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10万u/mL的达托霉素水溶液，用...

【专利技术属性】
技术研发人员：程林，沈梅，李彦朴，张天兵，张志江，随子华，赵辉，贾啸静，张娴，张慧明，赵倩，姜明星，田鑫，赵建强，程启东，刘雨，鞠加学，张涛，毛兰恩，赵颖，
申请(专利权)人：华北制药华胜有限公司，
类型：发明
国别省市：