本发明专利技术公开了一种基于干酪乳酸杆菌分泌物制备纳米氧化锌的方法，用于解决现有方法制备的纳米氧化锌纯度低的技术问题。技术方案是利用无水乙酸锌为底物，利用干酪乳酸杆菌L.casei ATCC 393为生物媒介，制备出中间产物Zn(OH)2，中间产物Zn(OH)2恒温磁力搅拌后，再经过高温煅烧，得到纳米ZnO。与背景技术相比，无水乙酸锌相较于ZnCl2毒性低；干酪乳酸杆菌L.casei ATCC 393相较于唾液乳酸杆菌L3更为安全；在纳米ZnO的制备中过程中是基于L.casei ATCC 393的发酵产物而不是菌体本身，这样简化了分离、纯化过程，制备得到的产物纳米ZnO的产率和纯度更高。
Preparation of nano-zinc oxide based on Lactobacillus casei secretion
【技术实现步骤摘要】
基于干酪乳酸杆菌分泌物制备纳米氧化锌的方法
本专利技术涉及一种制备纳米氧化锌的方法，特别涉及一种基于干酪乳酸杆菌分泌物制备纳米氧化锌的方法。
技术介绍
文献“唾液乳杆菌L3生物合成纳米氧化锌的工艺研究《现代食品科技》2013年第9期第2192-2198页”公开了一种纳米氧化锌的制备方法，该方法采用的生物媒介是从断奶仔猪粪便中分离的唾液乳酸杆菌L3，制备过程是待唾液乳酸杆菌L3发酵培养结束后，调节培养液的pH，加入适当浓度的ZnCl2溶液，水浴保温反应一定时间，置于37℃陈化12h，离心收集产物并洗涤三次，烘干至恒重，即为纳米ZnO。但是此生产工艺中所利用的ZnCl2有毒性和腐蚀性，并且所用的唾液乳酸杆菌L3不是目前国家公认的益生菌；制备过程中没有分离菌体，后期制备的纳米氧化锌纯度不高。
技术实现思路
为了克服现有方法制备的纳米氧化锌纯度低的不足，本专利技术提供一种基于干酪乳酸杆菌分泌物制备纳米氧化锌的方法。该方法利用无水乙酸锌为底物，利用干酪乳酸杆菌L.caseiATCC393为生物媒介，制备出中间产物Zn(OH)2，中间产物Zn(OH)2恒温磁力搅拌后，再经过高温煅烧，得到纳米ZnO。与
技术介绍
相比，无水乙酸锌相较于ZnCl2毒性低；干酪乳酸杆菌L.caseiATCC393相较于唾液乳酸杆菌L3更为安全；在纳米ZnO的制备中过程中是基于L.caseiATCC393的发酵产物而不是菌体本身，这样有利于简化后续的分离、纯化过程，而且制备得到的产物纳纳米ZnO的产率和纯度更高。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案：一种基于干酪乳酸杆菌分泌物制备纳米氧化锌的方法，其特点是包括以下步骤：步骤一、菌株活化：用MRS固体培养基对干酪乳酸杆菌L.caseiATCC393菌株进行活化培养，MRS固体培养基配方如下：蛋白胨10～12g/L，牛肉膏10～12g/L，酵母膏4～6g/L，柠檬酸氢二铵1.5～2.5g/L，葡萄糖20～25g/L，结晶乙酸钠4～6g/L，磷酸氢二钾2～2.5g/L，七水硫酸镁0.5～0.6g/L，一水硫酸锰0.25～0.3g/L，吐温801～1.5mL/L，琼脂15～20g/L，pH6.2～6.6；将L.caseiATCC393划线接种于MRS固体培养基，于35～38℃厌氧培养36～48h。步骤二、生物合成氢氧化锌：将挑取的干酪乳酸杆菌L.caseiATCC393的单菌落用MRS液体培养基培养，MRS液体培养基配方如下：蛋白胨10～12g/L，牛肉膏10～12g/L，酵母膏4～6g/L，柠檬酸氢二铵1.5～2.5g/L，葡萄糖20～25g/L，结晶乙酸钠4～6g/L，磷酸氢二钾2～2.5g/L，七水硫酸镁0.5～0.6g/L，一水硫酸锰0.25～0.3g/L，吐温801～1.5mL/L，pH6.2～6.6；于35～38℃静置培养36～48h后，收集发酵液，55～65℃恒温搅拌，在搅拌过程中加入终浓度0.15～0.2M乙酸锌，搅拌5～6h。步骤三、分离提取氢氧化锌并转化为纳米ZnO：收集搅拌后的溶液，于高速冷冻离心机，9900～11000rpm，4℃离心8～10min，弃上清，收集沉淀；将沉淀用无菌水洗涤三次，于高速冷冻离心机，9900～11000rpm，4℃离心8～10min，弃上清，收集沉淀；将沉淀冷冻干燥，使成分稳定；随后在马福炉中140～160℃煅烧8～12h，得到纳米ZnO颗粒。本专利技术的有益效果是：该方法利用无水乙酸锌为底物，利用干酪乳酸杆菌L.caseiATCC393为生物媒介，制备出中间产物Zn(OH)2，中间产物Zn(OH)2恒温磁力搅拌后，再经过高温煅烧，得到纳米ZnO。与
技术介绍
相比，无水乙酸锌相较于ZnCl2毒性低；干酪乳酸杆菌L.caseiATCC393相较于唾液乳酸杆菌L3更为安全；在纳米ZnO的制备中过程中是基于L.caseiATCC393的发酵产物而不是菌体本身，这样有利于简化后续的分离、纯化过程，而且制备得到的产物纳纳米ZnO的产率和纯度更高。下面结合附图和具体实施方式对本专利技术作详细说明。附图说明图1是本专利技术基于干酪乳酸杆菌分泌物制备纳米氧化锌的方法的流程图。图2是本专利技术方法实施例1制备的纳米ZnO的扫描电镜(SEM)照片。图3是本专利技术方法实施例1制备的纳米ZnO的能量色散X射线光谱图(EDX)。具体实施方式以下实施例参照图1-3。实施例1：步骤一、菌株活化：用MRS固体培养基对干酪乳酸杆菌L.caseiATCC393菌株进行活化培养，MRS固体培养基配方如下：蛋白胨10g/L，牛肉膏10g/L，酵母膏5g/L，柠檬酸氢二铵2g/L，葡萄糖20g/L，结晶乙酸钠5g/L，磷酸氢二钾2g/L，七水硫酸镁0.6g/L，一水硫酸锰0.25g/L，吐温801mL/L，琼脂15g/L，pH6.4；将L.caseiATCC393划线接种于MRS固体培养基，37℃厌氧培养48h。步骤二、生物合成氢氧化锌：将挑取的干酪乳酸杆菌L.caseiATCC393的单菌落用MRS液体培养基培养，MRS液体培养基配方如下：蛋白胨10g/L，牛肉膏10g/L，酵母膏5g/L，柠檬酸氢二铵2g/L，葡萄糖20g/L，结晶乙酸钠5g/L，磷酸氢二钾2g/L，七水硫酸镁0.6g/L，一水硫酸锰0.25g/L，吐温801mL/L，pH6.4；37℃静置培养48h后，收集发酵液，60℃恒温搅拌，在搅拌过程中加入终浓度0.15M乙酸锌，搅拌6h。步骤三、分离提取氢氧化锌并转化为纳米ZnO：收集搅拌后的溶液，于高速冷冻离心机，10000rpm，4℃离心10min，弃上清，收集沉淀；将沉淀用无菌水洗涤三次，于高速冷冻离心机，10000rpm，4℃离心10min，弃上清，收集沉淀；将沉淀冷冻干燥，使成分稳定；随后在马福炉中150℃煅烧12h,得到ZnO纳米颗粒。干酪乳酸杆菌L.caseiATCC393分泌物合成纳米ZnO的结构表征方法。扫描电镜结果(SEM)：取实施例1中的纳米ZnO通过扫描电镜检测生物纳米ZnO表面的活性物质组成。从图2可以看出，实施例1生产的纳米ZnO平均粒径为125nm。能量色散X射线光谱结果(EDX)：取实施例1中的纳米ZnO通过能量色散X射线光谱检测生物纳米ZnO表面的活性物质组成。从图3可以看出，实施例1制备的纳米ZnO表面包被有多糖及蛋白质等物质。实施例2：步骤一、菌株活化：用MRS固体培养基对干酪乳酸杆菌L.caseiATCC393菌株进行活化培养，MRS固体培养基配方如下：蛋白胨11g/L，牛肉膏11g/L，酵母膏4g/L，柠檬酸氢二铵1.5g/L，葡萄糖23g/L，结晶乙酸钠4g/L，磷酸氢二钾2.3g/L，七水硫酸镁0.5g/L，一水硫酸锰0.27g/L，吐温801.3mL/L，琼脂18g/L，pH6.2；将L.caseiATCC393划线接种于MRS固体培养基，于35℃厌氧培养36h；步骤二、生物合成氢氧化锌：将挑取的干酪乳酸杆菌L.caseiATCC393的单菌落用MRS液体培养基培养，MRS液体培养基配方如下：蛋白胨11g/L，牛肉膏11g/L，酵母膏4g/L，柠檬酸氢二铵1.5g/L，葡萄糖23g/L，结晶乙酸钠4g/L，磷酸氢二钾2.3g/L，七水硫酸镁0.5g本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种基于干酪乳酸杆菌分泌物制备纳米氧化锌的方法，其特征在于包括以下步骤：步骤一、菌株活化：用MRS固体培养基对干酪乳酸杆菌L.casei ATCC 393菌株进行活化培养，MRS固体培养基配方如下：蛋白胨10～12g/L，牛肉膏10～12g/L，酵母膏4～6g/L，柠檬酸氢二铵1.5～2.5g/L，葡萄糖20～25g/L，结晶乙酸钠4～6g/L，磷酸氢二钾2～2.5g/L，七水硫酸镁0.5～0.6g/L，一水硫酸锰0.25～0.3g/L，吐温80 1～1.5mL/L，琼脂15～20g/L，pH 6.2～6.6；将L.casei ATCC 393划线接种于MRS固体培养基，于35～38℃厌氧培养36～48h；步骤二、生物合成氢氧化锌：将挑取的干酪乳酸杆菌L.casei ATCC 393的单菌落用MRS液体培养基培养，MRS液体培养基配方如下：蛋白胨10～12g/L，牛肉膏10～12g/L，酵母膏4～6g/L，柠檬酸氢二铵1.5～2.5g/L，葡萄糖20～25g/L，结晶乙酸钠4～6g/L，磷酸氢二钾2～2.5g/L，七水硫酸镁0.5～0.6g/L，一水硫酸锰0.25～0.3g/L，吐温80 1～1.5mL/L，pH 6.2～6.6；于35～38℃静置培养36～48h后，收集发酵液，55～65℃恒温搅拌，在搅拌过程中加入终浓度0.15～0.2M乙酸锌，搅拌5～6h；步骤三、分离提取氢氧化锌并转化为纳米ZnO：收集搅拌后的溶液，于高速冷冻离心机，9900～11000rpm，4℃离心8～10min，弃上清，收集沉淀；将沉淀用无菌水洗涤三次，于高速冷冻离心机，9900～11000rpm，4℃离心8～10min，弃上清，收集沉淀；将沉淀冷冻干燥，使成分稳定；随后在马福炉中140～160℃煅烧8～12h，得到纳米ZnO颗粒。...
【技术特征摘要】
1.一种基于干酪乳酸杆菌分泌物制备纳米氧化锌的方法，其特征在于包括以下步骤：步骤一、菌株活化：用MRS固体培养基对干酪乳酸杆菌L.caseiATCC393菌株进行活化培养，MRS固体培养基配方如下：蛋白胨10～12g/L，牛肉膏10～12g/L，酵母膏4～6g/L，柠檬酸氢二铵1.5～2.5g/L，葡萄糖20～25g/L，结晶乙酸钠4～6g/L，磷酸氢二钾2～2.5g/L，七水硫酸镁0.5～0.6g/L，一水硫酸锰0.25～0.3g/L，吐温801～1.5mL/L，琼脂15～20g/L，pH6.2～6.6；将L.caseiATCC393划线接种于MRS固体培养基，于35～38℃厌氧培养36～48h；步骤二、生物合成氢氧化锌：将挑取的干酪乳酸杆菌L.caseiATCC393的单菌落用MRS液体培养基培养，MRS液体培养基配方如下：蛋白胨10～12g/L...
【专利技术属性】
技术研发人员：徐春兰，豆喜娜，乔磊，马丽，闫述琦，张宝华，
申请(专利权)人：西北工业大学，
类型：发明
国别省市：陕西,61
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