一种人参皂苷的分离检测方法技术

一种人参皂苷的分离检测方法，包括以下步骤：将水与正丁醇等体积混合，待静置分层后取正丁醇相，然后加入人参粉末，超声处理后过滤并收集液相；然后制备硼酸修饰的介孔硅材料；将硼酸修饰的介孔硅材料超声扩散到萃取液中，然后将得到的液相加入萃取液中震荡萃取并最后离心分离；然后再经过清洗和解析，最后将得到的洗脱液分别进行硼亲和色谱分析和基质辅助激光解析电离质谱分析，然后将色谱分析与质谱分析的人参皂苷含量取平均值即可。本方法不需要复杂的预处理过程，而且具有优异的选择性，排除干扰。

A Separation and Detection Method of Ginsenoside

【技术实现步骤摘要】
一种人参皂苷的分离检测方法
本专利技术涉及一种人参皂苷的分离检测方法。
技术介绍
人参是中国着名的传统中草药之一，在东亚和北美地区，它在制药工业中发挥着重要的作用，已有数千年的历史。人参的主要医学活性成分是根中的人参皂苷，有机酸，维生素等。其中，人参皂苷是一类复杂的三萜皂苷衍生的糖缀合物，被认为是具有多种药理功能的主要生物活性成分，包括抗癌(M.J.Kim,H.Yun,D.H.Kim,I.Kang,W.Choe,S.S.Kim,J.Ha,J.GinsengRes.2014,38,16-21.)，免疫系统调节功能(K.R.Vinoth,T.W.Oh,Y.K.Park,Neurochem.Res.2016,41,951-957.)，治疗白血病(Y.Y.Wu,Y.N.Cui,T.Y.Zhang,W.Li,M.Y.Zhang,J.Cheng,Y.Wang,J,Wang,Y.Q.Zhao,Y.X.Zhang,Phytochem.Lett.2018,27,123-128.)，缺血性脑损伤的神经保护作用(J.Tian,F.Fu,M.Geng,Y.Jiang,J.Yang,W.Jiang,C.Wang,K.Liu,Neurosci.Lett.2005,374,92-97.)。因此，人参皂苷的选择性分析对于人参的药理作用理解和质量控制都具有重要意义。迄今为止，许多分离策略已应用于人参皂苷的分析，如薄层色谱(TLC)，液/气相色谱(R.J.Vanhaelen-Fastré,M.L.Faes,M.H.Vanhaelen,JChromatogrA2000,868,269–276；J.F.Cui,I.P.Eneroth,JChromatogrB1997,689,349–355.)。在实践中，反相色谱(RPLC)是最常用的技术，特别是在各种药典中(例如USP-NF33，JP2011和ChP2015)，因为它具有广泛的适用范围和良好的重现性。然而，由于它们的强极性糖侧链，大多数人参皂苷不适合RPLC(X.J.Guo,X.L.Zhang,Z.M.Guo,Y.F.Liu,A.J.Shen,G.W.Jin,X.M.Liang,JChromatogrA,2014,1325,121–128.)。虽然已经使用不同的分离策略来克服这个问题，包括亲水作用色谱(HILIC)，毛细管电泳和2D-LC(S.Y.Wang,L.Z.Qiao,X.Z.Shi,C.X.Hu,H.W.Kong,G.W.Xu,Anal.Bioanal.Chem.,2015,407,331-341；S.Qiu,W.Z.Yang,X.J.Shi,C.L.Yao,M.Yang,X.Liu,B.H.Jiang,W.Y.Wu,D.A.Guo,Anal.Chim.Acta,2015,893,65-76；Y.L.Tian,Y.Y.lu,J.Xie,Y.Cheng,R.B.Qi,Y.J.Wu,S.S.Zhang,Anal.Methods,2009,1,203-207；J.P.Qin,J.Feng,Y.H.Li,K.F.Mo,S.Y.Lu,J.Pharm.Biomed.,2011,56,836-840.)，他们仍然有些缺点。特别是在人参的某些加工程序(例如蒸汽)之后，人参皂苷的极性可能会发生变化，这对传统的分配色谱来说是一个巨大的挑战(S.D.Jia,J.Li,N.Yunusova,J.H.Park,S.W.Kwon,J.Lee,Phytochem.Anal.,2013,24,374-380.)。作为一个结果，有必要建立一种新颖有效的人参皂苷分离方法，以实现人参的质量评估和控制。硼亲和色谱(BAC)是一种独特的亲和色谱机制，能够特异性识别和分离含顺式二醇的分子。BAC的原理基于硼酸和顺式二醇之间的可逆共价相互作用。硼酸盐亲和力表现出几种吸引人的特征，包括对含有顺式二醇的分子的高特异性，易于操作提取/洗脱过程以及与质谱法相容的洗脱条件。因此，BAC已被用于分离和分析各种含顺式二醇的分子，如核苷，核酸，儿茶酚，碳水化合物和糖蛋白/糖肽(D.J.Li,Y.Chen,Z.Liu,Chem.Soc.Rev.,2015,44,8097-8123.)。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种人参皂苷的分离检测方法，该方法不需要复杂的预处理过程，而且具有优异的选择性，排除干扰。为解决上述技术问题本专利技术提供了一种人参皂苷的分离检测方法，包括以下步骤：(1)将水与正丁醇等体积混合，待静置分层后取正丁醇相10mL，然后加入1.0g人参粉末，超声处理60min后过滤并收集液相，超声频率为50kHz，然后加热蒸干液相中的水分得到母液；(2)取1.0g的CTAB和280mg的氢氧化钠溶解于480ml、80℃的水中，然后边搅拌边滴加5ml的TEOS，然后保持体系温度为80℃保持搅拌，反应2h，反应结束后将所的产物自然冷却，抽滤，依次用去离子水和乙醇洗涤，然后在40℃下真空干燥12h，得到的白色固体记做M1；(3)将M1超声分散于150mL甲醇中，随后加入1.5mL、质量分数为37.2％的浓盐酸中，在90℃下冷凝回流6h，反应结束后，将所的产物自然冷却，抽滤，用去离子水和乙醇洗涤，然后在60℃下真空干燥12h，得到介孔硅纳米颗粒记做M2；(4)将M2超声分散于80mL新制备的无水甲苯中，随后加入1.0mLAPTES并在130℃下搅拌回流20h，所得的材料依次用去离子水和乙醇洗涤后在40℃下真空干燥12h，产物记做M3；(5)将M3溶于DMSO中，配置成混合液，混合液中M3的质量分数为20mg/mL，然后取0.15g的CPBA、0.2g的EDC和0.1g的NHS溶于5.0mL的DMSO中在室温下搅拌30min，随后加入到20mL混合液，保持室温搅拌24h后，依次用DMSO、去离子水、乙醇洗涤，然后在60℃下真空干燥12h，得到的材料即为硼酸修饰的介孔硅材料；(6)将硼酸修饰的介孔硅材料超声扩散到萃取液中，萃取液的添加量与硼酸修饰的介孔硅材料的质量之比为0.1-2mL/mg，所述的萃取液由pH为7.4-9.0磷酸钠缓冲溶液与甲醇混合而成，所述萃取液中甲醇所占比例为5％-30％，然后将步骤(1)得到的母液加入萃取液中震荡萃取，萃取时间为20-60min，最后离心分离出硼酸修饰的介孔硅材料，离心转速为10000r/min，离心时间为5min；(7)将步骤(6)离心分离出的硼酸修饰的介孔硅材料超声扩散到清洗液中，清洗液的添加量与硼酸修饰的介孔硅材料的质量之比为1-3mL/mg，所述的清洗液由pH为7.4-9.0磷酸钠缓冲溶液与甲醇混合而成，所述清洗液中甲醇所占比例为5％-30％，然后进行震荡清洗，清洗时间为3-5min，最后离心分离出硼酸修饰的介孔硅材料，离心转速为10000r/min，离心时间为5min；(8)将步骤(7)离心分离出的硼酸修饰的介孔硅材料超声扩散到解析液中，解析液的添加量与硼酸修饰的介孔硅材料的质量之比为0.1-0.5mL/mg，所述的解析液由100mmol/L的醋酸溶液与甲醇混合而成，所述解析液中甲醇所占比例为50％，解析时间为20-60min，最后离心分离出洗脱液，离心转速为10000r/min，离心本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种人参皂苷的分离检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将水与正丁醇等体积混合，待静置分层后取正丁醇相10mL，然后加入1.0g人参粉末，超声处理60min后过滤并收集液相，超声频率为50kHz，然后加热蒸干液相中的水分得到母液；(2)取1.0g的CTAB和280mg的氢氧化钠溶解于480ml、80℃的水中，然后边搅拌边滴加5ml的TEOS，然后保持体系温度为80℃保持搅拌，反应2h，反应结束后将所的产物自然冷却，抽滤，依次用去离子水和乙醇洗涤，然后在40℃下真空干燥12h，得到的白色固体记做M1；(3)将M1超声分散于150mL甲醇中，随后加入1.5mL、质量分数为37.2％的浓盐酸中，在90℃下冷凝回流6h，反应结束后，将所的产物自然冷却，抽滤，用去离子水和乙醇洗涤，然后在60℃下真空干燥12h，得到介孔硅纳米颗粒记做M2；(4)将M2超声分散于80mL新制备的无水甲苯中，随后加入1.0mL APTES并在130℃下搅拌回流20h，所得的材料依次用去离子水和乙醇洗涤后在40℃下真空干燥12h，产物记做M3；(5)将M3溶于DMSO中，配置成混合液，混合液中M3的质量分数为20mg/mL，然后取0.15g的CPBA、0.2g的EDC和0.1g的NHS溶于5.0mL的DMSO中在室温下搅拌30min，随后加入到20mL混合液，保持室温搅拌24h后，依次用DMSO、去离子水、乙醇洗涤，然后在60℃下真空干燥12h，得到的材料即为硼酸修饰的介孔硅材料；(6)将硼酸修饰的介孔硅材料超声扩散到萃取液中，萃取液的添加量与硼酸修饰的介孔硅材料的质量之比为0.1‑2mL/mg，所述的萃取液由pH为7.4‑9.0磷酸钠缓冲溶液与甲醇混合而成，所述萃取液中甲醇所占比例为5％‑30％，然后将步骤(1)得到的母液加入萃取液中震荡萃取，萃取时间为20‑60min，最后离心分离出硼酸修饰的介孔硅材料，离心转速为10000r/min，离心时间为5min；(7)将步骤(6)离心分离出的硼酸修饰的介孔硅材料超声扩散到清洗液中，清洗液的添加量与硼酸修饰的介孔硅材料的质量之比为1‑3mL/mg，所述的清洗液由pH为7.4‑9.0磷酸钠缓冲溶液与甲醇混合而成，所述清洗液中甲醇所占比例为5％‑30％，然后进行震荡清洗，清洗时间为3‑5min，最后离心分离出硼酸修饰的介孔硅材料，离心转速为10000r/min，离心时间为5min；(8)将步骤(7)离心分离出的硼酸修饰的介孔硅材料超声扩散到解析液中，解析液的添加量与硼酸修饰的介孔硅材料的质量之比为0.1‑0.5mL/mg，所述的解析液由100mmol/L的醋酸溶液与甲醇混合而成，所述解析液中甲醇所占比例为50％，解析时间为20‑60min，最后离心分离出洗脱液，离心转速为10000r/min，离心时间为5min；(9)将步骤(8)得到的洗脱液分别进行硼亲和色谱分析和基质辅助激光解析电离质谱分析，然后将色谱分析与质谱分析的人参皂苷含量取平均值即可。...

【技术特征摘要】
1.一种人参皂苷的分离检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将水与正丁醇等体积混合，待静置分层后取正丁醇相10mL，然后加入1.0g人参粉末，超声处理60min后过滤并收集液相，超声频率为50kHz，然后加热蒸干液相中的水分得到母液；(2)取1.0g的CTAB和280mg的氢氧化钠溶解于480ml、80℃的水中，然后边搅拌边滴加5ml的TEOS，然后保持体系温度为80℃保持搅拌，反应2h，反应结束后将所的产物自然冷却，抽滤，依次用去离子水和乙醇洗涤，然后在40℃下真空干燥12h，得到的白色固体记做M1；(3)将M1超声分散于150mL甲醇中，随后加入1.5mL、质量分数为37.2％的浓盐酸中，在90℃下冷凝回流6h，反应结束后，将所的产物自然冷却，抽滤，用去离子水和乙醇洗涤，然后在60℃下真空干燥12h，得到介孔硅纳米颗粒记做M2；(4)将M2超声分散于80mL新制备的无水甲苯中，随后加入1.0mLAPTES并在130℃下搅拌回流20h，所得的材料依次用去离子水和乙醇洗涤后在40℃下真空干燥12h，产物记做M3；(5)将M3溶于DMSO中，配置成混合液，混合液中M3的质量分数为20mg/mL，然后取0.15g的CPBA、0.2g的EDC和0.1g的NHS溶于5.0mL的DMSO中在室温下搅拌30min，随后加入到20mL混合液，保持室温搅拌24h后，依次用DMSO、去离子水、乙醇洗涤，然后在60℃下真空干燥12h，得到的材料即为...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈阳，别子俊，卿晨，吴微，
申请(专利权)人：蚌埠医学院，
类型：发明
国别省市：安徽,34