一种EGFR T790M和C797S顺式突变的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种EGFR顺式突变的检测方法，基于Blocker PCR技术，在野生型EGFR基因的正义链和反义链上分别选择不同待测突变位点设计相应的Blocker，所述Blocker能够分别与野生型EGFR基因的正义链和反义链的待测突变位点结合，形成稳定的杂交体阻止上、下游引物扩增野生型以及发生单一突变或反式突变的EGFR基因。本发明专利技术方法简便，能够有效的区分EGFR顺式构型突变与反式构型突变，而且灵敏度高，即使在外周血样本中也可以检出低至0.1％的突变，对TKI的耐药突变的临床诊断具有非常高的应用价值。

Detection of cis-mutation in EGFR T790M and C797S

【技术实现步骤摘要】
一种EGFRT790M和C797S顺式突变的检测方法
本专利技术属于基因检测领域，具体涉及一种基于BlockerPCR技术的EGFR顺式突变的检测方法。
技术介绍
EGFR是原癌基因c-erbB1的表达产物，是表皮生长因子受体(HER)家族成员之一。EGFR是一种跨膜酪氨酸激酶受体，该受体激酶域激活与癌细胞增殖、转移和凋亡等多种信号传导通路有关。EGFR突变主要发生在胞内酪氨酸激酶(TK)区域的前四个外显子上(18～21)，目前发现的TK区域突变有30多种。其中外显子20上的T790M替代突变为一代EGFR酪氨酸激酶抑制剂(TyrosineKinaseInhibitor，TKI)的耐药突变。TKI一直是EGFR突变型NSCLC靶向治疗中的重要药物，但是大多数具有敏感EGFR突变的患者在第一代EGFRTKI治疗9-13个月会出现耐药性进展。在所有的耐药机制中，EGFRT790M突变占60％左右的比例。第三代EGFR-TKI泰瑞沙/Tagrisso(又名奥希替尼/Osimertinib，AZD9291)是不可逆的选择性TKI，可以有效应对T790M突变的新一代靶向药物，为克服T790M继本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种EGFR顺式突变的检测方法，其特征在于基于Blocker PCR技术，在野生型EGFR基因的正义链和反义链上分别选择不同待测突变位点设计相应的Blocker，所述Blocker能够分别与野生型EGFR基因的正义链和反义链的待测突变位点结合，形成稳定的杂交体，阻止上、下游引物扩增野生型以及发生单一突变或反式突变的EGFR基因。

【技术特征摘要】
1.一种EGFR顺式突变的检测方法，其特征在于基于BlockerPCR技术，在野生型EGFR基因的正义链和反义链上分别选择不同待测突变位点设计相应的Blocker，所述Blocker能够分别与野生型EGFR基因的正义链和反义链的待测突变位点结合，形成稳定的杂交体，阻止上、下游引物扩增野生型以及发生单一突变或反式突变的EGFR基因。2.如权利要求1所述的EGFR顺式突变的检测方法，其特征在于所述EGFR顺式突变为T790M和C797S顺式突变。3.如权利要求2所述的检测方法，其特征在于所述Blocker如SEQIDNO:1和SEQIDNO:2所示。4.如权利要求3所述的检测方法，其特征在于所述方法使用的EGFR上游引物序列如SEQIDNO.3所示，EGFR下游引物序列如SEQIDNO.4所示。5.如权利要求1所述的EGFR顺式突变的检测方法，其特征在于进一步在EGFR上、下游引物中间保守区域设计Taqman探针或分子信标，或者使用荧光染料SYBRGreen或EvaGreen，用于观察或者定量上下游引物PCR扩增情况。6.如权利要求1所述的EGFR顺式突变的检测方法，其特征在于采用焦磷酸测序技术、Sanger测序法、NGS测序法或聚合酶链式反应－单链构象多态性分析进行测序。7.如权利要求6所述的检测方法，其特征在于采用焦磷酸测序技术进行测序，所述EGFR上游引物或下游引物的5’端有生物素标记。8.如权利要求1-7任一项所述的EG...

【专利技术属性】
技术研发人员：储天晴，陈曦，丁俐，谭淼，汤玉萍，
申请(专利权)人：格尚微上海生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31