同时检测中华绒螯蟹蟹黄中四类药物及其代谢物的方法技术

本发明专利技术实施例公开了一种同时检测中华绒螯蟹蟹黄中四类药物及其代谢物的方法，其包括：将蟹黄处理均质形成浆状蟹黄，将所述浆状蟹黄中加入乙腈和乙酸乙酯混合液、无水硫酸镁、氯化钠，混匀并超声处理，离心获得上清液；将所述上清液通过分散固相萃取净化获得纯化液，所述纯化液干燥后，将干燥物用乙腈溶解过滤，获得待检测液；利用液相色谱质谱联用测定待检测液中的所述四类药物化合物及其含量。本发明专利技术实施例采用同一前处理方法，通过优化得出乙腈与乙酸乙酯最佳混合比例，可以使四类药物及其代谢物均获得良好的测定结果。有效提高了实际阳性样品中药物的提取效率，大幅提高了工作效率，缩短了检测时间，节约了试剂耗材消耗。

Simultaneous Detection of Four Drugs and Their Metabolites in Eriocheir sinensis Crab Yellow

【技术实现步骤摘要】
同时检测中华绒螯蟹蟹黄中四类药物及其代谢物的方法
本专利技术实施例涉及污染物残留检测
，具体涉及一种同时检测中华绒螯蟹蟹黄中四类药物及其代谢物的方法。
技术介绍
随着水产养殖业的不断发展，水产品中药物残留问题已经成为公众所关注的重要问题。中华绒螯蟹俗称大闸蟹，是民众喜爱的食品。作为长江中下游地区重要的水产品，产业规模近千亿元，其品质及药物残留一直深受关注。近年来随着生产规模的扩大、集约化程度的提高，养殖环境渐趋恶化，使得养蟹过程中养殖病害频繁发生，在防治病害过程中大量使用抗生素、化学药剂、残留药剂势必造成养殖对象的严重污染，最终影响养殖成蟹的食用安全性。蟹黄作为中华绒螯蟹重要食用部位，包括消化腺、排泄腺和肝胰腺，含有丰富的蛋白质、磷脂和其他营养物质，营养丰富，同时也是化学物质集中之处，其中药物残留的含量也要高于蟹肉。喹诺酮类药物属于使用广泛一类人工合成抗菌药物，其具有抗菌范围广、杀菌效果好、半衰期久、无交叉耐药性、价格便宜等优点，在水产养殖过程中起着不可替代的作用，但是若长期食用被此类药物污染的食品，可能会诱导人类病原微生物产生耐药性和抗药性，对食用者产生直接毒性及潜在“三致”(致癌、致畸、致突变)作用。磺胺类药物为人工合成的抗菌药，具有抗菌谱较广、性质稳定等特点。但其大量使用可导致细菌在巨大的环境选择压力下产生抗药性，其残留会通过食物链对人体产生副作用，具有潜在的“三致”等危害，多数国家或组织普遍将其列为动物饲养过程中限制使用药物，并提出了严格的限量要求。三苯甲烷类及其代谢物：该类物质在鱼体内代谢为隐色孔雀石绿和隐色结晶紫，长期残留于生物体内，超量使用可致癌，具有较强的“三致”作用。氯霉素类包括氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考等，氟苯尼考的代谢物主要以氟苯尼考胺形式存在。氯霉素有很强的毒副作用，甲砜霉素对血液系统的毒性比氯霉素小，但有抑制人体免疫系统及红细胞和血小板的生成。氟苯尼考在养殖中大量、不规范的使用也导致其在水产品等动物性食品中的残留，直接影响消费者身体健康，并导致耐药菌的产生，欧盟规定以氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺作为检出物。。目前，专门针对中华绒螯蟹尤其是蟹黄中药物残留的标准检测方法较少，多是针对肉、鱼等产品，而且是分别检测药物残留成分中的喹诺酮类、磺胺类、三苯甲烷类及其代谢物、氯霉素类及其代谢物，检测的效率较低。
技术实现思路
为此，本专利技术实施例提供一种同时检测中华绒螯蟹蟹黄中四类药物及其代谢物的方法，以解决现有技术中专门针对蟹黄中药物残留量检测的测定方法少，测定方法效率低的问题。为了实现上述目的，本专利技术实施例提供如下技术方案：一种同时检测中华绒螯蟹蟹黄中四类药物及其代谢物的方法，其包括：将蟹黄处理均质形成浆状蟹黄，将所述浆状蟹黄中加入乙腈和乙酸乙酯混合液、无水硫酸镁、氯化钠，混匀并超声处理，离心获得上清液；将所述上清液通过分散固相萃取净化获得纯化液，所述纯化液干燥后，将干燥物用乙腈水溶液溶解过滤，获得待检测液；利用液相色谱质谱联用测定待检测液中的所述四类药物化合物及其含量。优选的，所述四类药物化合物包括喹诺酮类、磺胺类、三苯甲烷类及其代谢物、氯霉素类及其代谢物。优选的，所述喹诺酮类、磺胺类药物采用基质匹配外标法定量，以各药物化合物的定量离子峰面积为纵坐标，对应的药物化合物浓度作为横坐标，获得标准曲线；所述三苯甲烷类及其代谢物、氯霉素类及其代谢物采用同位素内标法定量，以各药物化合物的定量离子峰面积与内标药物化合物峰面积的比值为纵坐标，对应的药物化合物浓度作为横坐标，获得标准曲线。优选的，所述乙腈和乙酸乙酯混合液中，乙腈和乙酸乙酯的体积比为76:24。优选的，所述浆状蟹黄中还加入内标液，所述内标液的浓度为0.1mg/L的孔雀石绿-D5、隐色孔雀石绿-D6、氯霉素-D5。优选的，所述分散固相萃取净化过程为将所述上清液中加入75mgPSA、150mgC18和200mg无水硫酸钠，震荡混匀，净化后的溶液于4000r/min离心10min，获得纯化液。优选的，所述液相色谱质谱联用检测时，采用AngilentZorbaxC18色谱柱，并以5mM/L甲酸胺水溶液和乙腈作为流动相，待检测物的保留时间分布在1-20min。优选的，所述液相色谱质谱联用采用正负离子模式快速切换同时扫描测定，所述四类药物化合物中的氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考采用负离子模式，其它药物化合物均使用正离子模式扫描。本专利技术实施例具有如下优点：本专利技术实施例采用同一前处理方法，通过优化得出乙腈与乙酸乙酯最佳混合比例，在保证峰形的前提下，用乙腈：乙酸乙酯(76:24)混合溶剂提取，可以使四类药物及其代谢物均获得良好的测定结果。有效提高了实际阳性样品中药物的提取效率，大幅提高了工作效率，缩短了检测时间，节约了试剂耗材消耗。本专利技术针对三苯甲烷类及其代谢物、氯霉素类及其代谢物采用同位素内标法定量，结果重现性好，灵敏度高，适用于中华绒螯蟹蟹黄中四类药物及其代谢物残留的快速、准确测定。本专利技术实施例中，氯霉素类化合物通常使用负离子模式检测，其余化合物使用正离子模式检测，因此本方法通过设定正负离子快速切换，同时检测四类药物及其代谢物，大幅节约检测时间。附图说明为了更清楚地说明本专利技术的实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。显而易见地，下面描述中的附图仅仅是示例性的，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图引伸获得其它的实施附图。图1本专利技术实施例的环丙沙星的选择离子流质谱多反应监测色谱图；图2本专利技术实施例的恩诺沙星的选择离子流质谱多反应监测色谱图；图3本专利技术实施例的丹诺沙星的选择离子流质谱多反应监测色谱图；图4本专利技术实施例的双氟沙星的选择离子流质谱多反应监测色谱图；图5本专利技术实施例的依诺沙星的选择离子流质谱多反应监测色谱图；图6本专利技术实施例的麻保沙星的选择离子流质谱多反应监测色谱图；图7本专利技术实施例的氟罗沙星的选择离子流质谱多反应监测色谱图；图8本专利技术实施例的氟甲喹的选择离子流质谱多反应监测色谱图；图9本专利技术实施例的洛美沙星的选择离子流质谱多反应监测色谱图；图10本专利技术实施例的本专利技术实施例的萘啶酸的选择离子流色谱图图11本专利技术实施例的诺氟沙星的选择离子流质谱多反应监测色谱图；图12本专利技术实施例的氧氟沙星的选择离子流质谱多反应监测色谱图；图13本专利技术实施例的奥比沙星的选择离子流质谱多反应监测色谱图；图14本专利技术实施例的恶喹酸的选择离子流质谱多反应监测色谱图；图15本专利技术实施例的培氟沙星的选择离子流质谱多反应监测色谱图；图16本专利技术实施例的吡哌酸的选择离子流质谱多反应监测色谱图；图17本专利技术实施例的沙拉沙星的选择离子流质谱多反应监测色谱图；图18本专利技术实施例的司帕沙星的选择离子流质谱多反应监测色谱图；图19本专利技术实施例的孔雀石绿的选择离子流质谱多反应监测色谱图；图20本专利技术实施例的隐色孔雀石绿的选择离子流质谱多反应监测色谱图；图21本专利技术实施例的结晶紫的选择离子流质谱多反应监测色谱图；图22本专利技术实施例的隐色结晶紫的选择离子流质谱多反应监测色谱图；图23本专利技术实施例的孔雀石绿-D5的选择离子流质谱多反应监测色谱图；图24本专利技术实施例的隐色孔雀石绿-D6的选择离子流质本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种同时检测中华绒螯蟹蟹黄中四类药物及其代谢物的方法，其特征在于包括：将蟹黄处理均质形成浆状蟹黄，将所述浆状蟹黄中加入乙腈和乙酸乙酯混合液、无水硫酸镁、氯化钠，混匀并超声处理，离心获得上清液；将所述上清液通过分散固相萃取净化获得纯化液，所述纯化液干燥后，将干燥物用乙腈水溶液溶解过滤，获得待检测液；利用液相色谱质谱联用测定待检测液中所述四类药物化合物及其含量。

【技术特征摘要】
1.一种同时检测中华绒螯蟹蟹黄中四类药物及其代谢物的方法，其特征在于包括：将蟹黄处理均质形成浆状蟹黄，将所述浆状蟹黄中加入乙腈和乙酸乙酯混合液、无水硫酸镁、氯化钠，混匀并超声处理，离心获得上清液；将所述上清液通过分散固相萃取净化获得纯化液，所述纯化液干燥后，将干燥物用乙腈水溶液溶解过滤，获得待检测液；利用液相色谱质谱联用测定待检测液中所述四类药物化合物及其含量。2.如权利要求1所述的同时检测中华绒螯蟹蟹黄中四类药物及其代谢物的方法，其特征在于，所述四类药物化合物包括喹诺酮类、磺胺类、三苯甲烷类及其代谢物、氯霉素类及其代谢物。3.如权利要求2所述的同时检测中华绒螯蟹蟹黄中四类药物及其代谢物的方法，其特征在于，所述喹诺酮类、磺胺类药物采用基质匹配外标法定量，以各药物化合物的定量离子峰面积为纵坐标，对应的药物化合物浓度作为横坐标，获得标准曲线；所述三苯甲烷类及其代谢物、氯霉素类及其代谢物采用同位素内标法定量，以各药物化合物的定量离子峰面积与内标药物化合物峰面积的比值为纵坐标，对应的药物化合物浓度作为横坐标，获得标准曲线。4.如权利要求1所述的同时检测中华绒螯蟹蟹黄中四类药物及其代谢物的方法，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶诚，张霖，
申请(专利权)人：湖北出入境检验检疫局检验检疫技术中心，
类型：发明
国别省市：湖北,42