一种测定肝脏组织中NNN代谢产物含量及预测NNN暴露风险的方法技术

本发明专利技术涉及一种测定肝脏组织中NNN代谢产物含量及预测NNN暴露风险的方法，属于生物化学分析技术领域。本发明专利技术的方法通过测定血液中的NNN直接代谢产物及肝脏组织内NNN的间接代谢产物，在获得NNN及其代谢物的入体循环相对量的基础上，分别根据血液中α‑羟基化代谢途径产物总量与进入体循环的NNN相对量的比值和主要代谢器官内代表性DNA加合物的产量来评价NNN暴露后在不同个体内的α‑羟基化反应程度。本发明专利技术的方法评价结果准确、可靠，具有可比性，开创了一种新的可用于NNN早期暴露风险评估的方法。

A METHOD FOR DETERMINING THE CONTENT OF NNN METABOLITES IN LIVER TISSUE AND PREDICTING THE RISK OF NNN EXPOSURE

【技术实现步骤摘要】
一种测定肝脏组织中NNN代谢产物含量及预测NNN暴露风险的方法
本专利技术涉及一种测定肝脏组织中NNN代谢产物含量及预测NNN暴露风险的方法，属于生物化学分析

技术介绍
TSNAs是烟草中特有的N-亚硝胺类有害成分，其中N’-亚硝基降烟碱(NNN)还被国际癌症研究机构(IARC)列为Ⅰ类人体致癌物质，其具有强烈的器官致癌活性，如与肺癌、胰腺癌等癌症的发生有关。目前认为，TSNAs的致癌作用是通过其在生物体内的代谢活化而产生的，因此研究TSNAs在生物体内的代谢历程显得尤为必要。研究表明，NNN在机体内的代谢主要有三种途径，第一种是吡啶-N-氧化，第二种是吡啶环的羟基化(包括在2’和5’位置的α-羟基化)，第三种是去甲基可替宁的形成。虽然目前关于形成去甲基可替宁的作用说法不一，但与另一种研究较多的重要TSNAs——4-(甲基亚硝基)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(NNK)类似，NNN的吡啶-N-氧化代谢途径是解毒过程，而其α-羟基化代谢途径被认为是致毒过程。NNN通过2’位置的羟基化代谢途径生成不稳定的中间体—2’-羟基NNN，此中间体可以自发脱去一个HONO生成麦斯明(My本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种预测NNN暴露风险的方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)将肝脏组织进行水解、孵育，然后固液分离；(2)将步骤(1)固液分离后的液体过固相萃取柱，洗脱，洗脱液除去溶剂得到固体样品；(3)将步骤(2)得到的固体样品用乙腈溶解得到测试样品，将测试样品采用液相色谱‑质谱联用法测试分析O

【技术特征摘要】
1.一种预测NNN暴露风险的方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)将肝脏组织进行水解、孵育，然后固液分离；(2)将步骤(1)固液分离后的液体过固相萃取柱，洗脱，洗脱液除去溶剂得到固体样品；(3)将步骤(2)得到的固体样品用乙腈溶解得到测试样品，将测试样品采用液相色谱-质谱联用法测试分析O2-POB-dT含量；(4)根据肝脏组织中O2-POB-dT含量确定NNN在动物体内的代谢程度，并预测NNN对动物体的暴露风险。2.根据权利要求1所述的预测NNN暴露风险的方法，其特征在于：步骤(1)所述的水解是在酸溶液中水解。3.根据权利要求1所述的预测NNN暴露风险的方法，其特征在于：步骤(1)所述的孵育是在80℃水浴中孵育30min。4.根据权利要求1所述的预测NNN暴露风险的方法，其特征在于：步骤(1)所述的固液分离是使用0.22μm的有机相针式滤膜过滤。5.根据权利要求1所述的预测NNN暴露风险的方法，其特征在于：还包括如下步骤：测定动物血液样品中NNN的α-羟基化途径代谢产物的含量，计算α-羟基化系数，并结合动物肝脏中O2-POB-dT含量，确定NNN在动物体内的代谢程度，并预测NNN对动物体的暴露风险。6.根据权利要求1所述的预测NNN暴露风险的方法，其特征在于：所述过固相萃取柱的上样速度为1～2mL/min。7.根据权利要求1所述的预测NNN暴露风险的...

【专利技术属性】
技术研发人员：毛健，张建勋，张启东，柴国璧，刘俊辉，宋瑜冰，史清照，范武，席辉，孙世豪，洪广峰，宗永立，
申请(专利权)人：中国烟草总公司郑州烟草研究院，
类型：发明
国别省市：河南,41