一种在盐单胞菌中快速基因编辑的载体组合及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种在盐单胞菌中快速基因编辑的载体组合及其应用。所述载体组合包括cas9表达载体和sgRNA表达载体，其中，所述cas9表达载体通过将cas9基因引入质粒载体而得到，其中，所述cas9表达载体不含λ‑RED重组酶基因。本发明专利技术比现有的盐单胞菌的基因编辑手段更加快速，进行一次基因编辑的流程仅需8天，大大提高了盐单胞菌的改造效率。此外，本发明专利技术在盐单胞菌中使用上述载体的组合，利用基于CRISPR/Cas9的基因编辑方法进行多个基因的连续编辑(敲除及插入)能够大大减少所需时间。

A Vector Combination for Rapid Gene Editing in Salmonella Salina and Its Application

【技术实现步骤摘要】
一种在盐单胞菌中快速基因编辑的载体组合及其应用
本专利技术属于基因工程领域，具体而言，涉及一种在盐单胞菌中快速基因编辑的载体组合及其应用。
技术介绍
CN102120973A公开的盐单胞菌(Halomonassp.)TD01(保藏号为CGMCCNo.4353)是一株筛选自中国新疆省艾丁湖土壤样品中的革兰氏阴性嗜盐菌，由于其能够实现无灭菌开放式连续发酵，为工业发酵的低成本生产带来了突破性技术。盐单胞菌TD01的最适生长条件为高盐高碱环境，这种环境下非嗜盐菌无法生长，因此盐单胞菌TD01的发酵过程可在开放式无灭菌的条件下进行，从而直接减少了发酵生产中灭菌所带来的能耗成本。盐单胞菌TD01所生长的高盐环境的盐浓度与海水中的盐浓度相近，使用海水作为发酵底物，代替淡水，可以降低原料成本，同时减少工业发酵生产过程中的淡水消耗问题。另外，盐单胞菌TD01生长的高盐环境为高渗条件，在低渗条件下细胞更容易破裂，有利于简化胞内产物(例如聚羟基脂肪酸酯PHA)的提取，因此可以降低提纯成本。这些因素使得盐单胞菌TD01有潜力成为工业发酵生产的平台菌株，用于生产各种生物发酵产品。目前盐单胞菌TD01及其改造菌本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于CRISPR/Cas9的基因编辑的载体组合，其包括cas9表达载体和sgRNA表达载体，其中，所述cas9表达载体通过将cas9基因引入质粒载体而得到，其中，所述cas9表达载体不含λ‑RED重组酶基因。

【技术特征摘要】
1.一种基于CRISPR/Cas9的基因编辑的载体组合，其包括cas9表达载体和sgRNA表达载体，其中，所述cas9表达载体通过将cas9基因引入质粒载体而得到，其中，所述cas9表达载体不含λ-RED重组酶基因。2.根据权利要求1所述的载体组合，其中，构建所述cas9表达载体所需的元件包括：复制子，抗性基因，启动子和cas9基因；以及其中，构建所述sgRNA表达载体所需的元件包括：复制子，抗性基因，启动子和sgRNA支架。3.根据权利要求1所述的载体组合，其中，所述质粒载体包括pSEVA321、pSEVA331、pSEVA341、pBBR1MCS-1。4.根据权利要求1所述的载体组合，其中，所述载体组合为在盐单胞菌中的基于CRISPR/Cas9的基因编辑的载体组合，优选地，所述盐单胞菌选自盐单胞菌TD01、盐单胞菌LS21及它们的衍生菌，更优选地，所述盐单胞菌选自盐单胞菌TD01、盐单胞菌TD08、盐单胞菌TD40、盐单胞菌TD-MmP1、盐单胞菌LS21。5.根据权利要求1所述的载体组合，其中，所述cas9表达载体通过将cas9基因引入pSEVA321中而得到，更优选地，所述cas9表达载体通过将cas9基因引入pSEVA321的XmaI和SacII位点之间而得到。6.根据权利要求1所述的载体组合，其中，所述cas9表达载体的核苷酸序列如SEQIDNO:3所述，和/或其中，...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈国强，秦琴，尹进，相瑞娟，郭瑛瑛，
申请(专利权)人：北京蓝晶微生物科技有限公司，清华大学，
类型：发明
国别省市：北京,11