一种骨髓间充质干细胞冻存液及冻存方法技术

本发明专利技术属于生物制剂技术领域，具体公开了一种骨髓间充质干细胞冻存液及冻存方法。所述的骨髓间充质干细胞冻存液，其包含如下重量份的组分：DMEM培养基80～100份；人血白蛋白注射液30～50份；DMSO 10～20份；人参提取物5～10份；芦荟提取物5～10份；青霉素0.1～1份。该干细胞冻存液是专门针对骨髓间充质干细胞而开发的；其可以显著提高骨髓间充质干细胞的冻存活率。

【技术实现步骤摘要】
一种骨髓间充质干细胞冻存液及冻存方法
本专利技术所述的一种骨髓间充质干细胞冻存液及冻存方法；具体属于生物制剂

技术介绍
间充质干细胞是一种多能干细胞，它具有干细胞的所有共性，即自我更新和多向分化能力；存在于如骨髓、脐带血和脐带、胎盘、脂肪等组织中。骨髓间充质干细胞是存在哺乳动物的骨髓基质中的一种具有分化形成骨、软骨、脂肪、神经及成肌细胞的多种分化潜能的细胞亚群。间充质干细胞的临床研究已经在许多国家开展，随着间充质干细胞技术的日益成熟，我国也批准了多项临床试验。目前间充质干细胞主要应用于造血干细胞移植、组织损伤修复、自身免疫性疾病或作为基因治疗的载体。骨髓间充质干细胞冻存是其保存的主要方法之，但现有的冻存液都是通用型的冻存液，缺乏专门骨髓间充质干细胞冻存液，这就会造成骨髓间充质干细胞冻存效果不好，尤其是长时间冻存。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是，提供一种骨髓间充质干细胞冻存液；该细胞冻存液是专门针对骨髓间充质干细胞而开发的，对于骨髓间充质干细胞的冻存能显著提高骨髓间充质干细胞的细胞活率。本专利技术所述的技术方案如下：一种骨髓间充质干细胞冻存液，其特征在于，包含如下重量份的组分：DMEM培养基80～100份；人血白蛋白注射液30～50份；DMSO10～20份；人参提取物5～10份；芦荟提取物5～10份；青霉素0.1～1份。作为一种优选地方案，所述的骨髓间充质干细胞冻存液，包含如下重量份的组分：DMEM培养基90～100份；人血白蛋白注射液40～50份；DMSO15～20份；人参提取物8～10份；芦荟提取物8～10份；青霉素0.1～0.5份。作为一种最优选地方案，所述的骨髓间充质干细胞冻存液，其包含如下重量份的组分：DMEM培养基90份；人血白蛋白注射液40份；DMSO15份；人参提取物8份；芦荟提取物8份；青霉素0.1份。作为一种优选地方案，所述的人参提取物通过如下方法制备得到：将人参加入到体积分数为50％～70％的乙醇水溶液中提取，得提取物；再将所述的提取物浓缩、干燥后即得所述的人参提取物；所述人参与乙醇水溶液的用量比为1g：5～10mL；所述的芦荟提取物通过如下方法制备得到：将芦荟加入到水中提取，得提取物；再将所述的提取物浓缩、干燥后即得所述的芦荟提取物；所述芦荟与水的用量比为1g：10～15mL。作为一种最优选地方案，所述的人参提取物通过如下方法制备得到：将人参加入到体积分数为60％的乙醇水溶液中提取，得提取物；再将所述的提取物浓缩、干燥后即得所述的人参提取物；所述人参与乙醇水溶液的用量比为1g：8mL；所述的芦荟提取物通过如下方法制备得到：将芦荟加入到水中提取，得提取物；再将所述的提取物浓缩、干燥后即得所述的芦荟提取物；所述芦荟与水的用量比为1g：12mL。作为一种优选地方案，所述的提取为超声提取。作为一种优选地方案，所述的干燥为冷冻干燥，所述的冷冻干燥方法为：将提取物浓缩至固含物为20％～40％，然后在1～5℃下预冷10～20min，接着在-30～-40℃下进行冷冻成固体；最后进行抽真空干燥即得。作为一种最优选地方案，所述的冷冻干燥方法为：将提取物浓缩至固含物为30％，然后在3℃下预冷15min，接着在-35℃下进行冷冻成固体；最后进行抽真空干燥即得。本专利技术还提供一种骨髓间充质干细胞的冻存方法，其包含如下步骤：将骨髓间充质干细胞放入上述骨髓间充质干细胞冻存液中，先在-20～-30℃下预冻2～3h；然后以2～4℃的温度降至-70～-80℃，继续预冻3～5h；预冻完成后转移至液氮中保存。作为一种优选地方案，所述的骨髓间充质干细胞的冻存方法，其包含如下步骤：将骨髓间充质干细胞放入上述骨髓间充质干细胞冻存液中，先在-25℃下预冻2.5h；然后以3℃的温度降至-75℃，继续预冻4h；预冻完成后转移至液氮中保存。作为一种优选地方案，髓间充质干细胞在冻存液中的密度为为1×105～1×108个/ml。有益效果：本专利技术提供了一种全新配方的骨髓间充质干细胞冻存液，该配方是专门针对骨髓间充质干细胞而开发的；尤其是在配方中加入了人参提取物和芦荟提取物，可以显著提高细胞的活率，经试验表明，所述的骨髓间充质干细胞在本专利技术所述的冻存液中冻存2年，其细胞活率达95％以上；此外，本专利技术所述的细胞冻存液成分简单，原料便宜易得，可以降低骨髓间充质干细胞的冻存成本。具体实施方式以下结合具体实施例来进一步解释本专利技术，然而本专利技术的保护范围并非仅仅局限于以下实施例。实施例1骨髓间充质干细胞的冻存方法(1)配制骨髓间充质干细胞冻存液的制备将DMEM培养基90份(重量份，下同)、人血白蛋白注射液40份、DMSO15份、人参提取物8份、芦荟提取物8份以及青霉素0.1份混合均匀即得所述的骨髓间充质干细胞冻存液；所述的人参提取物通过如下方法制备得到：将人参加入到体积分数为60％的乙醇水溶液中进行超声提取，得提取物；再将所述的提取物浓缩至固含物为30(重量)％，然后在3℃下预冷15min，接着在-35℃下进行冷冻成固体；最后进行抽真空干燥即得所述的人参提取物；所述人参与乙醇水溶液的用量比为1g：8mL；所述的芦荟提取物通过如下方法制备得到：将芦荟加入到水中进行超声提取，得提取物；再将所述的提取物浓缩至固含物为30(重量)％，然后在3℃下预冷15min，接着在-35℃下进行冷冻成固体；最后进行抽真空干燥即得；所述芦荟与水的用量比为1g：12mL。(2)骨髓间充质干细胞的冻存方法将骨髓间充质干细胞放入上述骨髓间充质干细胞冻存液中，先在-25℃下预冻2.5h；然后以3℃的温度降至-75℃，继续预冻4h；预冻完成后转移至液氮中保存；所述髓间充质干细胞在冻存液中的密度为为1×106个/ml。实施例2骨髓间充质干细胞的冻存方法(1)配制骨髓间充质干细胞冻存液的制备将DMEM培养基80份(重量份，下同)、人血白蛋白注射液50份、DMSO10份、人参提取物5份、芦荟提取物5份以及青霉素0.3份混合均匀即得所述的骨髓间充质干细胞冻存液；所述的人参提取物通过如下方法制备得到：将人参加入到体积分数为50％的乙醇水溶液中进行超声提取，得提取物；再将所述的提取物浓缩至固含物为20(重量)％，然后在1℃下预冷10min，接着在-30℃下进行冷冻成固体；最后进行抽真空干燥即得所述的人参提取物；所述人参与乙醇水溶液的用量比为1g：10mL；所述的芦荟提取物通过如下方法制备得到：将芦荟加入到水中进行超声提取，得提取物；再将所述的提取物浓缩至固含物为20(重量)％，然后在1℃下预冷10min，接着在-30℃下进行冷冻成固体；最后进行抽真空干燥即得；所述芦荟与水的用量比为1g：10mL。(2)骨髓间充质干细胞的冻存方法将骨髓间充质干细胞放入上述骨髓间充质干细胞冻存液中，先在-20℃下预冻3h；然后以3℃的温度降至-80℃，继续预冻3h；预冻完成后转移至液氮中保存；所述髓间充质干细胞在冻存液中的密度为为1×106个/ml。实施例3骨髓间充质干细胞的冻存方法(1)配制骨髓间充质干细胞冻存液的制备将DMEM培养基100份(重量份，下同)、人血白蛋白注射液30份、DMSO20份、人参提取物10份、芦荟提取物10份以及青霉素0.5份混合均匀即得所述的骨髓间充质干细胞冻存液；所本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种骨髓间充质干细胞冻存液，其特征在于，包含如下重量份的组分：DMEM培养基80～100份；人血白蛋白注射液30～50份；DMSO 10～20份；人参提取物5～10份；芦荟提取物5～10份；青霉素0.1～1份。

【技术特征摘要】
1.一种骨髓间充质干细胞冻存液，其特征在于，包含如下重量份的组分：DMEM培养基80～100份；人血白蛋白注射液30～50份；DMSO10～20份；人参提取物5～10份；芦荟提取物5～10份；青霉素0.1～1份。2.根据权利要求1所述的骨髓间充质干细胞冻存液，其特征在于，包含如下重量份的组分：DMEM培养基90～100份；人血白蛋白注射液40～50份；DMSO15～20份；人参提取物8～10份；芦荟提取物8～10份；青霉素0.1～0.5份。3.根据权利要求1所述的骨髓间充质干细胞冻存液，其特征在于，包含如下重量份的组分：DMEM培养基90份；人血白蛋白注射液40份；DMSO15份；人参提取物8份；芦荟提取物8份；青霉素0.1份。4.根据权利要求1所述的骨髓间充质干细胞冻存液，其特征在于，所述的人参提取物通过如下方法制备得到：将人参加入到体积分数为50％～70％的乙醇水溶液中提取，得提取物；再将所述的提取物浓缩、干燥后即得所述的人参提取物；所述人参与乙醇水溶液的用量比为1g：5～10mL；所述的芦荟提取物通过如下方法制备得到：将芦荟加入到水中提取，得提取物；再将所述的提取物浓缩、干燥后即得所述的芦荟提取物；所述芦荟与水的用量比为1g：10～15mL。5.根据权利要求1所述的骨髓间充质干细胞冻存液，其特征在于，所述的人参提取物通过如下方法制备得到：将人参加入到体积分数为60％的乙醇水溶液中提取，得提取物；再将所述的提取物浓缩、干燥后即得所述的人参提取物；所述人参与乙醇水溶液的用量比为...

【专利技术属性】
技术研发人员：金京姬，
申请(专利权)人：上海熙承生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31