检测或抑制细胞外游离MG53的方法和用途技术

本申请涉及一种用于检测MG53相关疾病或预测MG53相关疾病的风险的方法，该方法包括以下步骤：a.获得待测样品；和b.检测在所述待测样品中的细胞外游离MG53。本申请还涉及一种用于降低或抑制客体中细胞外游离MG53活性的方法，该方法包括向需要其的客体施用有效量的MG53抑制剂。此外，本申请还涉及一种MG53抗体或其抗原结合片段，编码该等抗体或其抗原结合片段的核酸，包括该等核酸的克隆或表达载体，包括该等克隆或表达载体的宿主细胞，以及包括上述各产品的药物组合物。再者，本申请还涉及一种用于检测细胞外游离MG53的检测试剂及其用途以及MG53抑制剂在制备用于降低或抑制客体中细胞外游离MG53的药物中的用途。

【技术实现步骤摘要】
检测或抑制细胞外游离MG53的方法和用途
本申请涉及生物医药领域，具体地，本申请涉及一种用于检测细胞外游离MG53、或者检测相关疾病或预测MG53相关疾病的风险的方法和一种用于降低或抑制客体中细胞外游离MG53活性的方法，以及用于所述方法的组合物。
技术介绍
Mitsugumin53(MG53)又称为TRIM72，是三结构域蛋白(Tripartitemotif-containingProteins，TRIM)家族中的一员。MG53由N端的TRIM结构域和C端的SPRY结构域组成，TRIM结构域由依次相连的Ring、B-box、coiled-coil结构域组成(参见ChuanxiCaietal.，theJournalofBiologicalChemistry，Vol.284(5)，3314-3322(2009))。MG53主要表达在横纹肌中，对于骨骼肌和心脏甚至整个机体的稳态维持发挥着重要作用。之前发现，MG53具有细胞修复功能和心脏保护功能(参见，例如，ChuanxiCaietal.，NatureCellBiology，Vol.11，56-64(2009)；CN101797375B)。另外，进一步的研究发现，在缺血预适应(ischemicpreconditioning，IPC)和缺血后适应(ischemicpostconditioning，PostC)中，MG53也是起保护作用的重要分子之一，MG53分子的两端可以分别与Caveolin-3以及p85-PI3K激酶相互结合形成复合物，并激活下游的再灌损伤保护激酶(reperfusioninjurysalvagekinase，RISK)途径，从而实现心肌细胞和心脏的保护作用(参见，Chun-MeiCaoetal.，Circulation121，2565-2574，(2010))。之前对MG53的研究还发现，MG53具有E3泛素连接酶活性，参与调控胰岛素抵抗和代谢综合征的发生发展。例如，在两篇文献中报道了MG53N端的TRIM结构域中的Ring结构域具有E3泛素连接酶活性，可以与胰岛素受体(insulinreceptor，IR)及胰岛素受体底物(insulinreceptorsubstrate-1，IRS1)结合，并介导它们的泛素化修饰和蛋白酶体途径的降解，进而阻遏胰岛素信号通路，导致以胰岛素抵抗为发病核心环节的肥胖、糖尿病、高血压、血脂异常等代谢类疾病的发生发展(参见，例如，R.Songetal.，Nature494，375-379，(2013)；J.S.Yietal.，Naturecommunications4，2354(2013))。但是，现有技术中普遍认为MG53仅在细胞内发挥与调控胰岛素抵抗和代谢综合征的发生发展相关的活性。专利技术概述本申请涉及一种用于检测MG53相关疾病或预测MG53相关疾病的风险的方法以及一种用于降低或抑制客体中细胞外游离MG53活性的方法。此外，本申请还涉及一种MG53抗体或其抗原结合片段，编码该等抗体或其抗原结合片段的核酸，包括该等核酸的克隆或表达载体，包括该等克隆或表达载体的宿主细胞，以及包括上述各产品的药物组合物。而且，本申请还涉及一种用于检测细胞外游离MG53的检测试剂在制备试剂盒中的用途以及MG53抑制剂在制备用于降低或抑制客体中细胞外游离MG53的药物中的用途。一方面，本申请涉及一种用于检测MG53相关疾病或预测MG53相关疾病的风险的方法，包括以下步骤：a.获得待测样品；和b.检测在所述待测样品中的细胞外游离MG53。在某些实施方式中，所述待测样品是体液。在某些实施方式中，所述待测样品选自全血、血浆、血清、组织液、尿液或者汗液。在某些实施方式中，所述待测样品选自全血、血浆或血清。在某些实施方式中，所述待测样品基本上不含细胞。在某些实施方式中，所述步骤b包括将MG53检测试剂与所述待测样品接触。在某些实施方式中，所述MG53检测试剂是MG53抗体或其抗原结合片段、MG53配体或其MG53结合片段。在某些实施方式中，所述MG53检测试剂是可以与MG53结合的小分子化合物。在某些实施方式中，所述MG53检测试剂具有可检测标记。在某些实施方式中，所述可检测标记具有发光性、磁性、放射性或酶活性。在某些实施方式中，所述步骤b包括进行放射免疫测定、Western印迹分析、邻位连接技术、免疫荧光测定法、酶免疫测定法、免疫沉淀测定法、化学发光法、免疫组织化学测定法、斑点印迹测定或狭缝印迹检测法。在某些实施方式中，本申请所述的方法进一步包括：c.将步骤b中获得的MG53的检测数值与对照数值进行比较。在某些实施方式中，所述对照数值来自于对照样品。在某些实施方式中，所述对照样品与待测样品来自于相同或不同的客体。在某些实施方式中，所述对照样品与待测样品来自于相同的客体，但是对照样品的采集时间早于或晚于待测样品一段时间。在某些实施方式中，所述一段时间中所述客体接受了治疗或健康状态发生了变化。在某些实施方式中，所述对照数值是从健康客体或患有MG53相关疾病的客体中获得的。在某些实施方式中，所述客体是人或非人哺乳动物。在某些实施方式中，所述MG53相关疾病是代谢综合征。在某些实施方式中，所述MG53相关疾病是糖代谢或脂质代谢相关疾病。在某些实施方式中，所述糖代谢或脂质代谢相关疾病选自胰岛素抵抗症、糖尿病脑血管疾病、糖尿病眼部并发症、糖尿病神经病变、糖尿病足、高胰岛素血症、高胆固醇血症、高血糖、高血脂、高血压和肥胖组成的组。另一方面，本申请涉及一种用于降低或抑制客体中细胞外游离MG53活性的方法，其包括向需要其的客体施用有效量的MG53抑制剂。在某些实施方式中，所述MG53抑制剂与MG53特异性结合。在某些实施方式中，所述MG53抑制剂是MG53抗体或其抗原结合片段、MG53配体或其MG53结合片段、或者MG53的无功能蛋白片段。在某些实施方式中，所述MG53抗体或其抗原结合片段包括三个重链互补决定区，所述三个重链互补决定区包含在SEQIDNO：1、9、17、25或33所示的序列中。在某些实施方式中，所述MG53抗体或其抗原结合片段进一步包括三个轻链互补决定区，所述三个轻链互补决定区包含在SEQIDNO：2、10、18、26或34所示的序列中。在某些实施方式中，所述MG53抗体或其抗原结合片段包括重链，所述重链包括如下序列或者与其具有至少80％、85％、90％、95％或99％序列同源性的序列：SEQIDNO：1、3、9、11、17、19、25、27、33或35所示的序列。在某些实施方式中，所述MG53抗体或其抗原结合片段包括轻链，所述轻链包括如下序列或者与其具有至少80％、85％、90％、95％或99％序列同源性的序列：SEQIDNO：2、4、10、12、18、20、26、28、34或36所示的序列。在某些实施方式中，所述MG53抑制剂是小分子化合物。在某些实施方式中，所述MG53抑制剂是具有式Ia或Ib的化合物或其药学上可接受的盐，其中，L为化学键、或任选取代的C1-C12亚烷基；M为化学键、或任选取代的C6-C12芳香亚基或5-12元杂环亚基；X为化学键、或任选取代的-CH＝N-NH-C(O)-、-CH2-O-、-O-CH2本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测MG53相关疾病或预测MG53相关疾病的风险的方法，包括以下步骤：a.获得待测样品；和b.检测在所述待测样品中的细胞外游离MG53。

【技术特征摘要】
2017.11.02 CN 2017110631047;2018.10.11 CN PCT/CN201.一种用于检测MG53相关疾病或预测MG53相关疾病的风险的方法，包括以下步骤：a.获得待测样品；和b.检测在所述待测样品中的细胞外游离MG53。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述待测样品选自全血、血浆、血清和组织液。3.根据权利要求1所述的方法，其中所述待测样品中基本上不含细胞。4.根据权利要求1所述的方法，其中所述步骤b包括将MG53检测试剂与所述待测样品接触。5.根据权利要求4所述的方法，其中所述MG53检测试剂是MG53抗体或其抗原结合片段、MG53配体或其MG53结合片段。6.根据权利要求4所述的方法，其中所述MG53检测试剂是可以与MG53结合的小分子化合物。7.根据权利要求4所述的方法，其中所述MG53检测试剂具有可检测标记。8.根据权利要求7所述的方法，其中所述可检测标记具有发光性、磁性、放射性或酶活性。9.根据权利要求1所述的方法，其中所述步骤b包括进行放射免疫测定、Western印迹分析、邻位连接技术、免疫荧光测定法、酶免疫测定法、免疫沉淀测定法、化学发光法、免疫组织化学测定法、斑点印迹测定或狭缝印迹检测法。10.根据权利要求1所述的方法，其进一步包括：c.将步骤b中获得的MG53的检测数值与对照数值进行比较。11.根据权利要求10所述的方法，其中所述对照数值来自对照样品。12.根据权利要求11所述的方法，其中所述对照样品与待测样品来自于相同或不同的客体。13.根据权利要求11所述的方法，其中所述对照样品与待测样品来自于相同的客体，但是对照样品的采集时间早于或晚于待测样品一段时间。14.根据权利要求13所述的方法，其中在所述一段时间中所述客体接受了治疗或健康状态发生了变化。15.根据权利要求10所述的方法，其中所述对照数值是从健康客体或患有MG53相关疾病的客体中获得的。16.根据权利要求12-15任一项所述的方法，其中所述客体是人或非人哺乳动物。17.根据权利要求1所述的方法，其中所述MG53相关疾病是代谢综合征。18.根据权利要求1所述的方法，其中所述MG53相关疾病是糖代谢或脂质代谢相关疾病。19.根据权利要求18所述的方法，其中所述糖代谢或脂质代谢相关疾病选自胰岛素抵抗症、糖尿病脑血管疾病、糖尿病眼部并发症、糖尿病神经病变、糖尿病足、高胰岛素血症、高胆固醇血症、高血糖、高血脂、高血压和肥胖组成的组。20.一种用于降低或抑制客体中细胞外游离MG53活性的方法，包括向需要其的客体施用有效量的MG53抑制剂。21.根据权利要求20所述的方法，其中所述MG53抑制剂与MG53特异性结合。22.根据权利要求20所述的方法，其中所述MG53抑制剂是MG53抗体或其抗原结合片段、MG53配体或其MG53结合片段、或者MG53的无功能蛋白片段。23.根据权利要求22所述的方法，其中所述MG53抗体或其抗原结合片段包括重链，所述重链包括如下序列或者与其具有至少80％、85％、90％、95％或99％序列同源性的序列：SEQIDNO：1、3、9、11、17、19、25、27、33或35所示的序列。24.根据权利要求22所述的方法，其中所述MG53抗体或其抗原结合片段包括轻链，所述轻链包括如下序列或者与其具有至少80％、85％、90％、95％或99％序列同源性的序列：SEQIDNO：2、4、10、12、18、20、26、28、34或36所示的序列。25.根据权利要求20所述的方法，其中所述MG53抑制剂是小分子化合物。26.根据权利要求20所述的方法，其中所述MG53抑制剂是具有式Ia或Ib的化合物或其药学上可接受的盐，其中，L为化学键、或任选取代的C1-C12亚烷基；M为化学键、或任选取代的C6-C12芳香亚基或5-12元杂环亚基；X为化学键、或任选取代的-CH＝N-NH-C(O)-、-CH2-O-、-O-CH2-C(O)-NH-、-O-C(O)-或-O-C(O)-CH＝CH-；Y为任选取代的C6-C12芳基或5-12元杂环基；Q为任选取代的C1-C12亚烷基或C2-C12亚烯基；T为任选取代的C6-C12芳基或5-12元杂环基；R1各自独立地为氢、硝基、卤素、羟基、氰基、或任选取代的C1-C12烷基或C1-C12烷氧基；n为1-5的任意正整数。27.根据权利要求26所述的方法，其中所述L为化学键或C1-C3亚烷基。28.根据权利要求26所述的方法，其中所述M为化学键、或任选取代的苯亚基或呋喃亚基。29.根据权利要求26所述的方法，其中所述Y为任选取代的苯基、呋喃基、喹啉基或苯并二恶茂基。30.根据权利要求26所述的方法，其中所述Q为任选取代的C1-C3亚烷基或C2-C3亚烯基。31.根据权利要求26所述的方法，其中所述T为任选取代的苯基或1,3,4-噻二唑基。32.根据权利要求20所述的方法，其中所述MG53抑制剂是具有式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中，A为氢...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖瑞平，张岩，吕凤祥，胡新立，
申请(专利权)人：北京大学，
类型：发明
国别省市：北京,11