一种SPE法提取循环肿瘤DNA的方法技术

本发明专利技术提供一种SPE法提取循环肿瘤DNA的方法，属生物技术领域。本发明专利技术具体步骤如下：1)将循环肿瘤DNA富集材料装入移液枪枪头或者凝胶上样吸头中，形成微固相萃取柱，采用洗脱液和上样液活化及平衡微固相萃取柱，将生物样品溶解于上样液中，并上到微固相萃取柱上，循环肿瘤DNA富集材料与生物样品的质量比为100～1000:1；2)采用5‑200倍柱体积的淋洗液冲洗萃取柱，淋洗液pH 0‑7；3)采用5‑100倍柱体积的洗脱液洗脱得循环肿瘤DNA，洗脱液pH 10‑12；所述DNA富集材料为金属内核/碳壳层结构的纳米颗粒材料。所述DNA富集材料为金属内核/碳壳层结构的纳米颗粒。本发明专利技术的方法在提取循环肿瘤DNA方面表现出了高选择性和高通量等特点，可以实现循环肿瘤DNA的有效分离和富集。

【技术实现步骤摘要】
一种SPE法提取循环肿瘤DNA的方法
本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种SPE法提取循环肿瘤DNA的方法。
技术介绍
循环肿瘤DNA，即ctDNA(circulatingtumorDNA)，是指肿瘤细胞经过细胞凋亡或者坏死产生的DNA片段释放进入循环系统。ctDNA存在于血液、滑膜液和脑脊液等体液中。由于ctDNA半衰期为1小时左右，能准确反映肿瘤当前情况，所以ctDNA可以作为组织活检的非侵入性替代方案。另外，ctDNA在癌症早期诊断、预后和测定药物治疗反应中发挥作用。目前主流的ctDNA突变检测技术包括基于PCR扩增技术和基于DNA序列检测技术两类。但是不管哪种测序技术，都需要都对DNA进行富集和提取，以降低对扩增或者后续测序的干扰。ctDNA的主要提取方法主要是基于硅球、磁性小球的固相萃取方法和基于苯酚-氯仿的液液提取方法。主要问题是提取效率和重新性。
技术实现思路
针对上述问题，本专利技术提供一种SPE法提取循环肿瘤DNA的方法。一种SPE法提取循环肿瘤DNA的方法，采用分散固相萃取模式，具体步骤如下：1)将循环肿瘤DNA富集材料装入移液枪枪头或者凝胶上样吸头中，形成微固相本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种SPE法提取循环肿瘤DNA的方法，其特征在于采用分散固相萃取模式，具体步骤如下：1)将循环肿瘤DNA富集材料装入移液枪枪头或者凝胶上样吸头中，形成微固相萃取柱，采用洗脱液和上样液活化及平衡微固相萃取柱，将生物样品溶解于上样液中，并上到微固相萃取柱上，循环肿瘤DNA富集材料与生物样品的质量比为100～1000:1；2)采用5‑200倍柱体积的淋洗液冲洗萃取柱，淋洗液pH 0‑7；3)采用5‑100倍柱体积的洗脱液洗脱得循环肿瘤DNA，洗脱液pH 10‑12；上述整个过程在10‑60℃进行；所述循环肿瘤DNA富集材料为金属内核/碳壳层结构的纳米颗粒材料。

【技术特征摘要】
1.一种SPE法提取循环肿瘤DNA的方法，其特征在于采用分散固相萃取模式，具体步骤如下：1)将循环肿瘤DNA富集材料装入移液枪枪头或者凝胶上样吸头中，形成微固相萃取柱，采用洗脱液和上样液活化及平衡微固相萃取柱，将生物样品溶解于上样液中，并上到微固相萃取柱上，循环肿瘤DNA富集材料与生物样品的质量比为100～1000:1；2)采用5-200倍柱体积的淋洗液冲洗萃取柱，淋洗液pH0-7；3)采用5-100倍柱体积的洗脱液洗脱得循环肿瘤DNA，洗脱液pH10-12；上述整个过程在10-60℃进行；所述循环肿瘤DNA富集材料为金属内核/碳壳层结构的纳米颗粒材料。2.根据权利要求1所述的一种SPE法提取循环肿瘤DNA的方法，其特征在于：所述金属内核/碳壳层结构的纳米颗粒材料，其内核为金属纳米颗粒，其外壳的结构式为如下所示：3.根据权利要求2所述的一种SPE法提取循环肿瘤DNA的方法，其特征在于所述金属为Ag,Ti,Fe,...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁鑫淼，李秀玲，
申请(专利权)人：中国科学院大连化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：辽宁,21