抗猪细小病毒及猪生殖与呼吸道综合征病毒的疫苗及其制造方法技术

本发明专利技术为关于一种猪细小病毒及猪生殖与呼吸道综合征病毒疫苗，其用于保护个体、优选地猪，以抵抗与猪细小病毒及猪生殖与呼吸道综合征病毒有关的疾病。本发明专利技术另外关于制造展现减小杀病毒活性的免疫原性组合物的方法以及该等免疫原性组合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗猪细小病毒及猪生殖与呼吸道综合征病毒的疫苗及其制造方法序列表本申请案含有根据37C.F.R.1.821-1.825的序列表。伴随本申请案的序列表的全部内容以引用方式并入本文中。
在第一关注项中，本专利技术系关于能够减小由猪细小病毒和/或猪生殖与呼吸道综合征病毒引起的疾病的临床体征的分离物的特异性猪细小病毒及猪生殖与呼吸道综合征病毒疫苗。在第二关注项中，本专利技术另外系关于制造免疫原性组合物的方法以及展现减小的杀病毒活性的该等免疫原性组合物。
技术介绍
猪生殖与呼吸道综合征病毒(PRRSV)系动脉病毒科(Arteriviridae)的成员且与冠状病毒科(Coronaviridae)一起属尼多病毒目(Nidovirale)。PRRSV系具有单链、正义RNA基因组的包膜病毒，该RNA基因组具有约15千碱基且包括9个开放阅读框(ORF)，亦即ORF1a、ORF1ab、ORF2a、ORF2ab及ORF3至ORF7。ORF1a及1ab编码由病毒蛋白酶nsp1、nsp2及nsp4的自裂解及反式裂解处理成病毒非结构蛋白(nsp)的较大多蛋白(Snijder及Meulenberg,1998)。ORF4编码紧靠主要糖蛋白(GP5)及两种其他次要糖蛋白(GP2a及GP3)且发现于病毒包膜中的次要糖蛋白(GP4)，其中所有该等糖蛋白皆对于感染性病毒的制造较为重要。PRRSV可视为猪中引起经产母猪晚期生殖障碍及成长猪呼吸疾病的经济上最重要传染原之一。通常，PRRSV感染并发有归因于病毒的免疫阻抑性质的二级细菌感染。另外，PRRSV病毒血症会持续数周，且病毒然后仍可在数月内于淋巴样器官中检测到，从而证实宿主免疫反应难以或不能清除病毒(Allende等人，2000)。存在两种引起类似临床症状的关于核苷酸序列浓度相差约40％的不同病毒PRRSV基因型，亦即基因型I(EU)及基因型II(US)。北美(US)原型毒株系VR-2332，而欧洲(EU)原型毒株系莱利斯塔德病毒(Lelystadvirus)。猪细小病毒系细小病毒科(Parvoviridae)内原细小病毒(Protoparvovirus)属的细小病毒亚科(Parvovirinae)的自主复制病毒，其含有约5100个核苷酸的单链DNA分子(Cotmore等人，2014:ArchVirol.:159(5):1239-1247；Molitor等人，1984:Virology:137(2):241-54)。仅DNA的负链包装至病毒体中。病毒基因组编码三种衣壳蛋白(VP1、VP2、VP3)及一种非结构蛋白(NS1)。细小病毒的衣壳的直径约为22-25纳米且包括VP1及VP2亚单位。该等蛋白质系衍生自相同RNA分子的交替剪接形式且由此序列重叠。另外，猪细小病毒与猫泛白细胞减少症病毒、犬细小病毒及啮齿类动物细小病毒展现较高序列类似性程度(Ranz等人，1989:J.gen.Virol:70:2541-2553)。尽管猪细小病毒株存在差异(一些株极具病原性且其他株具有较小病原性或完全无病原性)，但在病毒在某一国家得以确立或流行时，病原性株传播于群体中。猪细小病毒(PPV)感染系全世界猪繁殖中的生殖障碍的常见病因。血清学研究展示，猪细小病毒流行于世界上所有产猪区域，且最高80％的动物展示血清转化。猪细小病毒(PPV)引起猪的生殖障碍，从而产生死亡及胎儿干尸化、死胎及怀孕经产母猪的其他生殖障碍。(Joo&Johnson.1976.VeterinaryBulletin46,653-660；Mengeling.1978.J.Am.Vet.Med.Assoc.172,1291-1294)。在易感(非免疫)后备母猪及经产母猪在怀孕期间发生感染时，PPV会诱导生殖障碍。此系病毒引起疾病的唯一时刻。猪感染发生于摄入或吸入病毒之后。PPV然后循环于血流中且在怀孕猪中穿过胎盘并感染发育中的胚胎及胎儿。在天然感染后，产生很可能在猪中持续一生的活性免疫性。若活性免疫性产生于怀孕之前，则发育中仔猪不受影响。在出生时，仔猪自经产母猪接受初乳中的母体免疫性且此母体免疫性持续至最多20周龄。经产母猪中的活性免疫性程度愈大，则其传递至其仔猪的母体免疫性愈大。此后，可发生天然PPV感染。猪中由PPV引起的疾病通常称为SMEDI(死胎、干尸化、胚胎死亡及不育(stillbirth,mummification,embryonicdeath,andinfertility)的首字母缩写)。若感染发生于怀孕第0-30天，可发生胚胎死亡，从而降低窝仔数。在怀孕30-70天时感染后的最明显特征系产生干尸化仔猪。干尸化系在骨骼开始固结之后死于子宫中的仔猪的组织的无菌消解过程。PPV感染亦与死胎及先天虚弱猪(若感染发生于怀孕晚期)有关。流产亦可为PPV感染的结果，但其并非此疾病的常见临床体征。总而言的，PPV感染降低了每年每头经产母猪所生育的猪数。当前可用的PPV疫苗系由在猪起源原代细胞中或在所确立细胞系中生长天然病毒所制造。然后，分离感染性病毒且使用化学药剂使其灭活以最终产生全细胞死病毒疫苗(wholecellkilledvirusvaccine)。然而，生长天然感染性病毒的该等方法对于生物安全及安全性考虑而言成问题。基于重组蛋白的亚单位疫苗可具有较差免疫原性，此乃因靶蛋白发生不正确折叠或至免疫系统的呈递较差。另外，全细胞死疫苗呈现天然病毒的所有抗原，而在亚单位疫苗中则限于特异性氨基酸序列。重组PPV疫苗已阐述于先前技术中。然而，迄今为止，仅全细胞死疫苗市面有售。因此，似乎迄今为止尚未研发展示为有效及安全的适当重组PPV亚单位疫苗。迄今为止所阐述的重组PPV亚单位疫苗尚未在受控实验室攻击实验中进行测试。已评估的重组PPV亚单位疫苗的效果仍比不上全细胞死PPV疫苗，或重组PPV亚单位疫苗尚不安全(展示不良反应)。已鉴别出在基因上及抗原性上不同于疫苗毒株的PPV野外分离物。PPV基因型2病毒PPV-27a在实验感染之后的怀孕后备母猪中具有高度毒性，如由感染PPV-27a的经产母猪中胎儿的死亡率(85％)高于感染其他PPV株(例如PPV-NADL-2)的经产母猪所证实。然而，抵抗PPV的当前可用商业疫苗系基于在约30年以前分离的PPV基因型1毒株的灭活全病毒制剂(Jozwik等人，2009；JournalofGeneralVirology；90；2437-2441)。其他先前技术如下：AdriaanF.G.Antonis.“Anovelrecombinantvirus-likeparticlevaccineforpreventionofporcineparvovirus-inducedreproductivefailure”Vaccine24(2006)5481-5490。ChenY.GuoW.“AnovelrecombinantpseudorabiesvirusexpressingparvovirusVP2gene:Immunogenicityandprotectiveefficacyinswine”VirologyJournal2011,8:307。Merenga等人，“Largescaleproductionanddowns本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种免疫原性组合物或组合疫苗或组合，其包括a)至少一种猪细小病毒(PPV)抗原，其中该至少一种PPV抗原为任何含于PPV中的抗原，及b)至少一种猪生殖与呼吸道综合征(PRRS)病毒抗原，其中该至少一种PRRS病毒抗原为任何含于PRRS病毒中的抗原。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.11.03 EP 16197089.21.一种免疫原性组合物或组合疫苗或组合，其包括a)至少一种猪细小病毒(PPV)抗原，其中该至少一种PPV抗原为任何含于PPV中的抗原，及b)至少一种猪生殖与呼吸道综合征(PRRS)病毒抗原，其中该至少一种PRRS病毒抗原为任何含于PRRS病毒中的抗原。2.如权利要求1的免疫原性组合物或组合疫苗或组合，其中该PPV为选自由以下组成的群：活减毒/经修饰活PPV病毒、杀死/灭活PPV病毒、杀死/灭活PPV株014、猪细小病毒PPV-27a及PPV-143a的德国野外分离物及猪细小病毒疫苗病毒PPV-NADL-2及PPV-IDT(MSV)。3.如权利要求1或2的免疫原性组合物或组合疫苗或组合，其中该至少一种PPV抗原为一或多种PPV亚单位。4.如权利要求3的免疫原性组合物或组合疫苗或组合，其中该至少一种PPV亚单位为PPV病毒蛋白2(VP2)，其中优选地该PPVVP2为唯一PPV抗原。5.如权利要求4的免疫原性组合物或组合疫苗或组合，其中该PPVVP2-在氨基酸位置228具有谷氨酸残基或谷氨酸盐残基，和/或-在氨基酸位置414具有丝氨酸残基，和/或-在氨基酸位置419具有谷氨酰胺残基，和/或-在氨基酸位置436具有苏氨酸残基，其中所述氨基酸位置的编号参照野生型PPVVP2的氨基酸序列。6.如权利要求5的免疫原性组合物或组合疫苗或组合，其中该PPVVP2另外-在氨基酸位置25具有异亮氨酸残基，和/或-在氨基酸位置36具有丝氨酸残基，和/或-在氨基酸位置37具有异亮氨酸残基。7.如权利要求5或6的免疫原性组合物或组合疫苗或组合，其中所述氨基酸位置的编号参照如SEQIDNO:1中所示的氨基酸序列。8.如权利要求4至7中任一项的免疫原性组合物或组合疫苗或组合，其中该PPVVP2包括与SEQIDNO:1、SEQIDNO:2和/或SEQIDNO:5至16的氨基酸序列具有至少90％序列相同性的氨基酸序列或由其组成。9.如权利要求1至8中任一项的免疫原性组合物或组合疫苗或组合，其中该PRRS病毒为选自由以下组成的群：PRRS病毒基因型1，PRRS病毒基因型2，包括由与SEQIDNO:17的核酸序列(莱利斯塔德(Lelystad)野生型序列)具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、至少99.7％、至少99.8％、至少99.9％或100％相同性的核苷酸序列编码的基因组的PRRS病毒基因型1，包括由与SEQIDNO:18的核酸序列(VR2332野生型序列)具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、至少99.7％、至少99.8％、至少99.9％或100％相同性的核苷酸序列编码的基因组的PRRS病毒基因型2。10.如权利要求9的免疫原性组合物或组合疫苗或组合，其中该PRRS病毒为选自由以下组成的群：活减毒/经修饰活PRRS病毒、活减毒/经修饰活PRRS病毒类型1基因型(例如PorcilisPRRS、UnistrainPRRS、AmervacPRRS)、活减毒/经修饰活PRRS病毒类型2基因型(例如PRRSMLV、FosteraPRRS)、活减毒/经修饰活PRRS病毒株94881[(基因型1)、PRRSEU]、杀死/灭活PRRS病毒、杀死/灭活PRRS病毒类型1基因型(例如Progressis)、杀死/灭活PRRS病毒类型2基因型、莱利斯塔德病毒株(CDI-NL-2.91，InstitutPasteur,Paris,France，保藏号I-1102)、PRRS病毒亚单位；或其他株，例如以登录号ECACC04102703、ECACC04102702、ECACC04102704、CNCM登录号I-1140、CNCM登录号I-1387、CNCM登录号I-1388、ATCCVR2332、VR2385、VR2386、VR2429、VR2474及VR2402、CNCMI-1102、CNCMI-1140、CNCMI-1387、CNCMI-1388或ECACCV93070108、北美PRRS病毒pT7P129A(ATCC登录号203488)、ATCC登录号VR-2332、ATCC登录号VR-2368、ATCCVR-2495、ATCCVR2385、ATCCVR2386、ATCCVR2429、ATCCVR2474及ATCCVR2402保藏的那些。11.如权利要求1至10中任一项的免疫原性组合物或组合疫苗或组合，其中该至少一种PPV抗原为一或多种PPV亚单位，优选地其中该至少一种PPV抗原为PPV病毒蛋白2(VP2)，其中更优选地该PPVVP2为唯一PPV抗原，且其中该至少一种PRRS病毒抗原为活减毒/经修饰活PRRS病毒、优选地活减毒/经修饰活PRRS病毒类型1基因型(例如PorcilisPRRS、UnistrainPRRS、AmervacPRRS)、更优选地活减毒/经修饰活PRRS病毒株94881[(基因型1)、PRRSEU]及活减毒/经修饰活PRRS病毒类型2基因型(例如PRRSMLV、FosteraPRRS)。12.如权利要求1至11中任一项的免疫原性组合物或组合疫苗或组合，其中该免疫原性组合物或组合疫苗或组合经调配用于单一剂量施用或两剂量施用。13.如权利要求1至12中任一项的免疫原性组合物或组合疫苗或组合，其中该免疫原性组合物或组合疫苗或组合进一步包括至少一种医药上可接受的载剂、优选地卡波姆(carbomer)。14.如权利要求4至13中任一项的免疫原性组合物或组合疫苗或组合，其中该免疫原性组合物或组合疫苗或组合包括0.1μg至50μg的PPVVP2抗原、优选地0.5μg至10μg的PPVVP2抗原、更优选地1.0μg至10μg的PPVVP2抗原和/或3.9至7.0log10TCID50的PRRS病毒。15.如权利要求1至14中任一项的免疫原性组合物或组合疫苗或组合，其中该至少一种猪细小病毒(PPV)抗原及该至少一种猪生殖与呼吸道综合征(PRRS)病毒抗原一起含于单一容器中或在空间上彼此分开，优选地含于两个或更多个单独容器中。16.一种试剂盒，其包括如权利要求1至15中任一项的免疫原性组合物或组合疫苗或组合。17.如权利要求16的试剂盒，其中该至少一种猪细小病毒(PPV)抗原及该至少一种猪生殖与呼吸道综合征(PRRS)病毒抗原彼此分开地含于两个或更多个单独容器中，优选地二者彼此独立地呈冻干或冷冻形式，且其中该试剂盒进一步包括用于混合在空间上分开的至少一种PPV抗原及至少一种PRRS病毒抗原的说明书手册，其中优选地该说明书手册含有组合含有该至少一种PPV抗原的容器的内容物与含有该至少一种PPRS病毒抗原的容器的内容物的指导，其中更优选地使用含有该至少一种PPV抗原的容器的液体内容物作为含有该至少一种PPRS病毒抗原的容器的冻干内容物的稀释剂。18.如权利要求16或17的试剂盒，其中该试剂盒进一步包括治疗和/或预防猪疾病的指导和/或进一步包括治疗和/或预防PPV感染和/或PRRS病毒感染的指导，优选地该试剂盒进一步包括联合使用如本文所揭示及要求保护且含于该试剂盒中的免疫原性组合物或组合疫苗或组合的PPV组分(优选地以分开的试剂盒组分形式)及PRRSV组分(优选地以分开的试剂盒组分形式)的指导。19.一种如权利要求1至15中任一项的免疫原性组合物或组合疫苗或组合或如权利要求16至18中任一项的试剂盒的用途，其用于制备药剂、优选地疫苗。20.如权利要求19的用途，其用以制备用于以下的药剂：治疗和/或预防PPV和/或PRRS病毒感染，减少、预...

【专利技术属性】
技术研发人员：S·克洛克，R·T·库尔，C·R·爱德华兹，F·T·哈达丁，G·B·海威克，T·J·凯泽，J·克罗尔，S·R·C·马尔伯格，M·诺格拉塞拉特，M·L·舍费尔，A·J·H·斯塔克斯，M·L·斯图尔特，E·M·沃恩，G·赵，
申请(专利权)人：勃林格殷格翰动物保健有限公司，
类型：发明
国别省市：德国,DE