一种基于荧光金纳米簇的免标记荧光酶联免疫分析方法技术

本发明专利技术公开了一种基于荧光金纳米簇的免标记荧光酶联免疫分析方法。所述分析方法以蛋白包裹的荧光金纳米簇作为荧光信号探针，是酶标抗原上的葡萄糖氧化酶催化底物葡萄糖产生过氧化氢使体系中荧光金纳米簇的荧光猝灭，利用目标物和酶标抗原竞争结合在微孔板上的抗体，从而使体系的荧光发射光谱发生变化，可用于灵敏定量检测目标物分子。本发明专利技术所采用的荧光金纳米簇对葡萄糖氧化酶响应灵敏，同时免标记技术使荧光金纳米簇在本体系应用中的可控性、稳定性得到大大提高。本方法所构建的体系具有操作简便、灵敏度高、稳定性好、成本低廉等优点，可应用于灵敏定量检测动物饲料中的喹乙醇残留。

A label-free fluorescent enzyme-linked immunoassay method based on fluorescent gold nanoclusters

The invention discloses a label-free fluorescent enzyme-linked immunoassay method based on fluorescent gold nanoclusters. The analysis method uses protein-coated fluorescent gold nanoclusters as fluorescence signal probes, which are hydrogen peroxide catalyzed by glucose oxidase on enzyme-labeled antigen to quench fluorescence of fluorescent gold nanoclusters in the system, and competitive binding of antibodies on the microporous plate by target and enzyme-labeled antigen to change fluorescence emission spectra of the system, which can be used for sensitive quantitative analysis. Detection of target molecule. The fluorescent gold nanoclusters used in the invention are sensitive to the response of glucose oxidase, and the label-free technology greatly improves the controllability and stability of the fluorescent gold nanoclusters in the application of the system. The system constructed by this method has the advantages of simple operation, high sensitivity, good stability and low cost. It can be used for the sensitive quantitative detection of olaquindox residues in animal feed.

【技术实现步骤摘要】
一种基于荧光金纳米簇的免标记荧光酶联免疫分析方法
本专利技术涉及一种基于荧光金纳米簇的免标记荧光酶联免疫分析方法，属于纳米生物传感以及食品安全兽药检测领域。
技术介绍
荧光金纳米簇是以金属为核、有机配体为壳的粒径为0.2～3nm的核壳型结构，由于其粒径接近于电子的费米波长，性质介于单原子和较大的纳米粒子之间，呈现良好的光学性质，如发光性能好、光稳定性高、斯托克斯位移大、荧光量子产率高等，合成方法简便且绿色无污染。荧光金纳米簇作为一种新型的荧光纳米材料成为研究热点，而且已被广泛应用于催化、生物医药、生物检测等领域。但是在免疫分析检测中，因为其粒径小，和生物识别材料偶联后不易纯化，所以很难将其作为荧光标记物用于免疫分析检测中。根据文献报道，葡萄糖氧化酶是一种稳定性高、催化效率好、成本低廉的常用酶，它可以催化葡萄糖产生过氧化氢，再加入亚铁离子后发生芬顿反应产生大量羟基自由基，可以有效地猝灭荧光金纳米簇的荧光。喹乙醇属于喹噁啉类化合物，因为它具有提高饲料转化效率、加速动物生长和防止动物细菌疾病等功能，常以饲料添加或口服形式被用于动物养殖业中。喹乙醇在动物体内以原形或代谢物形式残留或经粪尿、饲本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于荧光金纳米簇的免标记荧光酶联免疫分析方法，包括如下步骤：(1)向培养板中加入包被原进行包被，再加入目标物分子的单克隆抗体进行反应，然后加入封闭液进行封闭处理；(2)分别向所述培养板中加入葡萄糖氧化酶‑目标物分子复合物和所述目标物分子的标准溶液进行反应；(3)向所述培养板中加入葡萄糖溶液进行反应；(4)向所述培养板中加入荧光金纳米簇和硫酸亚铁溶液进行反应；(5)测定所述培养板中的混合液在365nm激发波长下，650nm波长处的荧光强度变化；根据所述目标物分子的标准溶液的浓度与其荧光强度的变化值，制作标准曲线；(6)分别向所述培养板中加入所述葡萄糖氧化酶‑目标物分子复合物和待测样品的提...

【技术特征摘要】
1.一种基于荧光金纳米簇的免标记荧光酶联免疫分析方法，包括如下步骤：(1)向培养板中加入包被原进行包被，再加入目标物分子的单克隆抗体进行反应，然后加入封闭液进行封闭处理；(2)分别向所述培养板中加入葡萄糖氧化酶-目标物分子复合物和所述目标物分子的标准溶液进行反应；(3)向所述培养板中加入葡萄糖溶液进行反应；(4)向所述培养板中加入荧光金纳米簇和硫酸亚铁溶液进行反应；(5)测定所述培养板中的混合液在365nm激发波长下，650nm波长处的荧光强度变化；根据所述目标物分子的标准溶液的浓度与其荧光强度的变化值，制作标准曲线；(6)分别向所述培养板中加入所述葡萄糖氧化酶-目标物分子复合物和待测样品的提取液进行反应；重复步骤(3)-(5)，得到在365nm激发波长下，650nm波长处的荧光强度变化值，再根据所述标准曲线，即得到所述待测样品的提取液中所述目标物分子的浓度。2.根据权利要求1所述的免标记荧光酶联免疫分析方法，其特征在于：所述目标物分子为喹噁啉类药物；所述待测样品为饲料或肉制品。3.根据权利要求2所述的免标记荧光酶联免疫分析方法，其特征在于：所述喹噁啉类药物为喹乙醇。4.根据权利要求3所述的免标记荧光酶联免疫分析方法，其特征在于：所述葡萄糖氧化酶-目标物分子复合物为葡萄糖氧化酶-喹乙醇复合物，按照如下方法制备：所述喹乙醇和琥珀酸酐进行反应，向所述反应...

【专利技术属性】
技术研发人员：江海洋，彭涛，沈建忠，王战辉，温凯，王见一，史为民，李建成，孙淑娟，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：北京,11