The invention provides a CPGK chimeric promoter, an adeno-associated virus vector and its application. The CPGK chimeric promoter includes a CMV enhancer and a mouse-derived mPGK promoter, and the CMV enhancer is connected with a mouse-derived mPGK promoter. According to the technical scheme of the invention, the CPGK chimeric promoter is applied to rAAV vector and transfected cells. The sequence of the CPGK chimeric promoter is stable in both prokaryotic and eukaryotic cells, and the transcription efficiency of the exogenous gene is significantly higher than that of the AAV vector carrying mPGK promoter.
【技术实现步骤摘要】
一种CPGK嵌合型启动子、腺相关病毒载体及其应用
本专利技术属于分子生物学领域，涉及一种CPGK嵌合型启动子、腺相关病毒载体及其应用。
技术介绍
腺相关病毒(Adeno-associatedvirus，简称AAV)因发现于腺病毒制品而得名。AAV是属于微小病毒科的一种依赖性病毒，包含多种血清型，基因组为单链DNA，需要其它病毒或辅助因素才能复制。在没有辅助因素时，AAV感染细胞后其基因组将整合到细胞染色体中以潜伏状态存在，而不产生子病毒。随着对AAV病毒生活周期和相关分子生物学机制的了解，AAV病毒被改造成了一种高效的外源基因转移工具，即AAV载体。AAV载体具有安全程度高，无致病性；免疫原性低，基本不会引起机体免疫排斥和炎症反应，能保持持久的体内留存能力和表达能力；表达时程长，至少可以持续半年；靶向性强，可针对特异性器官工作的特点。由于上述特点，AAV载体逐渐成为了一种广泛应用于基因治疗，特别是遗传病的基因治疗的外源基因转运工具，在2012年，欧洲药监局就已经批准基于AAV载体的脂蛋白酶基因治疗药物Glybera上市。启动子是位于基因5’端的多聚脱氧核糖核苷酸序...
【技术保护点】
1.一种CPGK嵌合型启动子，其特征在于：其包括CMV增强子与鼠源mPGK启动子，所述CMV增强子与鼠源mPGK启动子连接；所述CMV增强子位于鼠源mPGK启动子的上游。
【技术特征摘要】
1.一种CPGK嵌合型启动子，其特征在于：其包括CMV增强子与鼠源mPGK启动子，所述CMV增强子与鼠源mPGK启动子连接；所述CMV增强子位于鼠源mPGK启动子的上游。2.根据权利要求1所述的CPGK嵌合型启动子，其特征在于：所述CPGK嵌合型启动子的序列如SEQIDNo.3所示。3.一种包含如权利要求1~2任意一项所述的CPGK嵌合型启动子的腺相关病毒载体，其特征在于：其采用以下步骤制备得到：步骤S1，在所述CPGK嵌合型启动子的5’端设计KpnI内切酶位点，3’端设计BstXI内切酶位点；所述KpnI内切酶位点的序列如SEQIDNo.4所示，所述BstXI内切酶位点的序列如SEQIDNo.5所示；根据上述酶切位点序列设计PCR引物序列，并合成启动子引物；步骤S2，以携带mPGK启动子和CMV增强子的质粒载体为模板，加入步骤S1得到的启动子引物，高保真酶PCR克隆KpnI-CPGK-BstXI脱氧核糖核酸片段，对PCR产物进行回收，对回收产物进行KpnI-BstXI双酶切，37℃酶切过夜，回收得到KpnI-BstXI双酶切的CPGK脱氧核糖核酸片段...
【专利技术属性】
技术研发人员：吕斌，柳青慕，孙招金，
申请(专利权)人：深圳生生凡非基因技术有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44
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