一种靶向HER2的单链抗体、嵌合抗原受体T细胞及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种靶向HER2的单链抗体，所述靶向HER2的单链抗体包括如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。本发明专利技术还提供了一种包括所述靶向HER2的单链抗体的嵌合抗原受体T细胞，所述靶向HER2的嵌合抗原受体可以专一性的靶向HER2，激活T细胞发挥细胞免疫作用，高效且特异性的杀伤HER2阳性肿瘤细胞，具有持久的细胞活力和杀伤力，并且对正常细胞不会造成损伤。本发明专利技术还提供了一种靶向HER2的嵌合抗原受体T细胞的制备方法和应用。

A Single Chain Antibody and Chimeric Antigen Receptor T Cell Targeting HER2 and Its Preparation and Application

The invention provides a single-chain antibody targeting HER2, which comprises an amino acid sequence as shown in SEQ ID NO:1. The invention also provides a chimeric antigen receptor T cell including the single chain antibody targeting HER2. The chimeric antigen receptor targeting HER2 can specifically target HER2, activate T cells to play a cellular immune role, kill HER2-positive tumor cells efficiently and specifically, have lasting cell viability and killing power, and do not cause damage to normal cells. The invention also provides a preparation method and application of chimeric antigen receptor T cells targeting HER2.

【技术实现步骤摘要】
一种靶向HER2的单链抗体、嵌合抗原受体T细胞及其制备方法和应用
本专利技术涉及医学生物领域，特别涉及一种靶向HER2的单链抗体、嵌合抗原受体T细胞及其制备方法和应用。
技术介绍
全球乳腺癌发病率自20世纪70年代末开始一直呈上升趋势，乳腺癌已成为当前社会的重大公共卫生问题。在临床上，人上皮生长因子受体2(humanepidermalgrowthfactorreceptor-2，HER2)是重要的乳腺癌预后判断因子，与乳腺癌的扩散转移密切相关。HER2是人上皮生长因子受体家族的成员，HER2基因产物正常表达于分泌腺上皮细胞，当其基因拷贝异常增加，将会驱动所在细胞的恶变及扩增。据统计，乳腺癌患者中，约20～30％的患者为HER2阳性。相比HER2阴性的乳腺癌，HER2阳性的乳腺癌侵袭性强，复发、转移风险高，激素治疗和常规治疗反应差，预后不良，给患者带来沉重的打击。此外，HER2除了参与乳腺癌的发生、发展外，其还在胃癌、结肠癌、膀胱癌、肺癌、卵巢癌、宫颈癌、食管癌等多种形式的癌症中过表达。嵌合抗原受体T细胞技术(ChimericAntigenReceptor–ModifiedTCells，CAR-T)作为当前最新的免疫细胞技术之一，因其能够在体内能激活自身免疫系统，持续性地靶向肿瘤细胞进行杀伤，最终达到完全清除恶性肿瘤细胞，受到广泛的关注和研究。但是，CART技术目前的应用还局限于血液瘤，对于多种HER2阳性实体瘤的应用还未有相关研究。
技术实现思路
为解决上述问题，本专利技术提供了一种靶向HER2的单链抗体，以及包括所述靶向HER2的单链抗体的嵌合抗原受体T细胞。所述靶向HER2的嵌合抗原受体可以专一性的靶向HER2，激活T细胞发挥细胞免疫作用，高效且特异性的杀伤HER2阳性肿瘤细胞，具有持久的细胞活力和杀伤力，并且对正常细胞不会造成损伤。本专利技术还提供了一种靶向HER2的嵌合抗原受体T细胞的制备方法和应用。第一方面，本专利技术提供了一种靶向HER2的单链抗体，所述靶向HER2的单链抗体包括如SEQIDNO：1所示的氨基酸序列。可选的，所述靶向HER2的单链抗体的编码基因包括如SEQIDNO：2所示的核苷酸序列。可选的，所述靶向HER2的单链抗体编码基因应该考虑简并碱基，即如SEQIDNO:1所示的氨基酸序列的编码基因包括如SEQIDNO:2所示的核苷酸序列，保护范围还应该保护与SEQIDNO:2具有碱基简并性质的核苷酸序列，这些核苷酸序列对应的氨基酸序列仍然为SEQIDNO:1。本专利技术第一方面提供的所述靶向HER2的单链抗体能够特异性识别HER2抗原蛋白，与HER2抗原蛋白发生特异性结合，对肿瘤细胞，特别是表达HER2的实体瘤细胞具有较强的亲和活性及内化活性。第二方面，本专利技术提供了一种靶向HER2的嵌合抗原受体T细胞，包括靶向HER2的嵌合抗原受体CAR-HER2，所述CAR-HER2包括从氨基端到羧基端顺次连接的靶向HER2的单链抗体、胞外铰链区、跨膜区和胞内信号区的氨基酸序列，其中所述靶向HER2的单链抗体包括如SEQIDNO：1所示的氨基酸序列。其中，所述“从氨基端到羧基端顺次连接”具体为：所述靶向HER2的单链抗体的氨基酸序列的羧基端与所述胞外铰链区的氨基酸序列的氨基端相连，所述胞外铰链区的氨基酸序列的羧基端与所述跨膜区的氨基酸序列的氨基端相连，所述跨膜区的氨基酸序列的羧基端与所述胞内信号区的氨基酸序列的氨基端相连。在本专利技术中所述胞外铰链区用于促进所述靶向HER2的单链抗体与肿瘤上的HER2结合。可选的，所述胞外铰链区包括CD8α铰链区、CD28铰链区、CD4铰链区、CD5铰链区、CD134铰链区、CD137铰链区、ICOS铰链区中的一种或多种的组合。进一步可选的，所述胞外铰链区为CD8α铰链区。可选的，所述CD8α铰链区的氨基酸序列包括如SEQIDNO：6所示的氨基酸序列。可选的，所述CD8α铰链区的编码基因包括如SEQIDNO：7所示的核苷酸序列。可选的，所述CD8α铰链区的编码基因应该考虑简并碱基，即如SEQIDNO:6所示的氨基酸序列的编码基因包括如SEQIDNO:7所示的核苷酸序列，保护范围还应该保护与SEQIDNO:7具有碱基简并性质的核苷酸序列，这些核苷酸序列对应的氨基酸序列仍然为SEQIDNO:6。在本专利技术中所述跨膜区用于固定所述靶向HER2的嵌合抗原受体CAR-HER2。可选的，所述跨膜区包括CD3跨膜区、CD4跨膜区、CD8跨膜区、CD28跨膜区中的一种或多种的组合。进一步可选的，所述跨膜区为CD8跨膜区。可选的，所述CD8跨膜区的氨基酸序列包括如SEQIDNO：8所示的氨基酸序列。可选的，所述CD8跨膜区的编码基因包括如SEQIDNO：9所示的核苷酸序列。可选的，所述CD8跨膜区的编码基因应该考虑简并碱基，即如SEQIDNO:8所示的氨基酸序列的编码基因包括如SEQIDNO:9所示的核苷酸序列，保护范围还应该保护与SEQIDNO:9具有碱基简并性质的核苷酸序列，这些核苷酸序列对应的氨基酸序列仍然为SEQIDNO:8。在本专利技术中所述胞内信号区用于提供T细胞活化的信号，维持T细胞的生存时间和激活T细胞增殖信号通路。可选的，所述胞内信号区包括4-1BB信号区、CD3ζ信号区、ICOS信号区、CD27信号区、OX40信号区、CD28信号区、IL1R1信号区、CD70信号区、TNFRSF19L信号区中的一种或多种的组合。可选的，所述胞内信号区为4-1BB信号区和CD3ζ信号区。可选的，所述4-1BB信号区的氨基酸序列包括如SEQIDNO：10所示的氨基酸序列。可选的，所述4-1BB信号区的编码基因包括如SEQIDNO：11所示的核苷酸序列。可选的，所述4-1BB信号区的编码基因应该考虑简并碱基，即如SEQIDNO:10所示的氨基酸序列的编码基因包括如SEQIDNO:11所示的核苷酸序列，保护范围还应该保护与SEQIDNO:11具有碱基简并性质的核苷酸序列，这些核苷酸序列对应的氨基酸序列仍然为SEQIDNO:10。可选的，所述CD3ζ信号区的氨基酸序列包括如SEQIDNO：12所示的氨基酸序列。可选的，所述CD3ζ信号区的编码基因包括如SEQIDNO：13所示的核苷酸序列。可选的，所述CD3ζ信号区的编码基因应该考虑简并碱基，即如SEQIDNO:12所示的氨基酸序列的编码基因包括如SEQIDNO:13所示的核苷酸序列，保护范围还应该保护与SEQIDNO:13具有碱基简并性质的核苷酸序列，这些核苷酸序列对应的氨基酸序列仍然为SEQIDNO:12。可选的，所述CAR-HER2的氨基酸序列包括如SEQIDNO：3所示的氨基酸序列。可选的，所述CAR-HER2的编码基因包括如SEQIDNO：4所示的核苷酸序列。可选的，所述CAR-HER2的编码基因应该考虑简并碱基，即如SEQIDNO:3所示的氨基酸序列的编码基因包括如SEQIDNO:4所示的核苷酸序列，保护范围还应该保护与SEQIDNO:4具有碱基简并性质的核苷酸序列，这些核苷酸序列对应的氨基酸序列仍然为SEQIDNO:3。本专利技术所述靶向HER2的嵌合抗原受体T细胞可以高效识别并杀伤包括胃癌、结肠癌、膀胱癌、肺癌、卵巢癌、宫颈癌、食管癌等表达有本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种靶向HER2的单链抗体，其特征在于，所述靶向HER2的单链抗体包括如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
1.一种靶向HER2的单链抗体，其特征在于，所述靶向HER2的单链抗体包括如SEQIDNO：1所示的氨基酸序列。2.如权利要求1所述的靶向HER2的单链抗体，其特征在于，所述靶向HER2的单链抗体的编码基因包括如SEQIDNO：2所示的核苷酸序列。3.一种靶向HER2的嵌合抗原受体T细胞，其特征在于，包括靶向HER2的嵌合抗原受体CAR-HER2，所述CAR-HER2包括从氨基端到羧基端顺次连接的靶向HER2的单链抗体、胞外铰链区、跨膜区和胞内信号区的氨基酸序列，其中所述靶向HER2的单链抗体包括如SEQIDNO：1所示的氨基酸序列。4.如权利要求3所述的靶向HER2的嵌合抗原受体T细胞，其特征在于，所述CAR-HER2的氨基酸序列包括如SEQIDNO：3所示的氨基酸序列。5.一种重组病毒载体，其特征在于，所述重组病毒载体包括如权利要求3或4任一项所述的靶向HER2的嵌合抗原受体T细胞的CAR-HER2的编码基因。6.如权利要求5所述的重组病毒载体，其特征在于，所述CAR-HER2的编码基因包括如SEQIDNO：4所示的核苷酸序列。7.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包括如权利要求5或6任一项所述的重组病毒载体。8.一种靶向HER2的嵌合抗原受体T细胞的制备方法，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾滢，钟春颖，
申请(专利权)人：深圳宾德生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44