HER-2结合抗体制造技术

本发明专利技术涉及特异性结合HER2的单克隆抗体，或其片段或衍生物或多肽，所述片段或衍生物或多肽含有足以赋予特异性HER2结合的、所述抗体的至少一部分。所述抗体结合人Fc受体并诱导FcR介导的信号传导途径。根据本发明专利技术的抗体结合与曲妥珠单抗不同的表位。本发明专利技术还涉及根据本发明专利技术的抗体在治疗HER‑2介导的疾病中的用途。本发明专利技术还涉及含有药学上可接受的载体和治疗有效量的根据本发明专利技术的抗体的药物组合物，以及所述组合物在治疗HER‑2介导的疾病中的用途。

HER-2 Binding Antibody

The present invention relates to a monoclonal antibody specifically binding to HER2, or a fragment or derivative or polypeptide thereof, which contains at least a portion of the antibody sufficient to bind to specific HER2. The antibody binds to human Fc receptors and induces FcR-mediated signal transduction pathways. According to the present invention, the antibody binds to different epitopes of trastuzumab. The present invention also relates to the use of the antibody according to the present invention in the treatment of HER_2-mediated diseases. The invention also relates to pharmaceutical compositions containing pharmaceutically acceptable carriers and therapeutic efficacies of the antibodies according to the present invention, and the use of the compositions in the treatment of HER_2-mediated diseases.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】HER-2结合抗体
本专利技术涉及特异性结合HER2的单克隆抗体，或者其片段或衍生物或多肽，所述片段或衍生物或多肽含有足以赋予HER2结合特异性的、所述抗体的至少一部分。本专利技术还涉及在例如癌症、自身免疫病、炎性紊乱和传染病等疾病的诊断、预后和治疗中使用所述抗体和包含其的组合物的方法。
技术介绍
受体酪氨酸蛋白激酶erbB-2，也称为CD340(分化簇340)、原癌基因Neu、Erbb2(啮齿动物)或ERBB2(人类)，是一种人类中由ERBB2基因编码的蛋白质，也经常称为HER2(来自人类表皮生长因子受体2，humanepidermalgrowthfactorreceptor2)或HER2/neu。HER2为人类表皮生长因子受体(HER/EGFR/ERBB)家族的成员。HER2，一种已知的原癌基因，位于人类第17号染色体的长臂(17q12)。已显示该原癌基因的扩增或过表达在乳腺癌的某些侵袭性类型的发展和进展中起重要作用。近年来，该蛋白质已成为大约30％乳腺癌患者的重要生物标志物和治疗靶标。ErbB家族由四种质膜结合受体酪氨酸激酶组成。其中之一为erbB-2，其它成员为表皮生长因子受体erbB-3(结合神经调节蛋白；缺乏激酶结构域)和erbB-4。所有四种都含有细胞外配体结合结构域、跨膜结构域和细胞内结构域，可以与许多信号传导分子相互作用并表现出配体依赖性和配体非依赖性两种活性。HER2可以与其它三种受体的任意者发生异二聚化(heterodimerize)并被认为是其它ErbB受体的优选二聚化配偶体(dimerisationpartner)。二聚化导致受体的细胞质结构域内酪氨酸残基的自磷酸化并起始多种信号传导途径。这些包括丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activatedproteinkinase,MAPK)途径，磷酸肌醇3-激酶(phosphoinositide3-kinase,PI3K/Akt)途径，磷脂酶Cγ-、蛋白激酶C(PKC)-和信号转导和转录激活子(Signaltransducerandactivatoroftranscription,STAT)途径。因此，通过ErbB受体家族的信号传导促进细胞增殖并对抗细胞凋亡，因此必须受到严格调节以防不受控的细胞生长发生。ERBB2基因的扩增或过表达在大约15-30％的乳腺癌中发生。其与增加的疾病复发和不良的预后密切相关。过表达还已知发生在卵巢癌、肠胃癌(stomachcancer)和侵袭形式的子宫癌例如浆液性子宫内膜癌(uterineserousendometrialcarcinoma)中。例如，HER-2在大约7-34％的胃癌患者中和在30％的涎腺导管癌中过表达。已经识别了引起该受体的配体非依赖性激发(firing)的不同结构改变，这是在没有受体过表达的情况下进行的。HER2发现于多种肿瘤中，这些肿瘤中的一些在描述HER2的跨膜结构域的序列中携带点突变。跨膜结构域中缬氨酸取代谷氨酸在没有配体的情况下可导致该蛋白的组成型二聚化。HER2突变也已发现于非小细胞肺癌(non-small-celllungcancers,NSCLC)并可指导治疗。HER2为单克隆抗体曲妥珠单抗(trastuzumab)(以赫赛汀(Herceptin)市售)的靶标。曲妥珠单抗只在HER2过表达的癌症中有效。对所有还接受化疗的患HER2-阳性乳腺癌的患者推荐一年的曲妥珠单抗疗法。曲妥珠单抗结合HER2的重要下游作用是增加p27，一种阻止细胞增殖的蛋白质。另一种抑制HER2和HER3受体的二聚化的单克隆抗体帕妥珠单抗(pertuzumab)在2012年6月由FDA批准与曲妥珠单抗联合使用。另外，NeuVax(GalenaBiopharma)为基于肽的免疫疗法，其指导"杀手"T细胞靶向并摧毁表达HER2的癌细胞。其已进入3期临床试验。HER2试验在乳腺癌患者中进行以评估预后并确定对曲妥珠单抗疗法的适用性。重要的是，曲妥珠单抗由于昂贵且与心脏毒性有关而被限定于HER2-阳性个体。对于HER2-阴性肿瘤，曲妥珠单抗的风险明显超过了益处。因此，需要开发新的、更有效的抗体，其可以在用曲妥珠单抗(和化疗)的金标疗法的结果不令人满意时用于随访疗法，或者用作与现有抗体联合的替代方案。根据本专利技术的研究的目的在于产生大量针对HER2的高亲和力抗体，从而发现与曲妥珠单抗和帕妥珠单抗等现有抗体和疗法相比具有新作用机理的新分子。
技术实现思路
本专利技术涉及特异性结合HER2的单克隆抗体，或者其片段或衍生物或多肽，所述片段或衍生物或多肽含有足以赋予HER2结合特异性的、所述抗体的至少一部分，其中所述抗体结合人Fc受体并诱导FcR介导的信号传导途径。在一些实施方案中，根据本专利技术的抗体结合与曲妥珠单抗不同的表位。本专利技术还涉及治疗患者的HER-2介导的疾病的方法，其包括向患者给予药学有效量的根据本专利技术的抗体。本专利技术还涉及药物组合物，其包含药学上可接受的载体和治疗有效量的根据本专利技术的抗体。所述药物组合物可在根据本专利技术的治疗HER-2介导的疾病的方法中给予患者。具体实施方式定义根据本专利技术的术语"兔"意为分类学兔形目的成员的动物，其包括(野兔和家兔)和鼠兔科(鼠兔)，优选穴兔属(Oryctolagus)。术语"抗体"涵盖各种形式的抗体结构，包括但不限于，完整抗体和抗体片段，只要其显示根据本专利技术的性质即可。根据本专利技术的术语"兔单克隆抗体"意为通过免疫兔并从所述兔的抗原产生细胞中分离而产生的单克隆抗体，以及进一步修饰的抗体，优选人源化抗体、嵌合抗体、其片段、或进一步遗传工程化和重组产生的抗体，只要保留根据本专利技术的特征性质即可。优选抗体来自所述兔的B细胞或兔杂交瘤细胞。根据本专利技术的术语"抗体产生细胞"意为产生抗体的兔B细胞，优选B细胞或兔杂交瘤细胞。"天然抗体"通常为由两条相同的轻(L)链和两条相同的重(H)链组成的异四聚体糖蛋白。各轻链通过一个共价二硫键连接至重链，而二硫键的数量在不同免疫球蛋白同种型的重链之间不同。各重链和轻链还具有规则间隔的链内二硫桥。各重链在一端具有可变结构域(VH)，接着是多个恒定结构域。各轻链在一端具有可变结构域(VL)，并在其另一端具有恒定结构域。轻链的恒定结构域与重链的第一恒定结构域对齐，并且轻链可变结构域与重链可变结构域对齐。认为特定的氨基酸残基在轻链和重链可变结构域之间形成界面。对于肽或多肽序列的"百分比(％)氨基酸序列同一性"定义为，在根据需要比对序列并引入空位以实现最大百分比序列同一性并且不将任何保守替换考虑为序列同一性的一部分后，候选序列中与特定肽或多肽序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分比。为了测定百分比氨基酸序列同一性的目的的比对可以以在本领域技术范围内的各种方式实现，例如，使用公众可获得的计算机软件，例如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。本文所用的术语“Fc受体”或“FcR”指的是与抗体的Fc区结合的人类受体。FcR结合IgG抗体，并且包括FcγRI、FcγRII、和FcγRIII亚类的受体，包括等位基因变体和这些受体的可选地剪接的形式。FcγRII受体包括FcγRIIA(“激活受体”)和FcγRIIB(“抑制受体”)，其本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种特异性结合HER2的单克隆抗体，或者其片段或衍生物或多肽，所述片段或衍生物或多肽含有足以赋予HER2结合特异性的、所述抗体的至少一部分，其包含：a)重链可变(VH)区，其与选自由SEQ ID NO:1至6和SEQ ID NO:100至101的VH区组成的组的VH区至少90％相同，和b)轻链可变(VH)区，其与选自由SEQ ID NO:7至12和SEQ ID NO:102至104的VL区组成的组的VL区至少90％相同。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.05.06 EP 16168619.11.一种特异性结合HER2的单克隆抗体，或者其片段或衍生物或多肽，所述片段或衍生物或多肽含有足以赋予HER2结合特异性的、所述抗体的至少一部分，其包含：a)重链可变(VH)区，其与选自由SEQIDNO:1至6和SEQIDNO:100至101的VH区组成的组的VH区至少90％相同，和b)轻链可变(VH)区，其与选自由SEQIDNO:7至12和SEQIDNO:102至104的VL区组成的组的VL区至少90％相同。2.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含与SEQIDNO:4的VH区至少90％相同的重链可变(VH)区。3.根据权利要求1和2任一项所述的抗体，其中所述抗体包含与SEQIDNO:10的VL区至少90％相同的轻链可变(VL)区。4.根据权利要求1至3任一项所述的抗体，其中所述抗体包含选自以下VH区的组的VH区：所述VH区的组包含SEQIDNO:13+n的CDR-H1区、SEQIDNO:19+n的CDR-H2区和SEQIDNO:25+n的CDR-H3区，其中n为选自由0至5组成的组的数。5.根据权利要求1至4任一项所述的抗体，其中所述抗体包含选自以下VL区的组的VL区：所述VL区的组包含SEQIDNO:31+n的CDR-L1区、SEQIDNO:37+n的CDR-L2区和SEQIDNO:43+n的CDR-L3区，其中n为选自由0至5组成的组的数。6.根据权利要求1至5任一项所述的抗体，其中所述抗体包含选自以下VH区的组的VH区：所述VH区的组包含SEQIDNO:13+n的CDR-H1区、SEQIDNO:19+n的CDR-H2区和SEQIDNO:25+n的CDR-H3区；其中所述抗体包含选自以下VL区的组的VL区：所述VL区的组包含SEQIDNO:31+n的CDR-L1区、SEQIDNO:37+n的CDR-L2区和SEQIDNO:43+n的CDR-L3区，其中n为选自由0至5组成的组的数。7.根据权利要求1至6任一项所述的抗体，其包含VH区和VL区，所述VH区和VL区包含选自由B100、C074、C031、B106、AK57、B115组成的组的抗体的各自的CDR1、CDR2和CDR3区。8.一种特异性结合HER2的单克隆抗体，或者其片段或衍生物或多肽，所述片段或衍生物或多肽含有足以赋予HER2结合特异性的、所述抗体的至少一部分，其包含：a)重链可变区(VH)，其包含CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，其中所述CDR-H1区包含根据下式的氨基酸序列：(S/N)1-(Y/S)2-(N/A/G/Y)3-(M/V/Y)4-(G/A/S/M)5-(0/-C)6其中所述CDR-H2区包含根据下式的氨基酸序列：(I/C)1-(I)2-(N/S/Y)3-(H/A/S/G)4-(G/I/S)5-(D/G/S)6-(N/T/F/D/S)7-(T/A/N/S)8-(Y/H/T/S)9-(T/Y/W)10-(F/A/Y)11-(S/A/Y)12-(W/A/S)13-(W/A/S)14-(K/A/W)15-(G/A/K)16-(O/G/K)17-(O/AG)18和其中所述CD...

【专利技术属性】
技术研发人员：S·费舍尔，M·布兰特，
申请(专利权)人：MAB发现股份有限公司，
类型：发明
国别省市：德国,DE