一种简单高效的单克隆抗体的纯化方法技术

本发明专利技术涉及一种简单高效的单克隆抗体的纯化方法，所述纯化方法包括：对含有单克隆抗体的样品进行粗提纯；对所述粗提纯的产物进行透析；利用HPLC法对所述透析的产物进行纯化，其中，所述纯化采用阴离子交换介质，以流动相A和流动相B为洗脱液，流速为1～3ml/min，利用梯度洗脱模式进行洗脱，柱温35～40℃，检测波长280nm；所述流动相A为三羟甲基氨基甲烷缓冲液，所述流动相B为三羟甲基氨基甲烷缓冲液和氯化钠的混合溶液。本发明专利技术提供的单克隆抗体的纯化方法简单易行，蛋白回收率高、重复性好，适用于批量制备单克隆抗体。

A Simple and Efficient Purification Method of Monoclonal Antibody

The present invention relates to a simple and efficient purification method of monoclonal antibodies, which includes: crude purification of samples containing monoclonal antibodies; dialysis of the crude purified products; purification of the dialysis products by high performance liquid chromatography, in which anion exchange medium is used for the purification, mobile phase A and mobile phase B are used as eluents, and the flow rate is 1-3 ml. / The gradient elution mode was used for elution at column temperature of 35-40 C and detection wavelength of 280 nm. The mobile phase A was trihydroxymethyl aminomethane buffer, and the mobile phase B was a mixture of trihydroxymethyl aminomethane buffer and sodium chloride. The purifying method of the monoclonal antibody provided by the invention is simple and feasible, has high protein recovery rate and good repeatability, and is suitable for batch preparation of monoclonal antibodies.

【技术实现步骤摘要】
一种简单高效的单克隆抗体的纯化方法
本专利技术涉及单克隆抗体纯化
，尤其涉及一种方法简单、回收纯度高的单克隆抗体的纯化方法。
技术介绍
单克隆抗体纯化是单克隆抗体研究和单克隆抗体药物制备过程中必须涉及和应用的基本技术。常见的单克隆抗体纯化通常是从细胞培养基中或者动物腹水中纯化药物级单克隆抗体蛋白质包括收获和净化，接着通过一系列的柱层析步骤或者膜超滤和渗滤结合而纯化。在纯化之后，期望的抗体制剂经适当配制并且存储在合适的条件中。然而，在柱层析纯化期间，有时可观察到工艺相关的和产物相关的杂质与期望的抗体一起共洗脱；同时，在各种柱层析联用技术中往往会出现溶剂置换等问题，不仅会打破蛋白在溶液中的稳态环境，还可能导致蛋白失活变性，也会无形中增加了纯化分析的难度与繁复程度，不利于商业化生产以及车间放大生产。因此，这种纯化过程相对复杂、回收率比较低，且无法提供具有其药物应用所需的期望水平的纯度和质量的抗体。此外，现有的抗体纯化或者其他蛋白纯化过程中经常采用至少三种纯化技术(例如，亲和、离子交换、疏水相互作用等)相结合的方式使用来纯化样品，后期还要经过超滤/微滤等渗透方法结束工艺步骤，然而，多种本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种简单高效的单克隆抗体的纯化方法，其特征在于，包括：对含有单克隆抗体的样品进行粗提纯；对所述粗提纯的产物进行透析；利用HPLC法对所述透析的产物进行纯化，其中，所述纯化采用阴离子交换介质，以流动相A和流动相B为洗脱液，流速为1～3mL/min，利用梯度洗脱模式进行洗脱，柱温35～40℃，检测波长280nm；所述流动相A为三羟甲基氨基甲烷缓冲液，所述流动相B为三羟甲基氨基甲烷缓冲液和氯化钠的混合溶液。

【技术特征摘要】
1.一种简单高效的单克隆抗体的纯化方法，其特征在于，包括：对含有单克隆抗体的样品进行粗提纯；对所述粗提纯的产物进行透析；利用HPLC法对所述透析的产物进行纯化，其中，所述纯化采用阴离子交换介质，以流动相A和流动相B为洗脱液，流速为1～3mL/min，利用梯度洗脱模式进行洗脱，柱温35～40℃，检测波长280nm；所述流动相A为三羟甲基氨基甲烷缓冲液，所述流动相B为三羟甲基氨基甲烷缓冲液和氯化钠的混合溶液。2.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述流动相A的pH值为6.5～8.5；所述流动相B的pH值为6.5～8.5。3.根据权利要求2所述的纯化方法，其特征在于，所述三羟甲基氨基甲烷缓冲液的终浓度为10～50mmol/L；所述氯化钠的终浓度为0.5～1mol/L。4.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述含有单克隆抗体的样品包括：含有单克隆抗体的小鼠腹水、含有单克隆抗体的杂交瘤细胞的培养上清、重组单克隆抗体的发酵上清。5.根据权利要求1或4所...

【专利技术属性】
技术研发人员：李怀超，李雪娇，张朔，曹启江，张敏，唐琳，刘畅，周艳楠，赵洪礼，何向东，何伟，
申请(专利权)人：辽宁何氏医学院，
类型：发明
国别省市：辽宁,21