一种宽裂解谱绿脓杆菌噬菌体及其消毒应用制造技术

本发明专利技术属于生物工程领域，提供了一株具有环境消毒能力的噬菌体及其应用，该噬菌体单体为铜绿假单胞菌噬菌体，拉丁名P.aeruginosaphage，被命名为Lp14，对铜绿假单胞菌(绿脓杆菌)具有广谱的杀菌能力，噬菌体Lp14保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物学中心，保藏日期为2017年3月30日，保藏编号为CGMCC No.13791；该噬菌体对绿脓杆菌具有强烈的裂解作用，为工业化生产噬菌体及用于消毒杀菌提供了噬菌体来源；该噬菌体还可作为一种安全的生物消毒剂用于貂场环境消毒，从而减少水貂养殖中的绿脓杆菌引起的出血性肺炎的发生，该噬菌体可以用于工业生产，可由宿主菌绿脓杆菌特异性扩增，可作为生物消毒剂应用于貂场环境消毒。

A broad-spectrum Pseudomonas aeruginosa bacteriophage and its disinfection application

The invention belongs to the field of bioengineering, and provides a bacteriophage with environmental disinfection ability and its application. The bacteriophage monomer is Pseudomonas aeruginosa bacteriophage, Latin name P. aeruginosaphage, named Lp14, which has broad-spectrum bactericidal ability to Pseudomonas aeruginosa (Pseudomonas aeruginosa). The bacteriophage Lp14 is stored in the general microbiology of China Microbial Species Preservation Management Committee. Center, 30 March 2017. The preservation number is CGMCC No. 13791. The bacteriophage has a strong lysis effect on Pseudomonas aeruginosa and provides a bacteriophage source for industrial production of bacteriophages and for disinfection and sterilization. The bacteriophage can also be used as a safe biological disinfectant for environmental disinfection in mink farms, thereby reducing the hemorrhagic effect caused by Pseudomonas aeruginosa in mink farms. In the occurrence of pneumonia, the bacteriophage can be used in industrial production, can be specifically amplified by the host bacterium Pseudomonas aeruginosa, and can be used as a biological disinfectant in mink field environment disinfection.

【技术实现步骤摘要】
一种宽裂解谱绿脓杆菌噬菌体及其消毒应用
本专利技术属于生物工程领域，尤其涉及一株具有环境消毒能力的噬菌体及其用途。
技术介绍
铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa,PA)又称作绿脓杆菌，是引起水貂出血性肺炎的主要病原菌之一，在自然界中分布十分广泛，可引起水貂、狐狸、鸡等的急性感染。近年来随着我国水貂养殖业的快速发展，以及养殖规模的不断扩大，由铜绿假单胞菌引起的水貂出血性肺炎常呈地方性和季节流行性爆发，病死率甚至高达50％，给养殖业带来了极大的经济损失。随着抗生素耐药性的日益严重，由于铜绿假单胞菌引起的感染使用常规抗生素已经无法有效的治疗，尤其是对氨基糖苷类、氟喹诺酮类和β-内酰胺类的敏感性显著降低。因此，迫切需要研发具有全新作用机制的抗菌产品。而噬菌体以其高效性、低成本、易获得、特异性强、不易产生耐药性等特点，在辅助或者替代抗生素及消毒药方面表现出巨大的发展潜力，已经受到了越来越多人的关注。本专利技术提供了一株具有环境消毒能力的噬菌体及其用途，旨在控制水貂养殖场的出血性肺炎的发生。水貂出血性肺炎的主要病原为绿脓杆菌，该病的发生主要集中在每年的7-10月份，此时正值水貂换毛期，养殖场内脱落的水貂毛随风飞扬，挂在貂笼上，粘在地面或粪便上。绿脓杆菌是环境中的常在菌，尤其在动物毛发上有大量的附着。水貂养殖场很少进行喷洒消毒，且常规的消毒药不能有效杀灭绿脓杆菌，还具有刺激性、腐蚀性等副作用。国内的研究者做过水貂密闭环境下的消毒试验，但对水貂养殖场进行噬菌体的环境消毒以控制水貂出血性肺炎的发生尚未见报道。
技术实现思路
为了解决上述问题，本专利技术提供一种绿脓杆菌噬菌体，该噬菌体单体为绿脓杆菌噬菌体，拉丁名P.aeruginosaphage，被命名为Lp14，对铜绿假单胞菌(绿脓杆菌)具有广谱的杀菌能力，噬菌体Lp14保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物学中心，保藏日期为2017年3月30日，保藏编号为CGMCCNo.13791；分类命名为绿脓杆菌噬菌体。噬菌体Lp14经双层平板法以17株水貂源绿脓杆菌为宿主菌，测定出噬菌体Lp14对17株宿主菌的裂解率为88.2％，说明该噬菌体是多价烈性噬菌体，在临床用于貂舍消毒具有很好的应用前景。本专利技术一个方面提供了一种绿脓杆菌噬菌体，其保藏编号为CGMCCNo.13791。本专利技术另一个方面提供了本专利技术所述的绿脓杆菌噬菌体作为抑制绿脓杆菌的制剂中的用途。本专利技术另一个方面提供了本专利技术所述的绿脓杆菌噬菌体在制备环境消毒制剂中的用途。优选地，在制备杀灭绿脓杆菌的环境消毒制剂中的用途，更优选为作为动物饲养、食品、药品、医疗器械制备工厂、医院、以及其他人类活动场所的环境消毒制剂；最优选作为貂类或禽类饲养场环境消毒制剂的用途。本专利技术另一个方面提供了本专利技术所述绿脓杆菌噬菌体在制备预防貂类血性肺炎、鸡绿脓杆菌性脐炎、猪子宫内膜炎、奶牛乳房炎等的环境消毒制剂中的用途。本专利技术再一个方面提供了一种环境消毒制剂，其中包含本专利技术所述的绿脓杆菌噬菌体，优选地，绿脓杆菌噬菌体浓度为108PFU/ml以上。在本专利技术的技术方案中，本专利技术的环境消毒制剂可以为任何常用剂型，所述剂型包括但不仅限于喷雾剂、气雾剂、混悬剂、洗剂、淋洗剂、分散体等。在本专利技术的技术方案中，所述环境消毒制剂为喷雾剂、洗剂或淋洗剂的形式，其中含有结冷胶等助悬剂、30％甘油等保护剂、培养液等溶剂。如果所述的环境消毒制剂配制成液体组合物时，其可以与喷射剂混合，以有助于喷雾组合物形成喷雾。如果是喷雾剂，施用装置可通过设置阀门来确定喷雾剂量。在本专利技术的技术方案中，所述环境消毒制剂中还可以包含其他用于环境中病毒、细菌抑制或消灭的活性成分。一种消灭环境中绿脓杆菌，或降低环境中绿脓杆菌浓度的方法，其包括向环境中施用本专利技术所述的绿脓杆菌噬菌体，或者本专利技术所述的环境消毒制剂，优选地，所述方法为非诊断和治疗目的的。在本专利技术的技术方案中，所述绿脓杆菌噬菌体单独使用时，可以直接进行大面积的喷洒，无须密封消毒场所。作为消毒剂喷洒消毒于貂舍粉尘时，它对粉尘中的细菌数和绿脓杆菌数均有极显著的消毒效果且极明显优于百毒杀，该噬菌体作为消毒剂用于貂舍粉尘消毒且有明显的消毒效果。在本专利技术的技术方案中，所述绿脓杆菌噬菌体用于貂舍消毒，可明显降低出血性肺炎引起的死亡率。噬菌体的消毒效果优于百毒杀和对照组，且没有刺激性和腐蚀性，说明该噬菌体可为预防水貂出血性肺炎提供安全的生物消毒剂。在本专利技术的环境消毒组合物中，还进一步包含载体。根据本专利技术的环境消毒组合物也可以包含常用赋形剂，特别是助悬剂、保护剂、双蒸水等，还可以包含益生微生物。本专利技术组合物中使用的载体不受任何限制，只要该载体的存在并不干扰噬菌体的裂解作用。本专利技术中的绿脓杆菌噬菌体可配制成不同剂型，对环境进行消杀，能够高效裂解绿脓杆菌，可用于消除病原体、监控动物饲养场所中绿脓杆菌的污染情况。在一个优选的实施方案中，本专利技术使用含有分离的绿脓杆菌噬菌体的组合物，配制成溶液剂、喷雾剂、分散体、混悬剂等，以用于抑制或杀灭绿脓杆菌。在一个优选的实施方案中，将本专利技术的含有分离的绿脓杆菌噬菌体的组合物配制成喷洒液或淋洗液，对环境或器具进行消杀，用于消除病原体、监控动物饲养场所环境中绿脓杆菌的污染情况。根据本专利技术的实施方案，本专利技术提供本专利技术的分离的绿脓杆菌噬菌体或本专利技术的含有一种或多种本专利技术的分离的绿脓杆菌噬菌体的组合物用于监控、抑制或杀灭动物饲养场所中环境中的绿脓杆菌的应用。在本专利技术中术语环境是指包括一定空间之内的空气、器具和制品等。在一个优选的实施方案中，所述制品为饲养用的器具，例如饲养笼、食物或饮水用用具等。在本专利技术的一些实施方案中，本专利技术提供本专利技术的分离的绿脓杆菌噬菌体或本专利技术的含有一种或多种本专利技术的分离的绿脓杆菌噬菌体的组合物在制备抑制或杀灭绿脓杆菌的药物中的应用。本专利技术的分离的噬菌体应用于消除病原体、监控动物饲养环境卫生，其包括但不局限于貂类，尤其是水貂在饲养过程中防止绿脓杆菌的污染。本专利技术噬菌体Lp14保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物学中心，保藏日期为2017年3月30日，保藏编号为CGMCCNo.13791。有益效果1、本专利技术首次将噬菌体应用于水貂出血性肺炎的预防。2、本专利技术首次成功分离获得了绿脓杆菌噬菌体，其具有宽裂解谱。3、本专利技术的噬菌体可用于工业生产，作为从而减少水貂养殖中的绿脓杆菌引起的出血性肺炎的发生，安全性高。具体实施方式下面结合具体的实施例来进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术，而不是用来限制本专利技术的范围。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。实施例1噬菌体的分离与鉴定(一)菌种的复苏培养挑取铜绿假单胞菌的菌液，在普通琼脂培养基上三区划线，分离单菌落，37℃的恒温箱中培养16-24h。(二)制备细菌增殖液挑取单菌落，接种盛有5mL的LB肉汤的试管中，37℃的空气振荡器中，200rpm震荡培养12h，得到单一的铜绿假单胞菌的菌悬液。(三)制备混合菌悬液分别取200μL单一的菌液，加入到盛有100mLLB肉汤的三角瓶中，37℃的空气振荡器中，200rpm震荡培养12h。(四)粪样、垫料、皮毛等的初步处理取粪样、垫料和水貂的皮毛于盛有LB肉汤的三角瓶中，每个本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于环境消毒的绿脓杆菌噬菌体，其保藏编号为CGMCC No.13791。

【技术特征摘要】
2017.11.02 CN 201711064462X1.一种用于环境消毒的绿脓杆菌噬菌体，其保藏编号为CGMCCNo.13791。2.如权利要求1所述的绿脓杆菌噬菌体作为抑制绿脓杆菌的制剂中的用途。3.如权利要求1所述的绿脓杆菌噬菌体在制备环境消毒制剂中的用途；优选地，在制备杀灭绿脓杆菌的环境消毒制剂中的用途，更优选为作为动物饲养、食品、药品、医疗器械制备工厂、医院、以及其他人类活动场所的环境消毒制剂；最优选作为貂类或禽类饲养场环境消毒制剂的用途。4.如权利要求1所述的绿脓杆菌噬菌体在制备预防貂类出血性肺炎、鸡绿脓杆菌性脐炎、猪子宫内膜炎、奶牛乳房...

【专利技术属性】
技术研发人员：任慧英，孙虎芝，于晓研，潘强，刘慧，
申请(专利权)人：青岛诺安百特生物技术有限公司，青岛农业大学，
类型：发明
国别省市：山东,37