CD317单链抗体317scFv、其编码序列及制备方法和应用技术

本发明专利技术提供一种CD317单链抗体317 scFv、其编码序列及制备方法和应用，该单链抗体317 scFv不依赖于ADCC，直接作用于肿瘤细胞抑制其生长，能够与放化疗等联合使用，其不含Fc段，分子量小，穿透效果也更好。

CD317 single chain antibody 317 scFv, its coding sequence, preparation method and Application

The invention provides a CD317 single chain antibody 317 scFv, its coding sequence, preparation method and application. The single chain antibody 317 scFv does not depend on ADCC, directly acts on tumor cells to inhibit their growth, can be used in combination with radiotherapy and chemotherapy, and has no Fc segment, small molecular weight and better penetration effect.

【技术实现步骤摘要】
CD317单链抗体317scFv、其编码序列及制备方法和应用
本专利技术涉及肿瘤治疗
，具体涉及CD317单链抗体317scFv、其编码序列及制备方法和应用。
技术介绍
肿瘤尤其是实体瘤治疗是一个世界性难题，现今临床采用的常规治疗方法如手术、放疗、化疗都无法完全切除或彻底杀灭肿瘤细胞，肿瘤转移或复发时有发生，临床效果差；另外，常规放/化疗的特异性极差，在杀伤肿瘤细胞的同时也给正常细胞带来很大的损伤，有较严重的不良反应，癌症患者常因不能耐受而被迫停止接受治疗；另一方面放化疗尤其容易损伤在抗肿瘤机制中占重要地位的免疫系统，往往导致残留肿瘤细胞的免疫逃逸，导致复发、转移等恶性转变。肿瘤三大常规治疗方法的局限性促使人们去寻找新的治疗手段，肿瘤的免疫治疗因其安全、有效、不良反应低等特点逐渐脱颖而出，成为继手术、放疗、化疗之后肿瘤治疗的第四种模式(中国肿瘤编辑部.点评肿瘤生物治疗研究专题[J].中国肿瘤,2011,20(2):80-81)。尤其是利用基因工程技术生产的小分子单链抗体免疫治疗因其具有较高的安全性和有效性已成为肿瘤治疗的新热点。目前已有人源单克隆抗体抗双唾液酸神经节苷酯的免疫细胞因子hu14.18-IL2用于治疗复发或难治的成神经细胞瘤(AldersonK,SondelP.ClinicalcancertherapybyNKcellsviaantibody-dependentcell-mediatedcytotoxicity[J].JBiomedBiotechnol,2011,2011:379123)；美罗华(一种嵌合型的抗CD20单克隆抗体)，用于治疗复发的或难治的低度恶性的或滤泡型的非霍奇金淋巴瘤；赫赛汀(一种与原癌基因产物HER2/neu结合的单克隆抗体)，用于治疗转移性乳腺癌(HamiltonE,BlackwellK,HobeikaAC,etal.PhaseⅠclinicaltrialofHER2-specificimmunotherapywithconcomitantHER2kinaseinhibition[J].JTranslMed,2012,10:28)；以及细胞毒性抗生素Calicheamicin结合的人源化抗CD33抗体，用于治疗急性髓样白血病等。基于抗体的肿瘤免疫治疗的关键限制因素在于靶点选择。不同靶点的抗体的作用和适应症不同，因此，每个靶点的抗体都具有独特的意义。CD317，又名BST-2、HM1.24或Tetherin，是骨髓瘤免疫疗法的靶向抗原(Ohtomo,T.,etal.,Molecularcloningandcharacterizationofasurfaceantigenpreferentiallyoverexpressedonmultiplemyelomacells.BiochemBiophysResCommun,1999.258(3):p.583-91；Rew,S.B.,etal.,GenerationofpotentantitumorCTLfrompatientswithmultiplemyelomadirectedagainstHM1.24.ClinicalCancerResearch,2005.11(9):p.3377-3384.)。研究发现，CD317在多发性骨髓瘤、B淋巴瘤、肺癌、头颈鳞状细胞癌、子宫内膜癌、脑癌及骨转移的乳腺癌等均有CD317表达上调的现象(Wang,W.,etal.,Chimericandhumanizedanti-HM1.24antibodiesmediateantibody-dependentcellularcytotoxicityagainstlungcancercells.LungCancer,2009.63(1):p.23-31.；Schliemann,C.,etal.,InvivobiotinylationofthevasculatureinB-celllymphomaidentifiesBST-2asatargetforantibody-basedtherapy.Blood,2010.115(3):p.736-744.；Wainwright,D.A.,etal.,TheexpressionofBST2inhumanandexperimentalmousebraintumors.ExperimentalandMolecularPathology,2011.91(1):p.440-446.)，提示其可能是一个肿瘤相关抗原和潜在的免疫治疗靶点。目前有不少癌症领域的专家正在开展靶向CD317的抗肿瘤治疗的研究，在细胞水平、小鼠模型上均取得了初步的成果。研究表明，CD317特异性的CTL细胞对骨髓瘤具有明显的抑制作用，而CD317单克隆抗体也可以通过ADCC效应抑制多发性骨髓瘤、肾细胞肾癌、子宫内膜癌等的发展(Kawai,S.,etal.,Interferon-alphaenhancesCD317expressionandtheantitumoractivityofanti-CD317monoclonalantibodyinrenalcellcarcinomaxenograftmodels.CancerScience,2008.99(12):p.2461-2466.；Yokoyama,T.,etal.,Plasmamembraneproteomicsidentifiesbonemarrowstromalantigen2asapotentialtherapeutictargetinendometrialcancer.InternationalJournalofCancer,2013.132(2):p.472-484.；Harada,T.,etal.,Combinationwithadefucosylatedanti-HM1.24monoclonalantibodypluslenalidomideinducesmarkedADCCagainstmyelomacellsandtheirprogenitors.PLoSOne,2013.8(12):p.e83905.)。现有的靶向CD317的抗体的抗肿瘤机制都是通过抗体依赖性的细胞介导的细胞毒作用(antibody-dependentcell-mediatedcytotoxicity，ADCC)发挥作用，但是肿瘤病人，尤其是经历过放化疗之后的肿瘤病人大量免疫细胞死亡，因此ADCC作用大打折扣，也无法与放化疗联用。另外，传统的抗体分子量较大，穿透性差，在实体瘤治疗过程中很难在肿瘤内部富集足够浓度的抗体，因此对实体瘤治疗效果比较有限。
技术实现思路
本专利技术提供一种CD317单链抗体317scFv、其编码序列及制备方法和应用，该单链抗体317scFv不依赖于ADCC，直接作用于肿瘤细胞抑制其生长，能够与放化疗等联合使用，其不含Fc段，分子量小，穿透效果也更好。根据第一方面，一种实施例中提供一种CD317单链抗体317scFv，其编码序列包括如SEQIDNO：9所示的核苷酸序列，或其编码序列包括与SEQIDNO：9编码相同氨基酸序列的核苷酸序列；上述CD317单链抗体317scFv不含F本文档来自技高网...

【技术保护点】
1. 一种CD317单链抗体317 scFv，其特征在于，其编码序列包括如SEQ ID NO：9所示的核苷酸序列，或其编码序列包括与SEQ ID NO：9编码相同氨基酸序列的核苷酸序列；所述CD317单链抗体317 scFv不含Fc段。

【技术特征摘要】
1.一种CD317单链抗体317scFv，其特征在于，其编码序列包括如SEQIDNO：9所示的核苷酸序列，或其编码序列包括与SEQIDNO：9编码相同氨基酸序列的核苷酸序列；所述CD317单链抗体317scFv不含Fc段。2.一种编码CD317单链抗体317scFv的核苷酸序列，其特征在于，所述核苷酸序列包括如SEQIDNO：9所示的序列，或与SEQIDNO：9编码相同氨基酸序列的序列。3.一种CD317单链抗体317scFv的制备方法，其特征在于，所述方法包括：（1）制备CD317单链抗体317scFv的重组表达载体，所述重组表达载体包含如SEQIDNO：9所示的核苷酸序列，或与SEQIDNO：9编码相同氨基酸序列的核苷酸序列；（2）将所述重组表达载体转入宿主细胞中表达出所述CD317单链抗体3...

【专利技术属性】
技术研发人员：万晓春，李欣，章桂忠，李俊鑫，刘绿艳，
申请(专利权)人：深圳宾德生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44