本发明专利技术属于生物医药抗体领域，更具体地，本发明专利技术公开了一种抗LAG‑3的单克隆抗体及其制备方法和用途。本发明专利技术的抗LAG‑3单克隆抗体具有良好的生物活性，能够有效结合LAG‑3蛋白，并能够在蛋白水平和细胞水平有效封闭LAG‑3蛋白，并且有效增强免疫功能。该单克隆抗体能够单独或与其它抗肿瘤药物联合应用在肿瘤免疫治疗以及诊断和筛查中，还具有制备治疗肿瘤、抗自身免疫性疾病等药物的良好前景。
A Monoclonal Antibody Against LAG-3 and Its Preparation and Application
The invention belongs to the field of biomedical antibodies, and more specifically discloses a monoclonal antibody against LAG 3, a preparation method and a use thereof. The anti-LAG_ 3 monoclonal antibody of the invention has good biological activity, can effectively bind LAG_ 3 protein, can effectively block LAG_ 3 protein at protein level and cell level, and can effectively enhance immune function. The monoclonal antibody can be used alone or in combination with other anti-tumor drugs in the immunotherapy, diagnosis and screening of tumors. It also has good prospects for the preparation of drugs for the treatment of tumors, anti-autoimmune diseases and so on.
【技术实现步骤摘要】
一种抗LAG-3的单克隆抗体及其制备方法和用途
本专利技术涉及生物医药领域，具体涉及一种抗LAG-3抗体及其制备方法和用途。
技术介绍
淋巴细胞活化基因3或LAG-3(也称作CD223)系免疫球蛋白超基因家族之一员，并且在结构上以及遗传上与CD4有关。LAG-3并不在休眠的外周血淋巴细胞上表达，但在被活化的T细胞以及NK细胞上表达。LAG-3系由位于染色体12的短臂的远程部分、在CD4基因附近的一基因进行编码的膜蛋白，表明该LAG-3基因可能已经藉由基因重复而进化(Triebeletal.(1990)J.Exp.Med.171：1393-1405)。在抗原特异性T细胞应答的体外研究中，加入抗LAG-3抗体导致T细胞增殖增加、活化抗原(如CD25)的更高表达、以及更高浓度的细胞因子(例如干扰素γ以及白介素4)，从而支持LAG-/MHCII类分子相互作用在下调CD4+T淋巴细胞的抗原依赖性刺激中的作用(Huardetal.(1994)Eur.J.Immunol.24：3216-3221)。已经证明LAG-3的胞质内区与名为LAP的蛋白进行相互作用，此蛋白被认为是与CD3/TCR活化途径的下调有关的信号转导分子(Iouzalenetal.(2001)Eur.J.Immunol.31：2885-2891)。此外，已显示CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)在活化时表达LAG-3，并且针对LAG-3之抗体在体内以及体外均抑制由所诱导的Treg细胞所产生的阻抑，表明LAG-3有助于Treg细胞的阻抑活性(Huang，C.etal.(2004)Immunity21：503-513)。另外，已显示LAG-3藉由调节性T细胞以T细胞依赖性以及非依赖性这两种机制对T细胞稳态进行负向调节(Workman，C.J.andVignali，D.A.(2005)J.Immunol.174：688-695)。此外，已显示可溶性人类LAG-3Ig扩大了在体外产生I型肿瘤特异性免疫(Casatietal.(2006)CancerRes.66：4450-4460)。在Triebel(2003)TrendsImmunol.24：619-622中对LAG-3的功能活性进行了进一步综述。鉴于以上原因，用于调整LAG-3活性的药物特别是抗LAG-3单抗引起了极大的兴趣。然而，现有的抗LAG-3单克隆抗体还存在选择性不强、亲和力较低的缺陷。因此，研发新型抗LAG-3的单克隆抗体，并将其应用到治疗肿瘤、抗自身免疫性疾病等相关药物的制备，成为亟待解决的技术问题。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是为了克服目前抗LAG-3单克隆抗体存在选择性较弱，亲和力较低的缺陷，提供了一种新的供了该单克隆抗体的制备方法和应用，从而完成了本专利技术。因此，本专利技术的第一个目的在于提供一种抗LAG-3的单克隆抗体。本专利技术的第二个目的在于提供编码所述抗LAG-3单克隆抗体的核苷酸分子。本专利技术的第三个目的在于提供包含所述核苷酸分子的表达载体。本专利技术的第四个目的在于提供包含所述表达载体的宿主细胞。本专利技术的第五个目的在于提供一种所述抗LAG-3单克隆抗体的制备方法。本专利技术的第六个目的在于提供包含所述抗LAG-3单克隆抗体的组合物。本专利技术的第七个目的在于提供所述抗LAG-3单克隆抗体在制备药物中的应用。为了实现上述目的，本专利技术采取了如下技术方案：本专利技术采取的技术方案之一为：一种抗LAG-3的单克隆抗体，其结合人LAG-3蛋白且包含重链和轻链可变区，其中所述重链可变区包含来自SEQIDNO:2的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区。本领域中，抗体的结合区通常均含有一条轻链可变区和一条重链可变区，每一个可变区都含有互补决定区(CDR区)，即CDR1、CDR2和CDR3三个结构域。本专利技术所述的单链抗体为常规的单链抗体，其包括重链可变区、轻链可变区和15～20个氨基酸的短肽。较佳的，本专利技术所述抗LAG-3的单克隆抗体的重链可变区包含如SEQIDNO：2所示的氨基酸序列，其轻链可变区包含如SEQIDNO：4所示的氨基酸序列，该轻链可变区较佳地包含CDR1’、CDR2’和CDR3’区。其中所述重链CDR1、CDR2和CDR3区较佳地包括SEQIDNO:5、6和7所示的氨基酸序列；其中所述轻链CDR1’、CDR2’和CDR3’区较佳地包括SEQIDNO:8、9和10所示的氨基酸序列。本专利技术所述单克隆抗体可以由本领域常规技术制备，包括杂交瘤技术、噬菌体展示技术、单淋巴细胞基因克隆技术等，较佳地是通过杂交瘤技术从野生型或转基因小鼠制备单克隆抗体。本专利技术采取的技术方案之二为：一种核苷酸分子，所述核苷酸分子编码如上所述的抗LAG-3单克隆抗体。其中所述核苷酸分子中，编码重链可变区的核苷酸序列较佳地包括SEQIDNO：1所示的核苷酸序列，其编码轻链可变区的核苷酸序列较佳地包括SEQIDNO：3所示的核苷酸序列。本专利技术所述核苷酸分子的制备方法为本领域常规的制备方法，较佳地包括以下制备方法：通过基因克隆技术例如PCR方法等，获得编码所述单克隆抗体的核苷酸分子，或者通过人工全序列合成的方法得到编码上述单克隆抗体的核苷酸分子。本领域技术人员知晓，编码上述单克隆抗体的氨基酸序列的核苷酸序列可以适当引入替换、缺失、改变、插入或增加来提供一个多聚核苷酸的同系物。本专利技术中多聚核苷酸的同系物可以通过对编码该单克隆抗体基因的一个或多个碱基在保持抗体活性范围内进行替换、缺失或增加来制得。本专利技术采取的技术方案之三为：一种表达载体，所述表达载体含有如上所述的核苷酸分子。其中所述表达载体为本领域常规的表达载体，是指包含适当的调控序列，例如启动子序列、终止子序列、多腺苷酰化序列、增强子序列、标记基因和/或序列以及其他适当的序列的表达载体。所述表达载体可以是病毒或质粒，如适当的噬菌体或者噬菌粒，更多技术细节请参见例如Sambrook等，MolecularCloning：ALaboratoryManual，第二版，ColdSpringHarborLaboratoryPress，1989。许多用于核酸操作的已知技术和方案请参见CurrentProtocolsinMolecularBiology，第二版，Ausubel等编著。本专利技术所述表达载体较佳地为pDR1，pcDNA3.1，pDHFF，GM-CSF或pCHO1.0，更佳地为pcDNA3.1。本专利技术采取的技术方案之四为：一种宿主细胞，所述宿主细胞含有如上所述的表达载体。本专利技术所述的宿主细胞为本领域常规的各种宿主细胞，只要能满足使上述重组表达载体稳定地自行复制，且所携带所述的核苷酸可被有效表达即可。其中所述宿主细胞包括原核表达细胞核真核表达细胞，所述表达载体较佳地包括：COS、CHO(中国仓鼠卵巢，ChineseHamsterOvary)、NS0、sf9、sf21、DH5α、BL21(DE3)或E.coliTG1，更佳地为E.coliTG1、BL21细胞(表达单链抗体或Fab抗体)或者CHO-K1细胞(表达全长IgG抗体)。将前述表达载体转化至宿主细胞中，即可得本专利技术优选的重组表达转化体。其中所述转化方法为本领域常规转化方法，较佳地为化学转化法，热激法或电转法。本专利技术采取的技本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种抗LAG‑3的单克隆抗体，其特征在于，其结合人LAG‑3蛋白且包含重链和轻链可变区，其中所述重链可变区包含来自SEQ ID NO:2的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区。
【技术特征摘要】
1.一种抗LAG-3的单克隆抗体，其特征在于，其结合人LAG-3蛋白且包含重链和轻链可变区，其中所述重链可变区包含来自SEQIDNO:2的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区。2.如权利要求1所述的单克隆抗体，其中所述重链CDR1、CDR2和CDR3区分别包括SEQIDNO:5、6和7的氨基酸序列。3.权利要求1所述的单克隆抗体，其中所述轻链可变区包含来自SEQIDNO:4的轻链可变区的CDR1’、CDR2’和CDR3’区。4.权利要求3所述的单克隆抗体，其中所述轻链CDR1’、CDR2’和CDR3’区分别包含SEQIDNO:8、9和10的氨基酸序列。5.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体含有编码如权利要求1所...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈征，路玲玉，耿妍，朱云霞，李彩辉，
申请(专利权)人：三生国健药业上海股份有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31
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