一种CD137基因修饰人源化动物模型的构建方法及其应用技术

本发明专利技术基于CRISPR/Cas9技术提供了一种CD137基因修饰人源化动物的制备方法，构建得到一种免疫系统完整、可有效评价抗CD137抗体的CD137基因修饰人源化动物模型。进一步的，本发明专利技术以上述模型建立了一种可用于抗CD137抗体的临床前筛选的CD137人源化小鼠药效评价平台，可根据该药效评价平台设计合理的抗CD137抗体的给药方法，为候选抗CD137抗体提供更准确的临床前药效评价方法。

Construction and Application of a Humanized Animal Model Modified by CD137 Gene

The invention provides a preparation method of CD137 gene modified humanized animal based on RISPR/Cas9 technology, and constructs a CD137 gene modified humanized animal model with complete immune system and effective evaluation of anti-CD137 antibody. Furthermore, the present invention establishes a humanized platform for evaluating the pharmacodynamics of CD137 mice for pre-clinical screening of anti-CD137 antibodies based on the above model, and designs a reasonable administration method of anti-CD137 antibodies according to the platform, thus providing a more accurate pre-clinical pharmacodynamics evaluation method for candidate anti-CD137 antibodies.

【技术实现步骤摘要】
一种CD137基因修饰人源化动物模型的构建方法及其应用
本专利技术属于动物基因工程和基因遗传修饰领域，具体地说，涉及基于RISPR/Cas9技术的CD137基因修饰人源化动物模型的构建方法及其在生物医药的应用。
技术介绍
复杂的生物过程通常需要进行体内分析，许多重要的研究进展已经用小鼠作为研究各种生物系统的模型。体内人体生物学的研究受到道德和技术的严重限制，越来越需要动物模型来进行人体细胞、组织和器官的体内研究。目前，科学家们已经开发了多种人源化小鼠或人鼠嵌合体来克服这些限制，并且现在已经成为人体细胞和组织体内研究的重要工具。在临床药物的研发过程中，小鼠被广泛用于候选药物临床前的安全性及有效性评价，如新型抗病毒药物的体内有效性评价、肿瘤的免疫治疗和开发新型的化学治疗药物、新型抗自身免疫病药物的治疗效果、药物体内代谢和肝毒性、人源抗体的前期开发评估等。通过临床前评估的候选药，大部分在临床I期失败，这其中小鼠与人体内生理、病理等的差异是重要的因素：人鼠免疫系统的差异、许多致病因子和药物在人鼠之间的种系特异性、药物靶点与受体之间在人鼠之间的亲和力差异、人源肿瘤与鼠源肿瘤的差异等都将影响临床本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种CD137基因修饰人源化动物细胞的构建方法，其特征在于包括如下步骤：(1)选择动物CD137基因的完整胞外区两端作为打靶位点，设计包含人源CD137基因胞外区的同源DNA供体和鉴定方案；(2)基于CRISPR/Cas9技术，制备Cas9或其表达载体，在动物CD137基因的完整胞外区的5’端和3’端各设计一条sgRNA或者tracrRNA/crRNA二元复合体或各自的表达载体；或者，制备Cas9、sgRNA或者crRNA和tracrRNA的共表达载体；(3)将步骤(2)制备得到的Cas9、sgRNA或者tracrRNA/crRNA二元复合体，或者各自的表达载体或共表达载体注射入受精卵，敲...

【技术特征摘要】
1.一种CD137基因修饰人源化动物细胞的构建方法，其特征在于包括如下步骤：(1)选择动物CD137基因的完整胞外区两端作为打靶位点，设计包含人源CD137基因胞外区的同源DNA供体和鉴定方案；(2)基于CRISPR/Cas9技术，制备Cas9或其表达载体，在动物CD137基因的完整胞外区的5’端和3’端各设计一条sgRNA或者tracrRNA/crRNA二元复合体或各自的表达载体；或者，制备Cas9、sgRNA或者crRNA和tracrRNA的共表达载体；(3)将步骤(2)制备得到的Cas9、sgRNA或者tracrRNA/crRNA二元复合体，或者各自的表达载体或共表达载体注射入受精卵，敲除动物CD137基因的胞外区的同时将人源CD137基因的胞外区插入到基因组。2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于所述动物为哺乳动物。3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于所述动物为啮齿类动物。4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于所述动物为小鼠。5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于所述动物为BALB/c或C57BL/6小鼠。6.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于所述小鼠CD137基因的胞外区序列如SEQIDNo:1所示，人源CD137基因的胞外区序列如SEQIDNo:2所示。7.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于基于CRISPR/Cas9技术，设计同源DNA供...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵静，琚存祥，马秀英，张明坤，侯欢欢，高翔，
申请(专利权)人：江苏集萃药康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32