用于产生双链梭菌神经毒素的方法技术

本发明专利技术提供避开活化步骤需要的适合用于重组产生双链梭菌神经毒素的方法、细胞和试剂盒，以及由此获得的适合用于治疗的双链梭菌神经毒素。

A method for producing neurotoxins from Clostridium distreptococcus

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于产生双链梭菌神经毒素的方法
本专利技术提供避开活化步骤需要的用于重组产生双链梭菌神经毒素的方法。
技术介绍
梭菌属(Clostridia)细菌产生高度有效和特异的蛋白质毒素，这些蛋白质毒素可使它们所递送至的神经元和其他细胞中毒。这类梭菌毒素的实例包括由破伤风梭菌(C.tetani)(TeNT)及由肉毒梭菌(C.botulinum)(BoNT)血清型A-G产生的神经毒素，以及由巴氏梭菌(C.baratii)和丁酸梭菌(C.butyricum)产生的那些。已知在梭菌毒素中有一些最有效的毒素。作为实例，肉毒梭菌神经毒素(botulinumneurotoxin)对小鼠的半数致死剂量取决于血清型在从0.5至5ng/kg的范围内。破伤风和肉毒毒素都通过抑制所影响的神经元功能，尤其是神经递质的释放来发挥作用。肉毒毒素在神经肌肉接头处发挥作用并抑制周围神经系统中的胆碱能传递，而破伤风毒素在中枢神经系统中发挥作用。梭菌神经毒素通过蛋白酶解切割称为SNARE蛋白(例如SNAP-25、VAMP或突触融合蛋白)的胞内转运蛋白发挥作用——参见GeraldK(2002)"CellandMolecularBi本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于产生双链梭菌神经毒素的方法，其包括在异源宿主细胞中分别表达编码梭菌神经毒素轻链的第一基因和编码梭菌神经毒素重链的第二基因，其中所述第一和第二基因在所述宿主细胞的氧化环境中表达。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.09.16 EP 16189221.11.用于产生双链梭菌神经毒素的方法，其包括在异源宿主细胞中分别表达编码梭菌神经毒素轻链的第一基因和编码梭菌神经毒素重链的第二基因，其中所述第一和第二基因在所述宿主细胞的氧化环境中表达。2.权利要求1的方法，其中所述宿主细胞是原核细胞。3.权利要求2的方法，其中所述氧化环境是所述宿主原核细胞的细胞质。4.权利要求2或3的方法，其中所述原核细胞是这样的原核细胞，其中与其他方面相同的野生型细胞相比在细胞质中过量表达至少一个涉及二硫键形成的基因，和/或与其他方面相同的野生型细胞相比抑制至少一个涉及二硫键还原的基因。5.权利要求4的方法，其中所述原核细胞是来自选自AD494、BL21trxB、Origami、Rosetta-gami和Shuffle菌株的菌株的大肠杆菌细胞。6.权利要求1至5中任一项的方法，其中所述梭菌神经毒素轻链选自BoNTA型、B型、C型、D型、E型、F型或G型或TeNT轻链，且其中所述梭菌神经毒素重链选自BoNTA型、B型、C型、D型、E型、F型或G型或TeNT重链。7.权利要求1至6中任一项的方法，其中所述梭菌神经毒素轻链和所述梭菌神经毒素重链来自同一BoNT血清型或亚型。8.权利要求1至...

【专利技术属性】
技术研发人员：D·克万，
申请(专利权)人：益普生生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：英国,GB