设计者α1,6-岩藻糖苷酶突变体实现完整N-糖肽和N-糖蛋白的直接核心岩藻糖基化制造技术

本发明专利技术提供新的岩藻糖苷酶突变体，其作为岩藻糖‑连接酶起作用，用于包括完整的治疗性抗体在内的多种生物学糖肽和糖蛋白的核心岩藻糖基化。在干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)α1,6‑岩藻糖苷酶的广义酸/碱残基E274处具有突变的几种突变体，包括E274A、E274S、和E274G，能够有效地使多种复杂的N‑糖肽和完整糖蛋白岩藻糖基化。所述位点特异性突变体能够将岩藻糖转移至核心GlcNAc‑Asn残基并可用于药物递送和疫苗开发。

Designer alpha 1,6-fucosidase mutant realizes direct core fucosylation of intact N-glycopeptides and N-glycoproteins

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】设计者α1,6-岩藻糖苷酶突变体实现完整N-糖肽和N-糖蛋白的直接核心岩藻糖基化本专利技术中的政府权益本专利技术是在美国国家卫生研究所以资助号R01GM080374D授予的政府支持下做出的。美国政府在本专利技术中享有某些权益。相关申请的交叉引用本申请要求2016年8月10日提交的共同待决美国临时申请号62/373151的优先权，所述申请的内容由此通过引用并入本文中，用于所有目的。专利技术背景
本专利技术提供新的岩藻糖苷酶突变体，其作为用于包括完整的治疗性抗体在内的多种生物学糖肽和糖蛋白的核心岩藻糖基化的岩藻糖-连接酶起作用。位点特异性突变体能够将岩藻糖转移至核心GlcNAc-Asn残基并可用于药物递送和疫苗开发。相关技术天冬酰胺-连接的糖基化作用，即N-糖基化，是哺乳动物中最普遍的蛋白质翻译后修饰之一，其在调节基础蛋白质的固有性质和生物学功能中起到重要的作用1,2。例如，连接的N-聚糖可以对蛋白质的折叠、稳定性、抗原性和免疫原性产生深刻的影响2,3。另一方面，N-聚糖可以直接参与各种生物学识别过程，包括细胞粘着、宿主-病原体相互作用、癌症转移和免疫应答1,4-9。尽管所有哺乳动物本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于将N‑糖肽或N‑糖蛋白岩藻糖基化的催化方法，所述方法包括：提供含GlcNAc的肽、蛋白质或其它聚糖作为GlcNAc受体(受体底物)；提供用于接近岩藻糖的活化的糖基供体；和提供α1,6‑岩藻糖苷酶突变体酶，用于利用岩藻糖将GlcNAc受体酶促转岩藻糖基化，其中所述α1,6‑岩藻糖苷酶突变体酶是干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)α‑岩藻糖苷酶突变体，由此合成岩藻糖基化的糖肽或糖蛋白。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.08.10 US 62/373,1511.用于将N-糖肽或N-糖蛋白岩藻糖基化的催化方法，所述方法包括：提供含GlcNAc的肽、蛋白质或其它聚糖作为GlcNAc受体(受体底物)；提供用于接近岩藻糖的活化的糖基供体；和提供α1,6-岩藻糖苷酶突变体酶，用于利用岩藻糖将GlcNAc受体酶促转岩藻糖基化，其中所述α1,6-岩藻糖苷酶突变体酶是干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei)α-岩藻糖苷酶突变体，由此合成岩藻糖基化的糖肽或糖蛋白。2.权利要求1的催化方法，其中所述活化的糖基供体选自α-岩藻糖基氟化物αFucF、α-岩藻糖基氯化物、α-岩藻糖基叠氮化物、4-硝基苯基α-岩藻糖苷、3-硝基苯基α-岩藻糖苷、3,4-二硝基苯基α-岩藻糖苷和4-甲基伞形基α-岩藻糖苷。3.权利要求1的催化方法，其中α1,6-岩藻糖苷酶突变体酶选自E274A、E274S、E274G、E274T、E274C、E274I、E274L、E274M、E274F、E274W、E274Y和E274V，或其具有至少90％同源性的突变体，它们具有岩藻糖基化活性且衍生自干酪乳杆菌岩藻糖苷酶(AlfC)。4.权利要求1的催化方法，其中α1,6-岩藻糖苷酶突变体酶选自衍生自干酪乳杆菌α-岩藻糖苷酶(SEQIDNO:4)的E274A(SEQIDNO:1)、E274S(SEQIDNO:2)和E274G(SEQIDNO:3)。5.权利要求4的催化方法，其还包括CPD和HIS(SEQIDNO:31)或CPD(SEQIDNO.30)。6.用于制备均质的岩藻糖基化糖肽或糖蛋白的化学酶促方法，所述方法包括：提供非岩藻糖基化的糖肽或糖蛋白受体；和使所述非岩藻糖基化的糖肽或糖蛋白受体与包括活化的含岩藻糖部分的供体底物在干酪乳杆菌α1,6-岩藻糖苷酶E274突变体蛋白质或其片段的存在下反应，所述突变体蛋白质或其片段包括催化结构域并相对于野生型α1,6-岩藻糖苷酶E274酶表现出增加的转岩藻糖基化和降低的水解活性，以将所述活化的含岩藻糖部分转移至所述非岩藻糖基化的糖肽或糖蛋白受体并得到均质的岩藻糖基化糖肽或糖蛋白。7.权利要求6的化学酶促方法，所述均质的糖肽和糖蛋白包括与肽或蛋白质连接的聚糖，所述聚糖选自高甘露糖型、唾液酸化和去唾液酸复合型、混合型和它们的类似物。8.权利要求6的化学酶促方法，其中所述非岩藻糖基化的糖肽或糖蛋白受体可以包括一个或多个Asn(天冬酰胺)-连接的GlcNAc部分或多个N-聚糖位点，从而允许引入一个或多个核心岩藻糖。9.权利要求6的化学酶促方法，其中所述糖蛋白或糖蛋白选自抗体组，所述抗体组包括17b、48d、A32、C11、2G12、F240、IgG1b12、19e、X5、TNX-355、西妥昔单抗、利妥西单抗、莫罗单抗-CD3、阿昔单抗、达利珠单抗、巴利西单抗、帕利珠单抗、英利昔单抗、曲妥珠单抗、吉妥单抗奥唑米星、阿仑珠单抗、替伊莫单抗替坦、阿达木单抗、奥马佐单抗、托西莫单抗、I131...

【专利技术属性】
技术研发人员：王来曦，李超，朱世雷，
申请(专利权)人：马里兰大学帕克分校，
类型：发明
国别省市：美国,US