抗体人源化改造方法技术

本发明专利技术公开一种抗体人源化改造方法，使用N‑糖苷酶处理抗体人源化改造过程中的经纯化后的IgG抗体蛋白；所述N‑糖苷酶为PNGaseF酶，所述PNGaseF酶特异性识别蛋白中的序列Asn‑X‑Ser/Thr，完全去除糖基化的同时保留抗体蛋白中的二硫键；X代表除了脯氨酸外任意一种氨基酸。本发明专利技术还提供上述方法的具体应用。本发明专利技术的方法能够有效的对现有技术中部分抗体在抗体人源化改造后期时仍存在的无法替换的氨基酸进行替换。通过上述方法，可以尽可能多的保留经过筛选且合适的人源序列、降低免疫反应的目的，同时又能够最大限度的保留其特异性和亲和力，从而达到合理的人源化的效果。

【技术实现步骤摘要】
抗体人源化改造方法
本专利技术属于分子生物学中抗体人源化设计研究领域，尤其是涉及到利用N-糖苷酶来去除可能影响到抗体互补决定区构象的N-糖基，以维持抗体分子的单一度和纯净度。
技术介绍
目前，抗体人源化设计作为一种新的研发趋势，已经成为了当今治疗性抗体研发的过程中的重要环节。抗体人源化：是一个复杂的过程，主要通过分子生物学实验手段，辅以计算机对抗体蛋白质结构的预测和模拟，使鼠源单克隆抗体序列改造为与人源抗体序列尽可能相近的一种分子生物学操作方法。通过这种方法改造成功后的抗体，既保留了原本鼠源抗体的亲和力和特异性，又降低了对人体造成的免疫副反应。但是在这个过程中，由于单克隆抗体蛋白分子结构的不完全确定性，或由于其分子结构本身的缺陷(如天然存在的糖基化的位点，空间结构中不合适的半胱氨酸的分布，还有一些容易导致脱酰胺作用出现的位点)，导致了不是所有的抗体蛋白都能被顺利的人源化。人源化抗体：是经由抗体人源化处理后的一种产物，一般包括嵌合抗体，改型抗体，表面重塑抗体和全人源化抗体等。处理后的抗体由于其大部分氨基酸序列被人源序列取代，所以对人体造成的免疫副反应有一定程度的降低。糖基化：是蛋白质翻本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗体人源化改造方法，其特征在于，使用N‑糖苷酶处理抗体人源化改造过程中的经纯化后的IgG抗体蛋白；所述N‑糖苷酶为PNGaseF酶，所述PNGaseF酶特异性识别蛋白中的序列Asn‑X‑Ser/Thr，去除糖基化的同时保留抗体蛋白中的二硫键；X代表除了脯氨酸外任意一种氨基酸。

【技术特征摘要】
1.一种抗体人源化改造方法，其特征在于，使用N-糖苷酶处理抗体人源化改造过程中的经纯化后的IgG抗体蛋白；所述N-糖苷酶为PNGaseF酶，所述PNGaseF酶特异性识别蛋白中的序列Asn-X-Ser/Thr，去除糖基化的同时保留抗体蛋白中的二硫键；X代表除了脯氨酸外任意一种氨基酸。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述PNGaseF酶为RapidTMPNGaseF酶。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，PNGaseF酶处理的反应温度为37～55℃。4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，反应温度为50℃。5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，PNGaseF酶处理的反应时间为10～15min。6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述去除糖基化是指去除暴露在抗体蛋白的CDR构象表面的N-糖苷残基。7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，PNGaseF酶处理的酶切反应体系为：5ul反应底物，2ulRapidPNGaseFBuffer(5X)，3ul的DNase&RNaseFree无菌水，1ul的Rapid...

【专利技术属性】
技术研发人员：高晨阳，陆晓峰，雷鸣，王卓智，李竞，陈智胜，
申请(专利权)人：上海药明生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31