一种无基质效应的均相免疫检测试剂盒及其分析方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种无基质效应的均相免疫检测试剂盒，其包括：第一组合物，其包含能够与单线态氧反应生成可检测信号的受体以及与之结合的第一抗体或第一抗体片段，所述第一抗体或第一抗体片段能够与待检样品中被分析物的第一表位特异性结合；第二组合物，其包含供体，所述供体能够在激发状态产生单线态氧；第三组合物，其包含磁体微球，所述磁体微球用于分离待检样品中的基质以及待检样品中未与所述第一抗体或第一抗体片段特异性结合的其他非特异物质；第四组合物，所述第四组合物包含能够与被分析物的第二表位特异性结合的第二抗体或第二抗体片段，或包含能够与被分析物的第三表位特异性结合的已知抗原。

A homogeneous immunoassay kit without matrix effect and its analytical method and Application

The present invention relates to a homogeneous immunoassay kit without matrix effect, which comprises: a first composition comprising a receptor capable of reacting with singlet oxygen to generate a detectable signal and a first antibody or a first antibody fragment that binds to it; a first antibody or a first antibody fragment that can specifically bind to the first epitope of the analyte in the sample to be examined; and a second composition comprising a first antibody fragment that binds to the first epitope of the analy The donor includes a donor capable of generating singlet oxygen in an exciting state; the third composition comprises a magnetic microsphere for separating the matrix in the sample to be examined and other non-specific substances in the sample not specifically bound to the first antibody or the first antibody fragment; and the fourth composition comprises a first substance capable of being analyzed. The second antibody or fragment of the second antibody specifically binds to the second epitope, or contains known antigens that specifically bind to the third epitope of the analyte.

【技术实现步骤摘要】
一种无基质效应的均相免疫检测试剂盒及其分析方法和应用
本专利技术属于生物医学检测
，尤其是涉及一种无基质效应的均相免疫检测试剂盒及其分析方法和应用。
技术介绍
标记免疫分析融合抗原-抗体结合的高度特异性和标记(示踪)物质检测的高度敏感性于一体，广泛应用于临床医学体液标本中超微量物质的定量分析。根据是否需要分离结合标记物(Bind，B)和游离标记物(Free，F)，标记免疫分析分为均相免疫分析和非均相免疫分析。均相免疫分析不需分离去除游离标记物，直接测定结合标记物的信号，即获得剂量曲线或标准曲线，如荧光偏振免疫分析和光激化学发光分析(LICA)。非均相免疫分析需要先分离去除游离标记物，再测定结合标记物的信号，才能获得剂量曲线或标准曲线，如化学发光免疫分析(CLIA)和电化学发光免疫分析(ECLIA)。标记免疫分析测定抗体的方式包括：间接法、双抗原夹心法、竞争法、中和法等。其中间接法可通过抗抗体(抗人-IgG或抗人-IgM)区分待检抗体的免疫球蛋白类别，从而对判断感染性疾病的病程有重要价值，因此是常用的分析模式。经典间接法需采用两步法进行，已知抗原与待检抗体结合，标记抗抗体(第二抗体)与待检抗体结合，两步之间需分离去除非特异性(与抗原无关)抗体，否则非特异性抗体同样会与第二抗体结合，消耗大量第二抗体并提升空白的信号值。在非均相标记免疫分析技术中，通过“分离洗涤”去除未参与结合的游离标记物，是分析过程的关键环节之一。然后无论是手工操作，还是仪器自动完成，均会导致洗涤误差。同时，洗涤过程也会导致标本之间交叉污染，强阳性标本会影响临近标本的检测结果。而均相标记免疫分析技术的特点是全程无分离洗涤过程，不存在洗涤误差。虽然均相免疫分析技术中无需分离洗涤步骤，但是血清或血浆中的一些物质却会干扰标记信号检测或干扰化学发光反应。此外，在均相标记免疫分析技术中涉及化学发光的领域，有的涉及氧化还原反应，如血液标本中含有一些氧化-还原药物(如维生素C)同样干扰光信号的产生过程，严重影响检测结果的准确性。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术的不足提供了一种无基质效应的均相免疫检测试剂盒及其分析方法和应用。利用该试剂盒分析待检样本中抗原或抗体的方法能够消除均相免疫检测中的基质效应，改变了均相免疫检测不能使用间接法测定抗体及检测抗原时出现钩状效应的现状。为此，本专利技术第一方面提供了一种无基质效应的均相检测试剂盒，其包括：第一组合物，其包含能够与单线态氧反应生成可检测信号的受体以及与之结合的第一抗体或第一抗体片段，所述第一抗体或第一抗体片段能够与待检样品中被分析物的第一表位特异性结合；第二组合物，其包含供体，所述供体能够在激发状态产生单线态氧；第三组合物，其包含磁体微球，所述磁体微球用于分离待检样品中的基质以及待检样品中未与所述第一抗体或第一抗体片段特异性结合的其他非特异物质。本申请的专利技术人惊讶地发现，利用本专利技术所述试剂盒分析待检样本中抗原或抗体的方法，增加了去除血清/血浆基质的过程，有效避免血清/血浆基质对均相检测中的后续发光过程产生的影响，改变了均相免疫分析技术不能使用间接法测定抗体及检测抗原时出现钩状效应的现状。此外，本专利技术所述去除血清/血浆基质的过程，不同于一般非均相免疫分析的分离洗涤，其目的不是去除游离标记物，而是去除血清/血浆中可能的干扰物质，只需去除大部分干扰物质即可(80％以上)，对洗涤精度没有过高的要求，不会对精密度(重复性)产生影响。另外，本专利技术试剂盒的通用性强，可以检测多种项目。在本专利技术的一些实施方式中，所述试剂盒还包括第四组合物，所述第四组合物包含能够与被分析物的第二表位特异性结合的第二抗体或第二抗体片段。根据本专利技术，所述磁体微球和所述供体均包被有特异性结合配对成员中的一员，所述第二抗体包被有特异性结合配对成员中的另一员。在本专利技术的另一些实施方式中，所述试剂盒还包括第四组合物，所述第四组合物包含能够与被分析物的第三表位特异性结合的已知抗原。根据本专利技术，所述磁体微球和所述供体均包被有特异性结合配对成员中的一员，所述已知抗原表面包被有特异性结合配对成员中的另一员。在本专利技术的一些优选方式中，所述特异性结合配对成员为生物素-链霉亲和素系统。在本专利技术的另一些优选实施方式中，所述磁体微球通过生物素标记的牛血清白蛋白和/或生物表标记的球蛋白间接被链霉亲和素包被。根据本专利技术，所述磁体微球选的粒径为100nm～1μm，优选为200nm～800nm，更优选为300nm～600nm。本专利技术第二方面提供了一种使用如本专利技术第一方面所述试剂盒检测待检样本中是否存在被分析物的均相检测方法，其包括以下步骤：S1，通过磁场将由磁体微球-被分析物所形成的第一复合物与待检样品中的基质以及未与所述第一抗体或第一抗体片段特异性结合的其他非特异物质相分离；S2，将第一组合物、第二组合物与第一复合物接触以形成第二复合物；S3，利用能量或者活性化合物接触所述第二复合物，激发供体产生单线态氧，所述受体与接收到的单线态氧反应生成可检测的化学发光信号；S4，分析所述化学发光信号，判断待检样品中是否存在被分析物和被分析物的含量或浓度。在本专利技术的一些实施方式中，步骤S1之前还有步骤S0，其将待测样本、第三组合物和第四组合物接触以生成所述的第一复合物。根据本专利技术，当所述被分析物为待检抗原时，所述第四组合物包括能够与被分析物的第二表位特异性结合的第二抗体或第二抗体片段，所述第一复合物中的磁体微球和被分析物通过第二抗体或第二抗体片段相结合。根据本专利技术，当所述被分析物为待检抗体时，所述第四组合物包含能够与被分析物的第三表位特异性结合的已知抗原，所述第一复合物中的磁体微球和被分析物通过已知抗原相结合。在本专利技术的一些优选实施方式中，所述方法包括以下步骤：S0，将待检样本、第三组合物和第四组合物混合，得到包含由磁体微球-被分析物所形成的第一复合物的第一混合物；S1，利用磁场吸附第一复合物，移除所述第一混合物中含有基质以及其他非特异物质的液体。在本专利技术的一些具体实施例中，步骤S1中移除的液体体积占第一混合物中液体体积的80％-95％。根据本专利技术，所述步骤S1和所述步骤S2之间没有洗涤步骤。根据本专利技术，所述步骤S2和所述步骤S3之间没有洗涤步骤。在本专利技术的一些优选实施方式中，步骤S2中，先移除磁场后，再将第一组合物和第二组合物加入到第一复合物中以形成第二复合物。根据本专利技术，所述待检样本中的被分析物选自血清或血浆中的病原体抗体、自身抗体、过敏原特异性抗体和过敏原总抗体中的一种或多种。本申请的专利技术人惊讶地发现，本专利技术的方法改变了均相免疫检测中的光激化学发光分析不能使用间接法测定抗体的现状。由于待检抗体在非特异性抗体中所占的比例较小，现有光激化学发光分析程序中无分离洗涤过程，无法去除非特异性抗体，非特异性抗体同样可结合抗抗体包被的受体微球，从而干扰检测系统。因此，常规光激化学发光分析不能采用“已知抗原-待检抗体-标记抗抗体”的间接分析模式，只能采用双抗原夹心或竞争分析模式，对待检抗体进行检测，而双抗原夹心或竞争分析模式对已知抗原或竞争抗体的要求较高，且不能区分待检抗体免疫球蛋白的类别。上述的新型均相检测中的光激化学发光分析，在已知抗原(与被分析抗体结合的抗原)与被分析抗体结合后增加磁本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种无基质效应的均相免疫检测试剂盒，其包括：第一组合物，其包含能够与单线态氧反应生成可检测信号的受体以及与之结合的第一抗体或第一抗体片段，所述第一抗体或第一抗体片段能够与待检样品中被分析物的第一表位特异性结合；第二组合物，其包含供体，所述供体能够在激发状态产生单线态氧；第三组合物，其包含磁体微球，所述磁体微球用于分离待检样品中的基质以及待检样品中未与所述第一抗体或第一抗体片段特异性结合的其他非特异物质。

【技术特征摘要】
1.一种无基质效应的均相免疫检测试剂盒，其包括：第一组合物，其包含能够与单线态氧反应生成可检测信号的受体以及与之结合的第一抗体或第一抗体片段，所述第一抗体或第一抗体片段能够与待检样品中被分析物的第一表位特异性结合；第二组合物，其包含供体，所述供体能够在激发状态产生单线态氧；第三组合物，其包含磁体微球，所述磁体微球用于分离待检样品中的基质以及待检样品中未与所述第一抗体或第一抗体片段特异性结合的其他非特异物质。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括第四组合物，所述第四组合物包含能够与被分析物的第二表位特异性结合的第二抗体或第二抗体片段。3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述磁体微球和所述供体均包被有特异性结合配对成员中的一员，所述第二抗体包被有特异性结合配对成员中的另一员。4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括第四组合物，所述第四组合物包含能够与被分析物的第三表位特异性结合的已知抗原。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述磁体微球和所述供体均包被有特异性结合配对成员中的一员，所述已知抗原表面包被有特异性结合配对成员中的另一员。6.根据权利要求3或5所述的试剂盒，其特征在于，所述特异性结合配对成员为生物素-链霉亲和素系统。7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述磁体微球通过生物素标记的牛血清白蛋白和/或生物表标记的球蛋白间接被链霉亲和素包被。8.根据权利要求1～7中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述磁体微球选的粒径为100nm～1μm，优选为200nm～800nm，更优选为300nm～600nm。9.一种使用如权利要求1～8中任意一项所述试剂盒检测待检样本中是否存在被分析物的均相免疫检测方法，其包括以下步骤：S1，通过磁场将由磁体微球-被分析物所形成的第一复合物与待检样品中的基质以及未与所述第一抗体或第一抗体片段特异性结合的其他非特异物质相分离；S2，将第一组合物、第二组合物与第一复合物接触以形成第二复合物；S3，利用能量或者活性化合物接触所述第二复合物，激发供体产生单线态氧，所述受体与接收到的单线态氧反应生成可检测的化学发光信号；S4，分析所述化学发光信号，判断待检样品中是否存在被分析物和被分析物的含量或浓度。10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，步骤S1之前还有步骤S0，其将待测样本、第三组合物和第四组合物接触以生成所述的第一复合物。11.根据权利要求10所述的方法，其中特征在于，当所述被分析物为待检抗原时，所述第四组合物包括能够与被分析物的第二表位特异性结合的第二抗体或第二抗体片段，所述第一复合物中的磁体微球和...

【专利技术属性】
技术研发人员：李会强，赵炜国，
申请(专利权)人：北京科美生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11