检测抗-Carp抗体的均相免疫检测试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种检测抗‑Carp抗体的均相免疫检测试剂盒及其制备方法和使用方法。本发明专利技术提供了一种抗‑Carp抗体的均相免疫检测试剂盒，该试剂盒所采用的检测技术为光激化学发光免疫分析法，为一种均相反应体系，相较于现有的非均相反应体系检测方法，存在着无需清洗、包被/标记工艺对抗原抗体的活性无影响、特异性高、灵敏度好、线性范围宽、背景干扰小、反应速度快、操作简便、技术要求不高等优点，并可实现全自动化高通量测试。

Homogeneous Immunoassay Kit for Detecting Anti-Carp Antibody and Its Application

【技术实现步骤摘要】
检测抗-Carp抗体的均相免疫检测试剂盒及其应用
本专利技术属于免疫分析
，具体涉及一种检测抗-Carp抗体的均相免疫检测试剂盒及其制备方法和使用方法。
技术介绍
抗氨甲酰化蛋白抗体(anti-Carbamylatedproteinantibody，anti-CarpAb)是最近几年发现的与类风湿性关节炎(Rheumatoidarthritis，RA)疾病诊断和病程监控的密切相关的一个新的生物标志物。氨甲酰化是一种非酶介导的蛋白质翻译后修饰方式，其具体过程是蛋白质的赖氨酸残基在尿素的衍生物一氰酸酯或氰酸盐的作用下转变成高瓜氨酸残基。该过程能打破人体免疫耐受并诱导自身免疫抗体抗-Carp抗体(anti-CarpAb)的产生。专利WO2012/105838A1及WO2016/014612A2中公开的anti-CarpAb的检测方法分别为以氨甲酰化胎牛血清(Car-FCS)和氨甲酰化人类α1抗胰蛋白酶(Car-hAlAT)作为抗原，采用免疫印迹法(Immunoblotting)及酶联免疫吸附法(ELISA)进行测定。专利WO2012/105838A1中的检测方法存在的缺陷是：1、人体内的anti-CarpAb是针对自身体内氨甲酰化蛋白所产生的抗体，而氨甲酰化胎牛血清(Car-FCS)作为动物源性的抗原，与人体自身氨甲酰化蛋白所具有的抗原表位并不完全相同；2、氨甲酰化胎牛血清中包含大量可与人类血清样本中anti-CarpAb抗体及其他免疫球蛋白非特异性相互作用的蛋白质及其它复杂组分，导致实验的背景值高，从而对结果分析产生干扰；3、氨甲酰化胎牛血清难以重复制备，存在着批间差异，可能会对实验结果复现性产生影响；4、检测的anti-CarpAb的亚型仅为IgA和IgG、并未对IgM和IgD型抗体进行检测；5、采用免疫印迹法(Immunoblotting)进行检测时实验步骤较为复杂、不同检测机构的实验操作标准不一、耗时长、不能实现全自动高通量分析及采用动物血清作为二抗进行检测时在印迹膜上产生的非特异性检测条带对实验结果的干扰。专利WO2016/014612A2中的检测方法存在的缺陷是采用的是ELISA间接法对anti-CarpAb进行检测，检测背景值较高、灵敏度较低、线性范围窄、易产生假阳性的实验结果；同时针对检测不同亚型的抗体，需要采用相应的酶标二抗进行检测，实验操作较为繁琐。由此可见，现有的抗-Carp抗体检测方法均为非均相反应体系，其存在检测背景值较高、选择性及重复性较差、灵敏度较低、线性范围窄、反应速度较小、易产生假阳性的实验结果等问题。因此，为了克服现有检测技术中存在的上述缺陷，需要研究开发出一种抗原特异性强、信号放大效果好、灵敏度高、线性范围宽、操作简单、测试更稳定的用于检测anti-CarpAb的均相免疫化学发光检测试剂盒。
技术实现思路
为解决上述技术问题，本专利技术提供了一种抗-Carp抗体的均相免疫检测试剂盒。该试剂盒采用高灵敏度和特异性的氨甲酰化人血清白蛋白作为抗原结合均相免疫化学发光检测技术制成，其具有特异性强、信号放大效果好、灵敏度高、线性范围宽、操作简单、稳定性好和精密度高的优点。为此，本专利技术第一方面提供检测抗-Carp抗体或所述抗-Carp抗体与至少一种抗原形成的免疫复合物的存在的试剂在制备用于采用均相免疫检测方法通过下列步骤评价受治疗者的类风湿性关节炎的试剂中的用途：a)提供来自怀疑患有类风湿性关节炎的受治疗者的待测样品；b)检测所述待测样品中抗-Carp抗体或所述抗-Carp抗体与至少一种抗原形成的免疫复合物；其中，所述抗-Carp抗体或免疫复合物的存在指示受治疗者的类风湿性关节炎，所述待测样品选自血液、血液衍生物、血清、血浆、尿液、脑脊髓液、唾液、滑液和肺气肿积液。在本专利技术的一些实施方式中，所述步骤还包括检测抗-Carp抗体或所述抗-Carp抗体与抗原形成的免疫复合物的含量。在本专利技术的一些优选的实施例中，基于抗-Carp抗体标准工作曲线来确定待测样品中抗-Carp抗体的含量。在本专利技术的一些实施方式中，所述步骤还包括将所测得的抗-Carp抗体或所述抗-Carp抗体与至少一种抗原形成的免疫复合物的含量，与正常对照样品、类风湿性关节炎对照样品或来自同一受治疗者的治疗前样品中所述抗-Carp抗体或所述抗-Carp抗体与至少一种抗原形成的免疫复合物的含量进行比较。根据本专利技术，所述步骤包括将所述样品与包含能够与抗-Carp抗体特异性结合形成免疫复合物的至少一种抗原。在本专利技术的一些实施方式中，所述抗原包括能够与抗-Carp抗体的抗原表位第一结合位点特异性结合的第一抗原以及能够与抗-Carp抗体的抗原表位第二结合位点特异性结合的第二抗原，其中所述抗原表位第一结合位点和所述抗原表位第二结合位点不相重叠。在本专利技术的一些实施方式中，所述第一抗原与受体结合，所述受体能够与单线态氧反应生成可检测的化学发光信号。本专利技术中，所述受体包含烯烃化合物和金属螯合物，其为非粒子形式，且在含水介质中可溶；和/或，所述受体为填充有发光化合物和镧系元素的高分子微粒。在本专利技术的一些实施方式中，所述第一抗原和第二抗原为氨甲酰化抗原，优选所述氨甲酰化抗原为氨甲酰化人血清白蛋白。在本专利技术的一些实施例中，所述人血清白蛋白的氨基酸序列如SEQIDNo.1所示。为此，本专利技术第二方面提供了一种用于检测抗-Carp抗体的均相免疫检测试剂套装，其包括：组分a，其包含能够与单线态氧反应生成可检测信号的受体以及与之结合的第一抗原，所述第一抗原的抗原表位能够与抗-Carp抗体的抗原表位第一结合位点特异性结合；组分b，其包含能够与抗-Carp抗体的抗原表位第二结合位点特异性结合的第二抗原，抗-Carp抗体的抗原表位第一结合位点和抗原表位第二结合位点不相重叠；组分c，其包括能够在激发状态产生单线态氧的供体。根据本专利技术，所述第一抗原和第二抗原为氨甲酰化抗原；优选所述氨甲酰化抗原为氨甲酰化人血清白蛋白。在本专利技术的一些实施例中，所述人血清白蛋白的氨基酸序列如SEQIDNo.1所示。根据本专利技术的一些实施方式，所述试剂套装还包括作为校准品的抗-Carp抗体纯品，所述校准品被校准品稀释液按照比例梯度稀释成不同浓度的工作校准品溶液。本专利技术中，所述第二抗原与特异性结合配对物中的一员结合，而所述供体与特异性结合配对物中的另一员结合。在本专利技术的一些实施方式中，所述第二抗原与生物素结合，而所述供体与链霉亲和素结合。在本专利技术的一些实施例中，所述受体及与之结合的第一抗原的浓度为10-200μg/mL，优选20-150μg/mL，更优选25-100μg/mL。在本专利技术的另一些实施例中，所述第二抗原及与之结合的特异性结合配对物中的一员的浓度为0.1-10μg/mL，优选0.5-5μg/mL，更优选1-3μg/mL。本专利技术中，所述受体包含烯烃化合物和金属螯合物，其为非粒子形式，且在含水介质中可溶；和/或，所述受体为填充有发光化合物和镧系元素的高分子微粒。本专利技术中，所述供体为光活化的或化学活化的敏化剂，其为非粒子形式，且在含水介质中可溶；和/或，所述供体为填充有感光化合物的高分子微粒，在光激发下能够产生单线态氧。本专利技术第三方面提供了一种用于检测抗-Carp抗体的均相免疫检测试剂盒本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.检测抗‑Carp抗体或所述抗‑Carp抗体与至少一种抗原形成的免疫复合物的存在的试剂在制备用于采用均相免疫检测方法通过下列步骤评价受治疗者的类风湿性关节炎的试剂中的用途：a)提供来自怀疑患有类风湿性关节炎的受治疗者的待测样品；b)检测所述待测样品中抗‑Carp抗体或所述抗‑Carp抗体与至少一种抗原形成的免疫复合物；其中，所述抗‑Carp抗体或免疫复合物的存在指示受治疗者的类风湿性关节炎，所述待测样品选自血液、血液衍生物、血清、血浆、尿液、脑脊髓液、唾液、滑液和肺气肿积液。

【技术特征摘要】
1.检测抗-Carp抗体或所述抗-Carp抗体与至少一种抗原形成的免疫复合物的存在的试剂在制备用于采用均相免疫检测方法通过下列步骤评价受治疗者的类风湿性关节炎的试剂中的用途：a)提供来自怀疑患有类风湿性关节炎的受治疗者的待测样品；b)检测所述待测样品中抗-Carp抗体或所述抗-Carp抗体与至少一种抗原形成的免疫复合物；其中，所述抗-Carp抗体或免疫复合物的存在指示受治疗者的类风湿性关节炎，所述待测样品选自血液、血液衍生物、血清、血浆、尿液、脑脊髓液、唾液、滑液和肺气肿积液。2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述步骤还包括检测抗-Carp抗体或所述抗-Carp抗体与抗原形成的免疫复合物的含量。3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，基于抗-Carp抗体标准工作曲线来确定待测样品中抗-Carp抗体的含量。4.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述步骤还包括将所测得的抗-Carp抗体或所述抗-Carp抗体与至少一种抗原形成的免疫复合物的含量，与正常对照样品、类风湿性关节炎对照样品或来自同一受治疗者的治疗前样品中所述抗-Carp抗体或所述抗-Carp抗体与至少一种抗原形成的免疫复合物的含量进行比较。5.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述步骤包括将所述样品与包含能够与抗-Carp抗体特异性结合形成免疫复合物的至少一种抗原结合。6.根据权利要求1-5中任意一项所述的用途，其特征在于，所述抗原包括能够与抗-Carp抗体的抗原表位第一结合位点特异性结合的第一抗原以及能够与抗-Carp抗体的抗原表位第二结合位点特异性结合的第二抗原，其中抗-Carp抗体的抗原表位第一结合位点和抗原表位第二结合位点不相重叠。7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于，所述第一抗原与受体结合，所述受体能够与单线态氧反应生成可检测的化学发光信号。8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述受体包含烯烃化合物和金属螯合物，其为非粒子形式，且在含水介质中可溶；和/或，所述受体为填充有发光化合物和镧系元素的高分子微粒。9.根据权利要求6所述的用途，其特征在于，所述第一抗原和第二抗原为氨甲酰化抗原；优选所述氨甲酰化抗原为氨甲酰化人血清白蛋白，进一步优选所述人血清白蛋白的氨基酸序列如SEQIDNo.1所示。10.一种用于检测抗-Carp抗体的均相免疫检测试剂套装，其包括：组分a，其包含能够与单线态氧反应生成可检测信号的受体以及与之结合的第一抗原，所述第一抗原的抗原表位能够与抗-Carp抗体的抗原表位第一结合位点特异性结合；组分b，其包含能够与抗-Carp抗体的抗原表位第二结合位点特异性结合的第二抗原，抗-Carp抗体的抗原表位第一结合位点和抗原表位第二结合位点不相重叠；组分c，其包括能够在激发状态产生单线态氧的供体。11.根据权利要求10所述的试剂套装，其特征在于，所述第一抗原和第二抗原为氨甲酰化抗原；优选所述氨甲酰化抗原为氨甲酰化人血清白蛋白；进一步优选所述人血清白蛋白如SEQIDNo.1所示。12.根据权利要求10或11所述的试剂套装，其特征在于，所述试剂套装还包括作为校准品的抗-Carp抗体纯品，所述校准品被校准品稀释液按照比例梯度稀释成不同浓度的工作校准品溶液。13.根据权利要求10-12中任意一项所述的试剂套装，其特征在于，所述第二抗原与特异性结合配对物中的一员结合，而所述供体与特异性结合配对物中的另一员结合。14.根据权利要求13所述的试剂套装，其特征在于，所述第二抗原与生物素结合，而所述供体与链霉亲和素结合。15.根据权利要求10-14中任意一项所述的试剂套装，其特征在于：所述受体及与之结合的第一抗原的总浓度为10-200μg/mL，优选20-150μg/mL，更优选25-100μg/mL；和/或，所述第二抗原及与之结合的特异性结合配对物中的一员的总浓度为0.1-10μg/mL，优选0.5-5μg/mL，更优选1-3μg/mL。16.根据权利要求10-15中任意一项所述的试剂套装，其特征在于，所述受体包含烯烃化合物和金属螯合物，其为非粒子形式，且在含水介质中可溶；和/...

【专利技术属性】
技术研发人员：廖智星，饶星，刘宇卉，李临，其他发明人请求不公开姓名，
申请(专利权)人：北京科美生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11